微生物的培养基.pptx
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1、定义定义:指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的谢产物用的的营养基质,(混合养料)。(混合养料)。特点:特点:任何培养基都应具备微生物所需要的六大营任何培养基都应具备微生物所需要的六大营养要素(养要素(碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水水),且应比例适当。所以一旦配成必须立即灭菌。),且应比例适当。所以一旦配成必须立即灭菌。第二节第二节 微生物的培养基微生物的培养基用途:用途:促使微生物生长;积累代谢产物;分离微生促使微生物生长;积累代谢产物;分离微生物菌种;鉴定微生物种类;微生物细胞计数;菌种物菌
2、种;鉴定微生物种类;微生物细胞计数;菌种保藏;制备微生物制品。因此,它是进行科学研究,保藏;制备微生物制品。因此,它是进行科学研究,发酵生产微生物制品等的基础发酵生产微生物制品等的基础 一、培养基的配制原则一、培养基的配制原则(一)培养基组分应适合微生物的营养特点(目的明确)(一)培养基组分应适合微生物的营养特点(目的明确)(二)营养物的浓度与比例应恰当(营养协调)(二)营养物的浓度与比例应恰当(营养协调)(三)物理化学条件适宜(条件适宜)(三)物理化学条件适宜(条件适宜)(四)根据培养目的选择原料及其来源(经济节约)(四)根据培养目的选择原料及其来源(经济节约)培养基的配制培养基的配制4 4
3、个原则个原则1 1、目的明确、目的明确 培养何菌?培养何菌?自养菌?异养菌?;自养菌?异养菌?;种子菌?发酵菌?;种子菌?发酵菌?;实验用?生产用?实验用?生产用?收获何物?收获何物?收获菌体?收获产物?产物成分含氮如何?收获菌体?收获产物?产物成分含氮如何?例如枯草芽孢杆菌:例如枯草芽孢杆菌:一般培养:肉汤培养基或一般培养:肉汤培养基或LB培养基;培养基;自然转化:基础培养基;自然转化:基础培养基;观察芽孢:生孢子培养基;观察芽孢:生孢子培养基;产蛋白酶:以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基;产蛋白酶:以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基;根据不同的工作目的,微生物不同的营养需根据不同的工作目的
4、,微生物不同的营养需要,运用自己丰富的生物化学和微生物学知识来要,运用自己丰富的生物化学和微生物学知识来配制最佳的培养基。配制最佳的培养基。2 2、营养协调、营养协调 基本遵循基本遵循1010倍递减关系倍递减关系 注重注重C/NC/N比比 H H2 20 0(1010-1-1)C C(1010-2-2)N N (1010-3-3)(P P、S S)(1010-4-4)K K、Mg Mg(1010-5-5)生长因子生长因子(1010-6-6)培养基的配制培养基的配制4 4个原则个原则实验室的常用培养基:实验室的常用培养基:细菌:细菌:牛肉膏蛋白胨培养基(或简称普通肉汤培养基);牛肉膏蛋白胨培养基
5、(或简称普通肉汤培养基);放线菌:高氏放线菌:高氏1号合成培养基培养;号合成培养基培养;酵母菌:麦芽汁培养基;酵母菌:麦芽汁培养基;霉菌:霉菌:查氏合成培养基;查氏合成培养基;实验室一般培养:普通常用培养基;实验室一般培养:普通常用培养基;遗传研究:成分清楚的合成培养基;遗传研究:成分清楚的合成培养基;(1 1)选择适宜的营养物质)选择适宜的营养物质营养物质的浓度适宜;营养物质的浓度适宜;营养物质之间的配比适宜;营养物质之间的配比适宜;高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长,反而起到抑制或杀不能维持和促进微生物的生长,反而起到
6、抑制或杀菌作用。菌作用。(2 2)营养物质浓度及配比合适)营养物质浓度及配比合适培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累,其中累,其中碳氮比(碳氮比(C CN N)的影响较大。的影响较大。发酵生产谷氨酸时:发酵生产谷氨酸时:碳氮比为碳氮比为4/1时,菌体大量繁殖,谷氨酸积累少;时,菌体大量繁殖,谷氨酸积累少;碳氮比为碳氮比为3/1时,菌体繁殖受到抑制,谷氨酸产量则大量增加。时,菌体繁殖受到抑制,谷氨酸产量则大量增加。3 3、理化适宜、理化适宜 (1 1)pH pH(
