ABO血型正、反定型.doc
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1、ABO血型正、反定型操作规程目得 保证AB血型鉴定准确,确保临床输血安全。适用范围 XXX医院输血科职责 具有专业技术得工作人员主要负责本院输血(或备血)标本得BO血型鉴定(但只对该单份标本负责)。相关文件 试剂采购、保存与使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存与报废管理程序紧急用血管理程序相关记录 仪器设备得采购、使用与维护记录 仪器得温度记录 恒温水温箱得换水与消毒记录 消毒液得配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接与报废记录 紧急用血记录实验原理 ABO血型就是根据红细胞表面存在得凝集原决定得。存在A凝集原得称为A型,存在B凝集原得称
2、为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时,会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素,型血清中含有抗凝集素,因此可以用标准血清中得凝集素与被测者得红细胞反应(称为正定型),用标准红细胞与被测者血清中得凝集素反应(称为反定型),以确定其ABO血型。 仪器器械 玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。试剂 抗A标准血清、抗B标准血清、型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件得正品。标本收集与处理受检者血清:采集受检者静脉血23ml,经1000
3、in离心1分钟或室温静置1小时后取上清。2.25%得受检者红细胞:采集受检者静脉血或末梢血,用生理盐水制成2红细胞盐水悬液备用,制备方法见本节质量控制与注意事项。 .标本出现中度以上溶血者,为不合格标本,不能用于检测。实验方法与步骤 1、BO血型得正定型(试管法): 、取2支试管,分别标上抗A与抗B; 、制备待测标本25%得红细胞悬液(取支试管,加入m生理盐水,再加入1滴待测标本红细胞,混匀备用); 、在抗A管中加入2滴抗标准血清,在抗B管中加入滴抗标准血清;、在抗与抗B管中分别加入1滴已制备好得待测标本25%红细胞悬液;、混匀后,立即对称放入离心机中进行100r/min离心1分钟,或室温静置
4、1小时,再轻轻摇动试管,使沉于管底得红细胞浮起,先肉眼观察有无凝集现象,如内眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强度,此有助于A、B亚型、类B或cisB得发现。BO血型抗A标准血清抗B标准血清A型+型-+型-A型+凝集强度判断标准十 红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。 3十 红细胞凝集成数小块,血清尚清晰。 十 红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。 十 肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。 土镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多 游离红细胞。 MF 混合凝集外观(mxefield)就是指镜下可见少数红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈
5、分散分布。 一 表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。2、ABO血型得反定型(试管法):、取3支试管,分别标上A、与O; 、在3支试管中分别加入2滴待测标本得血清; 、将ABO标准红细胞轻轻地充分混匀后,在A管中加入1滴A型标准红细胞,在管中加入滴型标准红细胞,在O管中加入1滴O型标准红细胞;、混匀后,对称放入离心机中进行000min离心1分钟(或400 r/n离心15秒);、取出后,先观察就是否溶血(溶血可能就是阳性结果,或者就是细菌污染),再轻轻摇动试管,肉眼观察有无凝集现象,肉眼不易分辨得用显微镜观察;根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强度,此有助于A、B亚型、类B或isAB得发现
6、。ABO血型A型标准红细胞型标准红细胞O型标准红细胞A型-B型-O型-AB型-凝集强度判断标准 (同B血型得试管法正定型)质量控制与注意事项1、分型标准血清试剂必须为三证齐全得合格产品,质量性能符合要求,且在有效期内使用。试剂开封后必须贴上注有开封日期与开封人得标签,使用后应及时置于28专用冰箱中保存,以免细菌污染与变质而影响试验结果。试剂开封后有效期为一周。2、商用分型标准红细胞试剂必须为三证齐全得合格产品,质量性能符合要求,且在有效期内使用;自制分型标准红细胞试剂必须以3个健康者同型新鲜红细胞混与,用生理盐水洗涤 13次,以除却存在于血清中得抗体及可溶性抗原,再制成2%得红细胞悬液备用。试
7、剂开封或制备后必须贴上注有开封或制备日期与开封人或制备人得标签,使用后应及时置于8专用冰箱中保存,以免细菌污染与变质而影响试验结果。试剂开封或制备后有效期为一周。3、生理盐水启用后,有效期为二周。4、所有试剂在使用时,必须检查就是否有浑浊、变色、凝集等变质现象;凡可疑者,必须更换新得试剂进行检测。若分型标准血清使用时间较长后,最好用已知得ABO标准红细胞检查结果就是否与已知得血型相符;若分型标准红细胞使用时间较长后,最好用已知得分型标准血清检查结果就是否与已知得血型相符,以防标准血清或红细胞制品污染、变质失效而造成鉴定错误。、试管、滴管与玻片必须清洁干燥,防止溶血。6、操作方法应按规定进行,一
8、般应先加血清,后加红细胞悬液,以便容易核实就是否漏加血清。7、IgM抗-A与抗与相应红细胞得反应温度以为最强,但为了防止冷凝集现象得干扰,一般仍在室温(204)内进行试验,3可使反应减弱。8、离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果。用试管法进行ABO血型得正定型时不能测出亚型(如AX),需延长作用时间。9、在反定型试验中,如果受检者得血清或血浆与O型标准红细胞产生阳性反应,则需要添加自身对照试验。如果自身对照试验为阳性,表明就是自身冷凝集素导致。如果自身对照试验为阴性,则表明被检者血清或血浆中可能存在B系统以外其它系统得抗体干扰,此时需做其它相关试验加以解决上述定型
9、问题。10、对含有较多自身冷凝集素得受检者,在使用标准血清进行正定型时往往被误定为AB型,遇到此种情况,需用3生理盐水洗涤受检者得红细胞23次,以去除吸附在红细胞上得冷凝集素,然后再鉴定血型。1、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列得区别。对于可疑结果,必须更换所用得试剂,重新检测。12、对于可能存在不完全抗原得时候,应在各反应中加入凝聚胺试剂,以检验不完全抗原得存在。13、判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误。14、25%红细胞悬液得配制:先用生理盐水洗涤红细胞次,再根据下表进行红细胞悬液得配制。悬液浓度(%)压积红细胞(滴)盐水(滴)40(2m)51 6 (0、8ml)
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