微生物检验非发酵阴杆.pptx
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1、第十七章 非发酵革兰阴性杆菌 是指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利是指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧,无芽胞的革兰阴性杆菌。用葡萄糖的需氧,无芽胞的革兰阴性杆菌。特别提示:并非分类概念特别提示:并非分类概念 只为认识方便只为认识方便 生物习性相似生物习性相似 已经形成习惯已经形成习惯 革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌OX+葡萄糖葡萄糖O/F葡萄糖葡萄糖O/F不动杆菌属不动杆菌属窄食单胞菌属窄食单胞菌属不利用不利用洛非不动杆菌洛非不动杆菌FO肠杆菌科肠杆菌科假单胞菌属假单胞菌属无色杆菌属无色杆菌属金色杆菌属金色杆菌属不利用不利用产碱杆菌产碱杆菌布鲁菌属布鲁菌属产碱假单胞产碱假单胞无色
2、杆菌无色杆菌FO气单胞气单胞邻单胞邻单胞弧菌属弧菌属共有的几个特点非发酵菌大多数为条件致病菌非发酵菌大多数为条件致病菌 主要引起抵抗力低下病人的机会感染,如主要引起抵抗力低下病人的机会感染,如败血症、呼吸道感染、尿路感染、伤口感染败血症、呼吸道感染、尿路感染、伤口感染等。现已成为引起医院内感染的等。现已成为引起医院内感染的主要病原菌主要病原菌。对抗生素有天然的抗药性对抗生素有天然的抗药性 非发酵菌对抗生素常呈现非发酵菌对抗生素常呈现多重耐药多重耐药现象。如铜绿假现象。如铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌、黄杆菌单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌、黄杆菌等对绝大多数抗生素耐药,铜绿
3、假单胞菌对氨苄青霉等对绝大多数抗生素耐药,铜绿假单胞菌对氨苄青霉素耐药率达素耐药率达100%100%,甚至对第三代头子孢菌素也呈现耐,甚至对第三代头子孢菌素也呈现耐药,而且耐药率在逐年增加。药,而且耐药率在逐年增加。不发酵革兰阴性杆菌分类不发酵革兰阴性杆菌分类假单胞菌属假单胞菌属 (PseudomonasPseudomonas)产碱杆菌属产碱杆菌属 (AlcaligenesAlcaligenes)不动杆菌属不动杆菌属 (AcinetobacterAcinetobacter)莫拉菌属莫拉菌属 (MoraxellaMoraxella)无色杆菌属无色杆菌属 (AchromobacteAchromob
4、acter)r)金氏杆菌属金氏杆菌属 (KingellaKingella)黄杆菌属黄杆菌属 (Flavobacterium)(Flavobacterium)艾肯菌属艾肯菌属 (Eikenella)(Eikenella)土壤杆菌属土壤杆菌属 (Agrobacterium)(Agrobacterium)黄单胞菌属黄单胞菌属 (Xanthomonas)(Xanthomonas)丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属 (Comamonas)(Comamonas)常见非发酵革兰阴性杆菌的初步分群鉴定常见非发酵革兰阴性杆菌的初步分群鉴定试验试验假单胞菌属假单胞菌属无色杆菌属无色杆菌属黄杆菌属黄杆菌属不动杆菌属不动杆菌属
