高效液相色谱测定乳制品饮料中的5种食品添加剂.pdf

第 5期(总第 2 8 0期)2 0 1 2年 5月 农产品加工 学刊 A c a d e m i c P e ri o d i c a l o f F a r m P r o d u c t s P r o c e s s i n g No 5 Ma v 文章编号：1 6 7 1 9 6 4 6(2 0 1 2)0 5-0 1 1 7 0 3 高效液相色谱测定乳制品饮料中的 5种食品添加剂 郝 家勇，唐 宗贵，王远，鲁立 良 (新疆农垦科学院 分析测试中心，新疆 石河子 8 3 2 0 0 0)摘要：建立了高效液相色谱法同时测定乳制品饮料中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、甲基香兰素和乙基香兰素的方法，通过加入适量的沉淀剂除去样品中的蛋白质，采用 C 色谱柱分离，以甲醇+乙酸铵溶液(0 0 2 m o l L)(2 0+8 0)为 流动相，用紫外检测器在 2 3 0 n m波长处检测 5种添加剂。5种添加剂的回收率为 7 9 4 1 0 1 3，相对标准偏差为 0 2 一 4 2，糖精钠、苯甲酸、山梨酸、甲基香兰素的检出限为 0 0 4 I g g，乙基香兰素的检出限为 0 0 8 I x g g，该方 法适用于乳制品饮料中这 5种添加剂的同时测定。关键词：高效液相色谱；乳制品饮料；添加剂 中图分类号：T S 2 5 7 4 文献标 志码：A d o i：1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 6 7 1 9 6 4 6(X)2 0 1 2 0 5 0 3 7 HP L C De t e r mi n e F i v e Ki n d s 0 f Ad d i t i v e s i n Mi l k a n d Da i r y P r o d u c t s HAO J i a-y o n g,I IANG Z o n g-g u i，WANG Yu a n，L U I A-l l a n g (T e s t i n g a n d A n a l y s i s C e n t e r，X i n j i a n g A c a d e my o f A g r i c u l t u r a l a n d R e c l a ma t i o n S c i e n c e，S h i h e z i，X i n j i a n g 8 3 2 0 0 0，C h i n a)Ab s t r a c t：A me t h o d f o r s i mu l t a n e o u s d e t e r mi n a t i o n o f s o r b i c a c i db e n z o i c a c i d，s a c c h a rin，me t h y l v a n i l l i n，e t h y l v a n i H i n i n mi l k a n d d a i r y p r o d u c t s u s i n g h i g h p e r f o r man c e l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y(HP L C)i s d e v e l o p e d ，r h e p r o t e i n s i n mi l k a n d d a i r y p r o d u c t s a r e e l i mi n a t e d b y p r e c i p i t a n t T h e fi v e k i n d s o f a d d i t i v e s a r e s e p a r a t e d o n Cl8 c o l u mi l wi t h the mo b i l e p h a s e