7、2 2)渗透压与水活度)渗透压与水活度 (3 3)氧化还原电位)氧化还原电位培养基的配制培养基的配制4 4个原则个原则细菌:细菌:pH 7.08.0放线菌:放线菌:pH 7.58.5酵母菌:酵母菌:pH 3.86.0霉菌:霉菌:pH 4.05.8藻类:藻类:pH 6.07.0原生动物:原生动物:pH 6.08.0初始初始pHpH通常培养条件:通常培养条件:(1 1)pHpH生长过程需要及时调节:缓冲液、生长过程需要及时调节:缓冲液、CaCO3CaCO3、NaHCO3NaHCO3及外及外源调节源调节(2 2)渗透压和水活度)渗透压和水活度渗透压渗透压(osmotic pressure)是某水溶液
8、中一是某水溶液中一个可用压力来量度的一个物化指标。个可用压力来量度的一个物化指标。与微生物细胞渗透压相等的与微生物细胞渗透压相等的等渗溶液等渗溶液最适宜微生物最适宜微生物的生长;的生长;高渗溶液高渗溶液会使细胞发生质壁分离;会使细胞发生质壁分离;低渗溶液低渗溶液则会使细胞吸水膨胀,形成很高的膨压,则会使细胞吸水膨胀,形成很高的膨压,这对细胞壁脆弱或丧失的各种缺壁细胞,例如原生质这对细胞壁脆弱或丧失的各种缺壁细胞,例如原生质体、球状体或支原体来说,则是致命的。体、球状体或支原体来说,则是致命的。表示在天然或人为环境中,微生物可实际利用的自由水或游离水的含量。水活度即水活度即a aw w(wate
9、ractivitywateractivity)水活度定量涵义为:在同温同压下,水活度定量涵义为:在同温同压下,某溶液的蒸汽压某溶液的蒸汽压纯水蒸汽压纯水蒸汽压a aw w该溶液的该溶液的百分相对湿度值百分相对湿度值(ERHERH,equilibrium relative humidity)a aw w(3 3)氧化还原电位()氧化还原电位(EhEh )好氧性微生物:好氧性微生物:+0.1+0.1伏以上时可正常生长,伏以上时可正常生长,以以+0.3+0.3+0.4+0.4伏为宜;伏为宜;厌氧性微生物:低于厌氧性微生物:低于+0.1+0.1伏条件下生长;伏条件下生长;兼性厌氧微生物:兼性厌氧微生物
10、:+0.1+0.1伏以上时进行好氧呼吸,伏以上时进行好氧呼吸,+0.1 +0.1伏以下时进行发酵。伏以下时进行发酵。还原剂释放电子与氧化剂接受电子的趋势还原剂释放电子与氧化剂接受电子的趋势4 4、经济节约、经济节约 以粗代精、以废代好、以简代繁以粗代精、以废代好、以简代繁 以国代进等等以国代进等等培养基的配制培养基的配制4 4个原则个原则二二 培养基的配制培养基的配制4 4种方法种方法l生态模拟生态模拟 l参阅文献参阅文献 l精心设计精心设计 l实验比较实验比较一一、培养基的类型和用途、培养基的类型和用途根据成分分:根据成分分:根据状态分:根据状态分:根据主要成分或使用目的分根据主要成分或使用
11、目的分:根据生产工业的要求分:根据生产工业的要求分:合成培养基合成培养基(高氏培养基、察氏培养基等高氏培养基、察氏培养基等)半合成培养基半合成培养基(牛肉膏蛋白胨、土豆葡萄糖培养基(牛肉膏蛋白胨、土豆葡萄糖培养基天然培养基天然培养基(麦芽汁、玉米粉、麸皮、锯末等)(麦芽汁、玉米粉、麸皮、锯末等)基础培养基基础培养基增殖培养基增殖培养基鉴别培养基鉴别培养基选择培养基选择培养基孢子培养基孢子培养基供制备孢子用;供制备孢子用;种子培养基种子培养基满足菌种生长;满足菌种生长;发酵培养基发酵培养基满足大生产中大量菌体生长和繁殖以及代谢产物积累满足大生产中大量菌体生长和繁殖以及代谢产物积累固体培养基固体培
12、养基半固体培养基半固体培养基液体培养基液体培养基(一)按培养基成分的了解作分类(一)按培养基成分的了解作分类1 1、天然培养基、天然培养基 用天然成分制成的培养基用天然成分制成的培养基 优点:营养丰富、价格低廉优点:营养丰富、价格低廉 缺点:成分不清楚、不稳定缺点:成分不清楚、不稳定 适于:菌种培养、发酵生产适于:菌种培养、发酵生产 例如,培养酵母菌的例如,培养酵母菌的麦芽汁培养基麦芽汁培养基等。等。2 2、组合培养基(合成培养基)、组合培养基(合成培养基)高纯度化学试剂配制的培养基高纯度化学试剂配制的培养基 优点:成分精确、重现性高优点:成分精确、重现性高 缺点:价格较高、微生物生长一般缺点
13、:价格较高、微生物生长一般 适于:生理、生化、代谢、菌种鉴定研究等适于:生理、生化、代谢、菌种鉴定研究等例如,培养细菌的例如,培养细菌的葡萄糖铵盐培养基葡萄糖铵盐培养基,培养放线菌的培养放线菌的淀粉硝酸盐培养基淀粉硝酸盐培养基(即(即高氏一号培养基高氏一号培养基),),培养真菌的培养真菌的蔗糖硝酸盐培养基蔗糖硝酸盐培养基(即(即察氏培养基察氏培养基)等。等。3 3、半组合培养基、半组合培养基 化学试剂化学试剂 +天然成分天然成分 实际应用过程中大多数为半组合培养基实际应用过程中大多数为半组合培养基例如,培养真菌的例如,培养真菌的马铃薯蔗糖培养基马铃薯蔗糖培养基 等。等。四种菌的实验室常用培养基
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