5、产碱杆菌属产碱杆菌属丛毛菌属丛毛菌属莫拉菌属莫拉菌属氧化酶氧化酶+/-+/-+/-+/-O/FO/F试验试验O/-O/-O OO OO/-O/-动力动力+/-+/-+/-+/-+/-+/-+-注:注:+:90%90%以上阳性;以上阳性;-10%-10%以下的阳性;以下的阳性;+/-+/-:约:约70%70%为阳性;为阳性;O O:为氧化。:为氧化。非发酵菌非发酵菌嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌葡萄糖产酸葡萄糖产酸无色杆菌属无色杆菌属土壤杆菌属土壤杆菌属假单胞菌属假单胞菌属动力动力+OXOX不动杆菌属不动杆菌属+葡萄糖产酸葡萄糖产酸黄色素黄色素莫拉氏菌属莫拉氏菌属黄杆菌属黄杆菌属+端鞭毛端鞭毛
6、+产碱杆菌属产碱杆菌属尿素尿素+常见非发酵菌的鉴定双岐索引常见非发酵菌的鉴定双岐索引假单菌属按假单菌属按rRNA同源性分为同源性分为5群及未确定群及未确定rRNA同源群有关的种。同源群有关的种。一群需氧、一群需氧、不发酵葡萄糖、不发酵葡萄糖、无芽胞,无芽胞,有鞭有鞭毛、氧化酶阳性毛、氧化酶阳性的革兰阴性杆菌。的革兰阴性杆菌。多为条件致病菌。多为条件致病菌。第一节 假单胞菌属临床常见假单胞菌分群临床常见假单胞菌分群rRNA1 1.荧光假单胞菌荧光假单胞菌DNA同源群同源群 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 荧光假单胞菌荧光假单胞菌 恶臭假单胞菌恶臭假单胞菌 2.斯氏假单胞菌斯氏假单胞菌DNA同源群同源群
7、 斯氏假单胞菌斯氏假单胞菌 曼多辛假单胞菌曼多辛假单胞菌 3.产碱假单胞菌产碱假单胞菌DNA同源群同源群 产碱假单胞菌产碱假单胞菌 假产碱假单胞菌假产碱假单胞菌 2.2.临床意义临床意义分布广泛:水、土壤、空气分布广泛:水、土壤、空气。人类感染的非发酵菌中,假单胞菌属占人类感染的非发酵菌中,假单胞菌属占70%-80%,铜绿假单胞菌占,铜绿假单胞菌占55%-65%。常见的有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、常见的有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。这些细菌在医院内感染中亦常见。这些细菌在医院内感染中亦常见。3.3.微生物特性微生物特性革兰阴
8、性、无芽胞、专性需氧革兰阴性、无芽胞、专性需氧有有端鞭毛或丛鞭毛端鞭毛或丛鞭毛生长温度范围广,最适生长温度为生长温度范围广,最适生长温度为35产生各种水溶性色素:产生各种水溶性色素:绿脓素、脓红素、荧光素、绿脓素、脓红素、荧光素、脓褐素脓褐素。对理化因素耐受性较强,对多种抗生素耐药。对理化因素耐受性较强,对多种抗生素耐药。药敏试验药物选择药敏试验药物选择按按CLSI(NCCLS)推荐,分为推荐,分为4组:组:A组组:头孢他啶,庆大霉素,美洛西林,替卡西林,哌拉西林。头孢他啶,庆大霉素,美洛西林,替卡西林,哌拉西林。B组组:头孢吡肟,头孢哌酮,氨曲南,亚胺培南,阿米卡星,头孢吡肟,头孢哌酮,氨曲
9、南,亚胺培南,阿米卡星,妥布霉素,环丙沙星。妥布霉素,环丙沙星。C组组:头孢噻肟,头孢曲松,氯霉素头孢噻肟,头孢曲松,氯霉素D组或组或U 组组:羧苄西林,头孢唑肟,四环素,诺氟沙星,氧羧苄西林,头孢唑肟,四环素,诺氟沙星,氧氟沙星,磺胺甲基异恶唑。氟沙星,磺胺甲基异恶唑。在自然界分布较为广泛,适应能力强。在自然界分布较为广泛,适应能力强。常引起感染:皮肤、呼吸道、泌尿道、烧常引起感染:皮肤、呼吸道、泌尿道、烧伤感染等。慢性肺部感染极为常见。伤感染等。慢性肺部感染极为常见。菌血症、心内膜炎、肺囊性纤维变。菌血症、心内膜炎、肺囊性纤维变。眼部感染导致角膜穿孔而失明。眼部感染导致角膜穿孔而失明。二、
