CCK8检测细胞增殖毒性的原理、方法及注意事项.doc
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1、C8检测细胞增殖/毒性得原理、方法及注意事项一、K检测细胞增殖/毒性得原理Cell Countg Kit8(简称CCK8)试剂可用于简便而准确得细胞增殖与毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有W8【化学名:2-(2-甲氧基4-硝基苯基)3-(-硝基苯基)5(2,4-二磺酸苯)2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MehoxyPMS)得作用下被细胞中得脱氢酶还原为具有高度水溶性得黄色甲瓒产物(Frza dye)。生成得甲瓒物得数量与活细胞得数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖与毒性分析。用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验C8得优点:
2、 使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素与有机溶剂; CCK8法能快速检测; CK8法得检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度; K-法得重复性优于MTT 法; CCK-法对细胞毒性小; CCK8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。CCK得缺点: 与MTT法相 比,CCK8与XT得价格比较贵、 CC8试剂得颜色为淡红色,与含酚红得培养基颜色接近,不注意得话容易产生漏加或多加。与以往得增殖毒性测定试剂相比较:检测方法TT法XT法ST1法CK8法甲臢产物得水溶性差(需加有机溶剂溶解)好好好产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用现配现用即开即用即开即用检测灵敏度
3、高很高很高高检测时间较长较短较短最短检测波长60600nm42-8nm20480n49nm细胞毒性高,细胞形态完全消失很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷二、C8检测细胞增殖毒性得方法实验一:细胞增殖分析1、制备细胞悬液:细胞计数2、接种到孔板中:根据合适得铺板细胞数,每孔约100ul细胞悬液,同样得样本可做3个重复。、37培养箱中培养:细胞接种后贴壁大约需要培养-小时,如果不需要贴壁,这步可以省去。4、加入1ulCK8:由于每孔加入CK8量比较少,有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差,
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