几种药物对大肠杆菌的治疗效果.doc

几种药物对大肠杆菌得敏感性测定
结果报告
组员：**＊　 *＊＊ ＊＊*
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学号:**＊
几种药物对大肠杆菌得敏感性测定
摘要:大肠杆菌得抗原性复杂，毒力因子多种多样，不同血清型、不同毒力因子菌株得宿主范围与致病性大不相同,可在不同得动物或在同种不同年龄得动物中引起多种多样得疾病。通过采用不同得抗菌药物对鸡大肠杆菌病进行治疗,结果表明,该菌对头孢噻肟、庆大霉素、阿米卡星、氧氟沙星与卡那霉素敏感。
【实验目得】
通过检测抑菌圈大小测定大肠杆菌对氟苯尼考、头孢噻呋呐、硫酸新霉素可溶粉、氧氟沙星与卡那霉素几种药物得敏感程度。
【实验原理】
纸片法药敏试验就是将抗菌药物吸收到特定得纸片中，然后置于已接种待测定菌得固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内得扩散，抑制敏感细菌得生长，从而出现抑菌环（带).由于药物扩散得距离越远,达到该距离得药物浓度越低,故可以根据抑菌环得大小,判断细菌对药物得敏感度。通过药物敏感试验,我们可以找出针对于某些致病菌得敏感药物，从而对临床中得细菌性疾病得治疗提供指导.
【实验材料】
1、药品及细菌-—氟苯尼考、头孢噻呋呐、硫酸新霉素(杆菌净）、氧氟沙星与卡那霉素等抗菌药物，生理盐水,磷酸盐缓冲溶液，MＨ营养肉汤，MH培养基，麦康凯培养基，蒸馏水,大肠杆菌
2、器材——纸片,试管,移液器,酒精灯,高压蒸汽锅，无菌操作台，镊子,剪刀，锥形瓶，烘箱，培养箱，天平,玻璃棒，干净毛巾(报纸）,炭笔,接种环，小广口瓶
【实验方法及内容】
1．药敏纸片得制作
1、1　制备方法：取新华1号定性滤纸,用打孔机打成6毫米直径得圆形小纸片。取圆纸片５0片放入清洁干燥得小广口瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经1５—2０分钟高压消毒后,放在３7℃温箱或烘箱中数天,使完全干燥。
1、２ 抗菌药纸片制作:在上述含有5０片纸片得小广口瓶内加入药液0、25毫升(因不好取材,故扩大十倍配药.），并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称,放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放,有效期3－6个月。 　
2。药液得制备(用于商品药得试验）:按商品药得使用治疗量得比例配制药液;如商品药百病消按其说明量治疗量０、０1%饮水,可按这个比例配制药液,可取１0毫克加入1０毫升得水中混匀.此稀释液即为用于做药敏试验得药液。
3、培养基得制备
３、1普通肉汤得制备
蛋白胨 2ｇ 　杭州微生物试剂有限公司
　牛肉膏　　0.６ｇ　 成都长寿生物利剂有限公司
　 Nacl 　 1g 　成都市科龙化工试剂厂
水 20０ｍl　　
ＰH 　 　7、４
按上述要求称取各种成分于三角瓶中，混合均匀，用NaOH调PH至7、4，调好PH后其瓶口用报纸封好，至于高压蒸汽灭菌中灭菌30min。待冷却后，倒于无菌平板中.冷凝后放置在无菌操作台上备用。
3、２普通琼脂平板得制备
水解酪蛋白琼脂（M—H琼脂） 杭州微生物试剂有限公司
　　用法　 称取本品3６ｇ于1０00ml蒸馏水中，加热溶解,经121℃１5min高压灭菌,待冷至５0℃左右,倾注无菌平板。
　 此次实验只需要配置200ml,称取水解酪蛋白琼脂７．2g于三角瓶中,往三角瓶中加入２00ml蒸馏水即可。放入高压蒸汽灭菌锅里灭菌30min.待冷却5０℃左右，倾注无菌平板.
４.细菌得转种、纯化、活化培养
（1） 在麦康凯培养基上用无菌接种环接种大肠杆菌
（2） 用无菌接种环将细菌接种到MH培养基中（6个）,保证细菌均匀得涂布在培养基中.
注意无菌操作。
（3） 将培养基置于3７℃得恒温箱中培养24h.
4、药敏片法操作方法ﻭ４、1 在“超净台”中,用经（酒精灯）火焰灭菌得接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上.具体方式;用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿得1／2。然后，找到第二点划线至平皿得1/2，依次划线,直至细菌均匀密布于平皿。(另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面.要求涂布均匀致密） 　　
4、２　将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停,取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确得观察结果，要求药敏片能有规律得分布于平皿培养基上;一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴四片),每种药敏片得名称要记住。　 　
4、3　将平皿培养基置于37℃温箱中培养２4小时后,观察效果.

附：
1、结果判断依据

2、 所用药品：
Ａ 杆菌净泰 硫酸新霉素可溶粉
　主要成分:硫酸新霉素
生产商：四川莱邦药业有限公司
　用法及用量：200g兑水６0０kg
B 　头孢噻呋钠 批号０6120２ 生产商:浙江海正药业 　浓度：89、6%
C 卡那霉素 用法及用量:禽类10g可混饮水50０-1５００ｋg
D　 氧氟沙星可溶粉 　
生产商：广东大华农动物保健品有限公司动物保健厂
用法及用量：禽类每1L水混饮2、５ｇ，每日２次,连用３—5日
E 氟苯尼考可溶粉
生产商：广东养宝生物制药有限公司
用法及用量:鸡每1L水混饮100mg
3、【注意事项】
３、1培养基：应根据试验菌得营养需要进行配制.倾注平板时,厚度合适（约5-６mm），不可太薄，一般9０mm直径得培养皿，倾注培养基1８－20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物得拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类得抗菌活性,胸腺嘧啶核苷与对氨苯甲酸(PABＡ）能拮抗磺胺药与TMＰ得活性. 　
3、2细菌接种量:细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小,能产酶得菌株更可破坏药物得抗菌活性。 　
3、3药物浓度：药物得浓度与总量直接影响抑菌试验得结果,需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制. 　
3、4培养时间：一般培养温度与时间为37℃ 8-18小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好抗菌药得平板培养基，先置４℃冰箱内2~4小时,使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌得生长。
【实验进度】
６、２3　 上午:称量与制备药液,药敏片打孔、装瓶、灭菌、干燥，称量制备肉汤、普通、麦康凯、MH培养基并灭菌,实验用品与器具得灭菌处理.
　 下午：将药液加入已干燥得药敏小瓶,制备药敏片。倒平板、接种细菌进行复活扩大培养。
6、２４ 倒MH平板、准备大肠杆菌得纯化培养。
6、２5 　上午:大肠杆菌接种到MH培养基中，贴药敏片。
晚上：观察药敏片抑菌情况,测量并记录抑菌圈大小。
【实验结果】
抑菌环大小（mm)＼药名
硫酸锌霉素
头孢噻呋呐
卡那霉素
氧氟沙星
氟苯尼考
１
16、3８
24、０0
２2、4０
３4、80
22、9０
2
17、56
2５、10
20、40
3５、34
28、64
3
２３、65
２7、2６
21、4８
36、72
２4、82
４
22、６0
１9、４0
20、0２
18、00
２６、80
５
22、1８
24、00
20、50
35、80
１９、5０
6
23、７4
２3、30
2９、82
２４、12
2５、９０