10、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌的毒力因子铜绿假单胞菌的毒力因子 粘附素:粘附粘附素:粘附 结构成分结构成分 多糖似荚膜物质多糖似荚膜物质 毒素毒素 内毒素:内毒素:LPSLPS 毒力因子毒力因子 外毒素:外毒素:A A 阻止真核细胞蛋白质合成阻止真核细胞蛋白质合成 S S 干扰吞噬杀菌作用干扰吞噬杀菌作用 绿脓素:具有氧化还原活性,催化超氧化物和绿脓素:具有氧化还原活性,催化超氧化物和 过氧化氢产生有毒基团过氧化氢产生有毒基团 酶类酶类 弹性蛋白酶弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶(丝氨酸蛋白酶(Las-ALas-A)降解弹性锌金属蛋白酶(降解弹性锌金属蛋白酶(Las-BLas-B)蛋白)蛋白 磷脂酶磷脂酶C
11、:C:分解脂质和卵磷脂,损伤组织细胞分解脂质和卵磷脂,损伤组织细胞2.2.生物学特性生物学特性形态与染色 为无芽胞细长的革兰氏阴为无芽胞细长的革兰氏阴性杆菌,菌体长短不一,短性杆菌,菌体长短不一,短的呈球杆状,长的为丝状。的呈球杆状,长的为丝状。成对排列或形成短链。无荚成对排列或形成短链。无荚膜,在菌体一端有膜,在菌体一端有1 1 根鞭毛,根鞭毛,运动活泼。革兰氏染色阴性,运动活泼。革兰氏染色阴性,无抗酸性。无抗酸性。培养特性专性需氧菌。生长温度范围为专性需氧菌。生长温度范围为20-42;最适温最适温度为度为35 ,致病性菌可在,致病性菌可在42 生长,但在生长,但在4 不生长,这可与荧光假单
12、胞菌等进行鉴别。不生长,这可与荧光假单胞菌等进行鉴别。本菌对营养无特殊要求,在普通培养基上生长本菌对营养无特殊要求,在普通培养基上生长良好,在选择培养基和麦康凯琼脂、良好,在选择培养基和麦康凯琼脂、SS琼脂培琼脂培养基上也能生长。养基上也能生长。在普通琼脂平板上经在普通琼脂平板上经18-24 小时培养,可形成小时培养,可形成圆形、圆形、边缘不整齐边缘不整齐、扁平稍隆起、光滑温润且、扁平稍隆起、光滑温润且常呈融合状态的菌落。琼脂被染成常呈融合状态的菌落。琼脂被染成蓝绿色或黄蓝绿色或黄绿色。绿色。在血琼脂平板上经在血琼脂平板上经35 培养培养18-24 小时,可形小时,可形成大而扁平、湿润、有成大
13、而扁平、湿润、有金属光泽金属光泽、有、有特殊气味特殊气味之之灰绿色、蓝绿色灰绿色、蓝绿色的菌落,并形成的菌落,并形成透明溶血环透明溶血环。生化特性氧化酶阳性,能氧化分解葡萄糖、木糖产酸,不氧化酶阳性,能氧化分解葡萄糖、木糖产酸,不产气,但产生红脓素或黑脓素的菌株,以及粘液产气,但产生红脓素或黑脓素的菌株,以及粘液型菌落的菌株可能不分解糖类。型菌落的菌株可能不分解糖类。本菌能液化明胶,分解尿素,能利用枸橼酸盐,本菌能液化明胶,分解尿素,能利用枸橼酸盐,不产生吲哚,能还原硝酸盐为亚硝盐酸,或产生不产生吲哚,能还原硝酸盐为亚硝盐酸,或产生氮气。氮气。(1 1)分离培养与鉴定:)分离培养与鉴定:标本可
14、接种于血琼脂平板培养基和选择标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基。鉴定根据镜下特征、菌落形态、性培养基。鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化反应等。生化反应等。3.3.微生物检验(微生物检验(检验程序检验程序)血平板上毛玻璃血平板上毛玻璃样,样,金属光泽,金属光泽,生姜味生姜味可产生多种色素:可产生多种色素:荧光素与绿脓素荧光素与绿脓素(2)抗原检测:血清学分型、噬菌体分型。)抗原检测:血清学分型、噬菌体分型。(3)核酸检测:)核酸检测:DNA内切酶分析、质粒指纹内切酶分析、质粒指纹图谱分析、图谱分析、PCR指纹图谱分析、脉冲场凝胶指纹图谱分析、脉冲场凝胶电泳分析(电泳分析(PFGE)、基因
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- 微生物 检验 发酵
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