单个核细胞.pptx
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1、第十四章第十四章 免疫细胞的分离及其表面标志检测技术免疫细胞的分离及其表面标志检测技术免疫细胞的分离免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离淋巴细胞的分离 T T细胞和细胞和B B细胞的分离细胞的分离 T T细胞亚群的分离细胞亚群的分离 外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞分离 外周血单个核细胞(外周血单个核细胞(peripheral mononuclear peripheral mononuclear cells,PMNCcells,PMNC)包括淋巴细胞和单核细胞包括淋巴细胞和单核细胞(monocytemonocyte)。)。FicollFicoll分离液法
2、主要用于分离外周血中的单个分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞,是一种单次差速密度梯度离心的分离核细胞,是一种单次差速密度梯度离心的分离法。法。细胞分选和基本原理细胞分选和基本原理不同细胞密度不同不同细胞密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同不同细胞表面分化抗原不同不同细胞密度不同不同细胞密度不同人的红细胞密度为人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为粒细胞密度为1.092 单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的密度为密度为1.076-1.090 不同细胞密度不同不同细胞密度不同用用1.0770.0011.0770
3、.001的分层液可将细胞分离的分层液可将细胞分离 密度梯度离心密度梯度离心(Ficoll)(Ficoll)离心离心淋巴细胞分离淋巴细胞分离(去单核细胞)(去单核细胞)贴壁粘附法贴壁粘附法 吸附柱过滤法吸附柱过滤法 磁铁吸引法磁铁吸引法 Percoll Percoll 分离液法分离液法 (连续密度梯度离心)(连续密度梯度离心)E E花环沉降法花环沉降法 尼龙毛柱分离法尼龙毛柱分离法 T T细胞和细胞和B B细胞的分离细胞的分离T T细胞亚群的分离细胞亚群的分离 亲和板结合分离法亲和板结合分离法 磁性微球分离法磁性微球分离法 荧光激活细胞分离仪分离法荧光激活细胞分离仪分离法 细胞表面分化抗原(细胞
4、表面分化抗原(CD抗原)抗原)适用于适用于T T、B B细胞的分离细胞的分离已知已知CDCD抗原细胞亚群的分离抗原细胞亚群的分离未知未知CDCD抗原细胞亚群的分离抗原细胞亚群的分离(阴性分选)(阴性分选)磁珠大小可以选择磁珠大小可以选择大小免疫磁珠分离细胞的特点比较大小免疫磁珠分离细胞的特点比较 比较项目比较项目大磁珠大磁珠小磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞的影响对对细细胞胞造造成成机机械械压压力力,影影响响其其生生物物学学活活性性,不不利利于于分分离离后培养。后培养。对对细细胞胞温温和和,不不影影响响分分离离细细胞的后续培养。胞的后续培养。对流式细胞仪的影响对流式细胞仪的影响阻阻塞塞流流式式细细
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