微生物的分离培养和接种技术.pptx
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1、微生物的分离培养和接微生物的分离培养和接种技术种技术河南师范大学河南师范大学环境科学与工程实验教学中心环境科学与工程实验教学中心实验目的、要求实验目的、要求(1 1)学学习习并并掌掌握握细细菌菌、放放线线菌菌、霉霉菌菌和和酵酵母母菌菌等等四四大大类类微微生物的稀释分离、划线分离等技术。生物的稀释分离、划线分离等技术。(2 2)学习从样品中分离、纯化出所需菌株。)学习从样品中分离、纯化出所需菌株。(3 3)了解四大类微生物的培养条件和培养时间。)了解四大类微生物的培养条件和培养时间。(4 4)学习平板菌落计数法)学习平板菌落计数法(下次实验)(下次实验)。以细菌为例以细菌为例以细菌为例以细菌为例
2、实验原理实验原理q纯种分离技术是微生物学中重要的基本技术之一。纯种分离技术是微生物学中重要的基本技术之一。分离分离:从混杂的微生:从混杂的微生物群体中获得单一菌株纯培养的方法。物群体中获得单一菌株纯培养的方法。纯种(纯培养)纯种(纯培养):一株菌种或一:一株菌种或一个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。q微生物的分离与纯化技术的应用:分离具有特殊功能的微生物、优良菌微生物的分离与纯化技术的应用:分离具有特殊功能的微生物、优良菌种及纯化被污染的菌种等。种及纯化被污染的菌种等。q土壤是微生物的大本营,混杂着大
3、量的微生物,从中分离可得到只含有土壤是微生物的大本营,混杂着大量的微生物,从中分离可得到只含有这一种微生物的纯培养。这一种微生物的纯培养。q稀释分离法稀释分离法有倾注法和涂布法两种;菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬有倾注法和涂布法两种;菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用液常用划线法划线法进行纯种分离。进行纯种分离。q要获得某种微生物的纯培养,还需提供有利于该微生物生长繁殖的要获得某种微生物的纯培养,还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适最适培养基及培养条件培养基及培养条件。q微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间详见微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间详见实验指导书实验指导书P
4、 P6767表格。细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基,在表格。细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基,在30-37 30-37 温度下培养温度下培养1-21-2天。天。q平板菌落计数平板菌落计数活菌计数活菌计数0.90.10.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.9ml分离纯化分离纯化基本流程基本流程实验仪器、材料实验仪器、材料n实验材料实验材料 菌源菌源:土样土样10g;10g;n培养基培养基 牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基;n实验仪器与用具实验仪器与用具1)1)超净工作台、恒温培养箱、酒精灯超净工作台、恒温培养箱、酒精灯2 2)1000ul1000ul及及100
5、ul100ul移液枪、移液枪、1000ul1000ul及及100ul100ul枪头、无菌枪头、无菌1.5ml1.5ml的离心管、离心管架的离心管、离心管架3 3)无菌平皿、涂布棒、接种环)无菌平皿、涂布棒、接种环n实验试剂实验试剂:无菌水无菌水;实验内容实验内容1 1、采土样、采土样:选择肥沃土壤选择肥沃土壤,去表层土去表层土,挖挖5 520cm20cm深度的土壤数深度的土壤数10g,10g,装入已灭菌的牛皮纸袋装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋口封好袋口,带回实验室。带回实验室。2 2、制备土壤稀释液、制备土壤稀释液:称取土样称取土样1.0g1.0g,放入盛,放入盛99ml99ml无菌水的三角瓶中
6、,置无菌水的三角瓶中,置摇床振荡摇床振荡20min20min使土壤均匀分散成为土壤悬液(使土壤均匀分散成为土壤悬液(1010-2-2)。用)。用100ul100ul移液枪从中吸取移液枪从中吸取100ul100ul土壤悬液,注入事先分装有土壤悬液,注入事先分装有900ul900ul无菌水的离心管中,吹吸无菌水的离心管中,吹吸3 3次,振荡均匀(次,振荡均匀(1010-3-3)。)。然后同样方法,配置成稀释度为然后同样方法,配置成稀释度为1010-4-4,1010-5-5的土壤菌悬液。的土壤菌悬液。3、分离、分离1)涂布法)涂布法 用一支用一支新的无菌枪头新的无菌枪头,由,由低浓度开始低浓度开始,
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