微生物实验注意事项.doc
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1、微生物实验注意事项1. 实验过程中要及时详细标清除产物和日期,实验做完以后要对以前的过度产品做个清理,以免东西积累过多。2. 实验后的DNA和RNA要及时放回冰箱,以免时间长降解,特别是用水溶解的时候。3. 要及时甘油保存你鉴定出的细菌,每个细菌保存两份,存放在-80度冰箱里。4. 实验用的酶类虽然在室温下放一段时间也没什么问题,但还是要及时放回冰箱,以免活性降低。5. 要及时清理实验台面,保持干净,整洁,有序。6. 无菌操作台用后及时清理干净,操作真菌和细菌等最好不要交叉使用。7. 培养基使用的时候要注意无菌操作,移液器不要插入培养基中,之准许无菌枪头进入瓶子腔体,如培养基较少,可以倾斜瓶子
2、,移液器取液体最好不要用到最大量程,以免吸液过猛导致与移液器接触。8. 灭好的培养基标签一定要写好,包括名称,日期,是否加抗生素,是否加抗生素非常重要,特别是在共用培养基的实验室。9. 实验用过的试剂盖子一定要盖好,以免挥发。特别是有毒的物品,如氯仿,苯酚等,用完后的瓶子及时拿出实验室。10. 带手套接触有毒物品后,要及时处理掉手套。不管是否接触过有毒物品,不要戴着手套乱接触其他东西,如开窗等。11. 做实验过程中不要接电话,说话,考虑其他事情。特别是PCR和配溶液的时候。做PCR和配溶液的时候要把所用的试剂找全,一字排开,加完一种东西就把这种东西放到一边,可防止自己少加错东西。12. 同时作
3、几个实验的时候一定要有定时器,防止自己忘记,特别是在煮东西,加热溶化溶液等危险操作的时候,切忌。13. 饭前,有活动前不要做实验,这时候匆匆忙忙非常容易出错,特别是作有危险的实验,更要注意。14. 作好试验记录,不管有没有结果,一定要坚持。还有点用图片,测序结果等,如果不清楚记录东西多了,就乱了,混了。这个一定要认真做好。15. 要随时写下自己的想法,因为有些想法稍纵即逝。微生物实验注意事项一、无菌操作要求1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。2. 进行接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间,工作前经紫外线消毒后使用。3. 接种食品样品时, 应在进无菌室前用肥皂洗手
4、, 然后用 75酒精棉球将手擦干净。4. 进行接种所用的吸管,平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用 95%酒精点燃烧灼三次后使用。5. 从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不得触及试管或平皿边。6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必要时还要烧到环和针与杆的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸 5min,再经火焰烧灼。8. 吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮
5、头吸取,不得直接用口吸。二、无菌间使用要求1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃,并要密封,不得随意打开,并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门, 另设有 0.5-0.7m2 的小窗, 以备进入无菌间后传递物品。2. 无菌间内应保持清洁,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作台面,不得存放与实验无关的物品。3. 无菌间使用前后应将门关紧, 打开紫外灯, 如采用室内悬吊紫外灯消毒时, 30W 需紫外灯,距离在 1.0m 处,照射时间不少于 30min,使用紫外灯,应注意不得直接在紫外线下操作, 以免引起损伤, 灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭, 除去上面灰尘和油垢, 以减少紫外线穿透的影响。
6、4. 处理和接种食品标本时,进入无菌间操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。5. 在无菌间内如需要安装空调时,则应有过滤装置。三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭 菌后方能使用。 (一)干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法1灭菌前准备(1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如 用金属筒应将上面通气孔打开。 (2)装培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包 好。2装放(1)干热灭菌器:装放物品不可过挤,且不能接触箱的四壁。 (2)大型高压蒸气锅:放置灭菌物品分别包扎好,直接
7、放入消毒筒内,物品之间不能 过挤。3设备检查(1)检查门的开关是否灵活,橡皮圈有无损坏,是否平整。 (2)检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位,关好门和盖,通蒸气或加热后,观察是否漏气,压力表与温度计所标示的状况是否吻合,管道有无堵塞。 (3)对有自动电子程序控制装置的灭菌器,使用前应检查规定的程序,是否符合于进 行灭菌处理的要求。4灭菌处理 (1) 干热灭菌法:此法适应于在干热情况下,不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。 器械器皿应清洗后再干烤,以防附着在表面的污物炭化。 灭菌时安放物品不能过挤,不要直接接触底和箱壁,物品之间留有空隙。 菌时将箱门关紧,
8、接上电源,先将排气孔打开约 气,温度升至 160调节指示灯,维持 1.5 2h。 灭菌完毕后或温度升温过程中,须在 60以下才能打开箱门。30min,排除灭菌器中的冷空气。(2) 手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行: 手提式高压锅在主体内加入 3L 清水,立式高压锅加水 16L(重复使用时应将水 量补足,水变混浊需更换). 手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破 裂的灭菌器不得使用) 。 盖好顶盖拧紧,勿使漏气;置灭菌器于火源上加热,立式压力锅通上电源,并打 开顶盖上的排气阀放了冷气(水沸腾后排气 10-15min) 。 关闭排气阀,使蒸气压
9、上升到规定要求,并维持规定时间(按灭菌物品性质与有 关情况而定) 。 达到规定时间后,对需干燥的物品,立即打开排气阀排出蒸气,待压力恢复到零 时,自然冷却至60后开盖取物,如为液体物品,不要打开排气阀,而应立即将锅去除热源,待自然冷却,压力恢复至零,温度降到 体剧烈沸腾或容器爆破。60以下再开盖取物,以防突然减压。(3)卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行: 关紧锅门,打开进气阀,将蒸气引入夹层进行预热,夹层内冷空气经阻气器自动 排出。 夹层达到预定温度后,打开锅室进气阀,将蒸气引入锅室,锅室内冷空气经锅室 阻气器自动排出。 待锅室达到规定的压力与温度时,调节进气阀,使保持恒定至 自然或人
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