o f me t h a n o l+a m mo n i u m a c e t a t e s o l u t i o n(0 0 2 mo l几)(2 0+8 0)Wi t h U V d e t e c t o r，S O r b i c a c i d，b e n z o i c a c i d，s a c c h a r i n，me t h y l v a n i l l i n an d e t h y l v an i H i n are d e t e c t e d a t 2 3 0 n mRe c o v e r i e s o f t h e fi v e a d d i t i v e s a r e 7 9 4 1 0 1 3 ，RS D are O 2 一 4 2 T h e d e t e c t i o n l i mi t s o f s o r b i c a c i d b e n z o i c a c i d，s a c c h a r i n，me 山Y l v a n i H i n a r e 0 0 4 t L g g，a n d d e t e c t i o n l i mi t o f e t hy l v a ni l l i n i S 0 08 g Th i s me t ho d c a n b e us e d for t l l e r o ut i ne a na l y s i s o f t he s e a d di tiv e s i n mi l k a n d d a i ry p r o du c t s Ke y w o r d s：HP LC；mi l k a n d d a i r y p r o d u c t s；a d d i t i v e s 食 品添加剂是指在食 品加工过程 中为 了改善食 品品质 和色、香、味及 防腐等需求，人为添加到食 品中的化学合成物质或天然物质。随着食 品工业 的 迅速发展，目前食品添加剂的种类 已达 2 5 0 0 0多种。我国 2 0 0 7 年发布的(食品添加剂使用卫生标准 11 中，允许使用 2 2 类食品添加剂 2 0 0 0 多种。在我国，随着食品安全事件的频繁发生，人们 对食 品 中的各 种添加剂 的安全性 日益关注。在乳制品饮料 中，常 见的人工合成甜味剂，如糖精钠、安塞蜜等，防腐 剂如苯 甲酸、山梨酸等，增味剂 如甲基 香兰素、乙 基香兰素等，也越来越受到人们的关注。饮料 中的 甜 味剂 和防腐剂 的测定方 法主要有高效 液相 色谱 法 和气相色谱法、质谱法8 1，食品中的增味剂 甲基香 兰素、乙基香 兰素 的测定方法主要有高效液相 色谱 法【9 _ l”。文献中的检测方法主要都是针对一类或两类 添加剂进行 的检测，满足不 了对乳制 品饮料 中多类 食 品添加剂 的同时检测。本文通过沉淀样 品中的蛋 白质和脂肪等干扰物，合理选择流动相和检测波长，同时测定了乳制品饮料中的苯甲酸、山梨酸、糖精 钠、甲基香兰素和乙基香 兰素 5种 添加剂，方法灵 敏度高，结果准确可靠。1 材料与方法 1 1 试剂与仪器 苯甲酸、山梨酸、糖精钠、甲基香兰素和乙基香 兰素(纯度t9 9)，S i g ma 公司提供；甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)，C N W 公司提供；实验室用水均为蒸 馏水，亚铁氰化钾水溶液(质量浓度 1 0 9 g L)；乙酸 锌 水溶液(质 量浓度 2 1 9 g L)乙酸铵溶 液(浓度 0 0 2 too l L)。Wa t r e s 2 6 9 5型高效液相色谱仪、配 Wa tr e s 2 4 8 7 型紫外检测器，Wa t r e s 公司提供；H1 6 5 0型高速离 心机，长沙湘仪离心机有限公司提供。收稿 日期：2 0 1 1-1 2 2 9 作者简介：郝家勇(1 9 7 7 一)，男，江苏人，硕士，高级实验师，研究方向：食品安全。