微生物的实验室培养(第二课时).doc

专题二 课题1 微生物的实验室培养（第二课时）
组稿人：郝艳 使用班级：理科班级 使用时间：1-22
实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和
两个阶段进行。
一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：
、 、 、 、 。
〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？
溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？

〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？
2． 倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：
①在火焰旁右手拿 ，左手 ；
②使锥形瓶的瓶口 ；
③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。
④待平板冷却凝固后，将平板 。
〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？
〖思考8〗倒平板的目的是什么？
〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？
二、纯化大肠杆菌
微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。
1．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
其操作步骤是：①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。④将冷却的接种环伸入到 。⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。⑧将平板 培养。
〖思考11〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？最后灼烧接种环的目的是？在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？

2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。
3.　系列稀释操作：
①取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。
②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。
③从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。
〖思考12〗系列稀释操作的注意事项是什么？

〖思考13〗涂布平板操作的步骤是什么？

结果分析与评价
1　培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？
2　在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？
3　培养12h和24h后的菌落大小；菌落分布位置？原因？
〖思考14〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？
〖思考15〗频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？
课题成果评价
（一）培养基的制作是否合格（二）接种操作是否符合无菌要求
（三）是否进行了及时细致的观察与记录
一、选择题、
1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )
A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
2．有关稀释涂布平板法，叙述错误的( )
A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释
B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面[来源:Zxxk.Com]
C．再放在适宜条件下培养
D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落
3．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是( )
A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染
C．没必要放人未接种的培养基 D．为了下次接种时再使用
4．下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（ ）
A含碳有机物 B蛋白胨 C含碳无机物 D花生粉饼等天然物质
5．平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（ ）
A利于大肠杆菌的接种 B防止杂菌污染
C利于培养的冷却 D 防止皿盖冷却水倒流入培养基
6．自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是
A．碳源 B．氮源 C．无机盐 D．特殊营养物质
7．下表是有关4种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的概述。其中正确的是( )
生 物
硝化细菌
根瘤菌
酵母菌
谷氨酸棒状杆菌
能 源
氧化NH3
N2的固定
分解糖类等有机物
光 能
碳 源
C02
糖类
糖类
糖类
氮 源
NH3
N2
NH4+、NO3-
尿 素
代谢类型
自养需氧型
异养需氧型
异养兼性厌氧型
自养需氧型
A．根瘤菌、谷氨酸棒状杆菌 B．硝化细菌、酵母菌
C．酵母菌、谷氨酸棒状杆菌 D．硝化细菌、根瘤菌
8．甲、乙、丙是三种微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ种正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是

粉状硫
10g
K2HPO4
4g
FeSO4
0.5g
蔗糖
10g
（NH4）2SO4
0.4g
H2O
100ml
MgSO4
9.25g
CaCl2
0.5g
Ⅰ
+
+
+
+
-
+
+
+
Ⅱ
+
+
+
-
+
+
+
+
Ⅲ
+
+
+
+
+
+
+
+
A、甲、乙、丙都是异养微生物
B、甲、乙、丙都是自养微生物、丙是异养微生物
C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物
9．微生物（除病毒外）需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的说法正确的是
A．乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的
B．微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长因子
C．培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利
D．生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合成这些生长因子的能力往往不
10．下表为一种培养液的配方。
成分
含量
NH4HCO3
0.5g
KH2PO4
3.0g
CaSO4
0.5g
FeCl2
0.5g
维生素
少许
H2O
1000mL
请据表中内容回答：
（1）该配方若用于培养微生物，则该生物的同化作用类型是___________________；
若用该配方来培养圆褐固氮菌，则应加入___________和_____________，并可以除去的成分是_____________。在培养圆褐固氮菌之前需对培养基进行灭菌，否则会有其他杂菌生长，圆褐固氮菌与其他杂菌的关系为__________________。
（2）若从自然界分离得到的样品中含有谷氨酸棒状杆菌、圆褐固氮菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等，现欲筛选出金黄色葡萄球菌，则简便的方案是_________________________。
（3）将大肠杆菌的质粒取出，连接上人生长激素的基因以后，重新置入大肠杆菌细胞内，然后，用这种带有人生长激素基因的工程菌进行发酵，就能得到大量的人生长激素。在大规模生产中，需要将选育的工程菌菌种经过多次扩大培养，再进行接种，扩大培养选用_________期的细菌，并通入无菌空气；若把大肠杆菌接种到葡萄糖和乳糖的培养基中，只有葡萄糖全被消耗后才合成半乳糖苷酶来利用乳糖。这一事实说明半乳糖苷酶属于___________，该调节方式的意义是_________________________，增强了大肠杆菌对环境的适应能力。
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