E-m a i l：h a o j i a y o n g 2 0 0 2 1 6 3 c o m。农产品加工 学刊 2 0 1 2年第 5期 1 2 样品处理 直接吸取调 味奶、酸奶 及乳饮料 1 0 mL，移人 5 0 m L离心管，向样品中加入沉淀剂，振荡器振荡使 其充分混匀，转速 1 0 0 0 0 r mi n离心 5 m i n，将上清 液转人 5 0mL容量瓶，蒸馏水定容，摇匀，过 0 4 5 tx m 滤膜，上机待用。1-3 色谱条件 色谱柱：C 1 8 柱(1 5 0 m mx 4 6 mm，5 la,m)，2 4 8 7 型紫外检测器；检测波长：2 3 0 n m；流动相：甲醇+乙酸氨(浓度 0 0 2 mo U L)，流速：1 0 mL mi n。1 4 标准曲线配制 精确称量 2 5 mg山梨酸、苯 甲酸、糖精钠、甲 基香兰素和 乙基香兰素标准品，置于 2 5 O 0 mL容量 瓶中，甲醇定容至刻度线，配制成质量浓度 1 O 0 mg mL 标准储备液。使用前吸取适量的标 准储备液用纯水 配制 系列混合标准溶液，再经 0 4 5 I z m滤膜过滤备 用，进样量 1 O ，以样品峰面积与标准品峰面积比 值定量。2结果与讨论 2 1 色谱条件优化 试验考察 了不同流动相及配 比对分离效果的影 响，试验结果表 明，流动相 中有机相为 甲醇时，待 测组分具有较好 的响应值 和较 高的灵敏度，本试验 还考察乙酸铵、磷酸二氢钾溶液对待测组分 的影响，2种溶液对待测组分洗脱效果相差不大，从仪器的维 护等方面考虑，本试验选择 乙酸铵溶液作 为流动相 部分。不 同流动相 的配 比也会 对待测组分 的分离效果 产生重要影 响，试验结果表明，当 甲醇的体积分数 为 2 0 时，5个待测组分具有较好的分离度，均可实 现基线分离。标准样品色谱见图 1。0 07 0 0 6 0 05 O O 4 0 03 002 0 Ol 00 0 1 一糖精钠；2 一苯甲酸；3 一山梨酸；4 一甲基香兰素；5 一乙基香兰素 图 1 标准样品色谱 从图 1 可 以看到，这5种添加剂具有尖锐、对称 的峰形和良好的分离效果。2 2 不同沉淀剂对结果的影响 本试验考察 了不同沉淀剂对分析结果的影响，分别使用体积分数 5 高氯酸、亚铁氰化钾(质量浓 度 1 0 9 g，L)、乙酸锌(质量浓度 2 1 9 g L)溶液 和乙 腈作为沉淀剂，试验结果表明这 3种沉淀剂 中乙腈 沉 淀蛋 白质效果最好，沉淀蛋 白质后 的空 白样 品，杂峰最少，干扰物 响应最低。因此，本试验选 择乙 腈作为沉淀剂。亚铁氰化钾、乙酸锌溶液沉淀蛋 白质后 空 白样 品色谱见图 2，高氯酸溶液沉淀蛋白后空白样品色谱 见图 3，乙腈沉淀蛋白后空白色谱见图4。图 2 亚铁氰化钾、乙酸锌溶液沉淀蛋 白质后空白样 品色谱 图 3 高氯酸溶液沉淀蛋白后 空白样品色谱 0 60 0 50 0 40 0 3 0 0 20 01 O 0 0 0 图 4乙腈沉淀蛋 白后空 白色谱 2 3 标准曲线和检出限 用纯水配制不 同质量浓度的混合标准溶液系列，混 合 标 准 溶 液 质 量 浓 度 依 次 为 0 0 5，0 1，0 2，0 5，1 0，5 0，1 0 0，2 0 0，5 0 0 g m L，在 优化 后 色谱条件下分别进行测定，以峰面积对质量浓度进 行线性拟合，得到 5 种待测组分的回归方程、线性 相关系数和线性范围，以 3倍信 噪比(s )进样浓 度为检出限。5种添加剂的标准曲线、相关系数、线性范围和 检出限见表 1。2 4 方法精密度及回收率 称取空 白样 品，加入一定量 的混合标准溶液进 MH m嘶 0 O 0 0 O O O 0 O O 0 O O 2 0 1 2 年第5 期 郝家勇，等：高效液相色谱测定乳制品饮料中的 5 种食品添加剂 1 1 9 5种添 加剂的标准 相 系数、线性范晰 啦出限 3结论S N I =3)一 行加标 回收试验，每个样品测定 3次，取平均值计 算回收率，对同一个空白样品，加入 1 0 g m L标准 混合溶液 1 0 0 m L，平行测定 7 次，计算测定值的相 对标 准偏差。5种添加剂回收率和精密度见表 2。表 2 5种添加剂 回收率和精密度(n=7)2 5 实际样品测定 应用本试验 所建立的方法对市售的 5种乳制 品 饮料进行 了检测，5种乳制品饮料均含有防腐剂，2种乳制品饮料含有 甲基香 兰素。本文建立的高效液相色谱法测定乳制品饮料中 的糖精钠、苯 甲酸、山梨 酸、甲基香 兰素和 乙基香 兰素，具有重现性好、准确度高，适用于乳制品饮 料中添加剂的 日常检测。参考文献：1 1 G B 2 7 6 0-1 9 9 6食品添加剂使用卫生标准【s】北京：中 国标准出版社，1 9 9 6 2】G B T 5 0 0 9 2 9 _ 0 o 3食品中山梨酸、苯 甲酸的测定【S】北京：中国标准出版社，2 0 0 3 3 3 G B f r 5 0 0 9 2 8-2 0 0 3食品中糖精钠的测定【S 1北京：中国标准 出版社，2 0 0 3 4 陈子雷，张红气相色谱法测定糕点中的山梨酸和苯甲 酸的含量 J 1食品与药品，2 0 0 6，8(1 1)：5 3 5 5 5 5 张世满H P L C法测定乳制品中的苯甲酸、山梨酸、糖 精钠方法研究 J 安徽预防医学杂志，2 0 0 3，9(1)：1 9-2 3 6 赵立达，邬晨阳，马建明高效液相色谱法测定乳制品 饮料中的 2种防腐剂和 3 种甜味剂 f J 中国卫生检验 杂志，2 0 0 8，1 8(6)：1 0 5 4 1 0 5 6 7】宋戈，姜金斗，张秋梅乳及乳制品中多种防腐剂的甜 味剂的同时测定 J 1 色谱，2 0 1 0，2 8(3)：3 2 3 2 6 8】陈琦，凌云，张峰，等搅拌棒吸附结合气相色谱，质 谱 质谱法同时测定饮料和果酱中的7种防腐剂 J】分 析化学，2 0 1 0，3 8(8)：1 1 5 6 1 1 6 0 9】金海涛，马健瑜，王晓殉，等高效液相色谱法同时测 定香兰素与邻位香兰素 J 分析测试学报，2 0 1 1，3 0 (2)：2 2 2 2 2 4 【l O 田艳玲，王浩，刘艳琴，等固相萃取 H P L C法同时测 定食品中乙基麦芽酚和香兰素 J 食品研究与开发，2 0 0 7，2 8(1 1)：1 3 8 1 3 9 1 1 刘祥萍，黄薇高效液相色谱法同时测定食品中的甲基 香兰素和乙基香兰素 叨 中华预防医学杂志，2 0 0 6，4 0 (4)：2 9 6 2 9 7 (上接第 1 1 3页)分远 超过 鲜 肉挥 发性 盐基 氮 限量要求。按 照标 准 S B T 1 0 3 7 9-2 0 0 4速冻调制食品要求，挥发性盐基 氮限量为1 0 m g 1 0 0 g，若调理肉制品在制作过程 L Z J 中使 用 了以上 几种挥发 性盐基氮 含量较高 的调料，则有 可能导 致产 品的挥 发性盐基 氮含量超 过 限量，成为不合格的产品。所 以，在确定产品生产工艺和 标 准 制定时，要 充分考 虑到调料 和添加剂 的影响，采用适宜 的生产工艺或适当的标准，避免 出现 因为 5 1 辅料导致产品挥发性盐基氮不合格的情况。参考文献：6】1 上海市食品卫生监督检验所 G B T 5 0 0 9 4 4-2 0 0 3肉与 肉制品卫生标准的分析方法【S】北京：中国标准出版 社，2 0 0 3 邵金良，杨芳肉与肉制品中挥发性盐基氮测定方法的 改进 J 肉类研究，2 0 0 9，1 2 8(1 0)：5 8 6 0 高士昌肉在鲜腐过程中总挥发性盐基氮变化规律性的 分析 J 肉品卫 生，1 9 9 6(1 1)：1 7 1 9 霍金文，安守明，王洪奇关于测定挥发性盐基氮过程 中几个问题的探讨【J】动物检疫，1 9 9 0(5)：4 2 4 3 北京市卫生防疫站，邯郸市卫生防疫站 G B T 5 0 0 9 3 9 2 0 0 3酱油卫生标准的分析方法 s 北京：中国标准出 版社，2 0 0 3 G B 8 8 1 7-2 0 0 1 食品添加剂 焦糖色【S】北京：中国标 准 出版社，2 0 0 1