微生物学实验技术乳酸菌的分离与纯化.pptx
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1、 一、目的要求:一、目的要求:学习微生物菌种分离技术学习微生物菌种分离技术学学习习从从新新鲜鲜酸酸乳乳中中分分离离纯纯化化乳乳酸酸菌菌的方法的方法学习乳酸的检测方法学习乳酸的检测方法酸乳中乳酸菌的分离纯化酸乳中乳酸菌的分离纯化二、基本原理:二、基本原理:选择适合于待分离微生物的生长条件,造成只利于选择适合于待分离微生物的生长条件,造成只利于该微生物生长,而抑制其他微生物生长的环境,从而淘该微生物生长,而抑制其他微生物生长的环境,从而淘汰一些不需要的微生物;加入某种指示剂,使待分离微汰一些不需要的微生物;加入某种指示剂,使待分离微生物在培养基中形成具有明显特征的菌落。生物在培养基中形成具有明显特
2、征的菌落。微生物在固体培养基上生长形成单个菌落,挑取菌微生物在固体培养基上生长形成单个菌落,挑取菌落平板划线获得纯培养。落平板划线获得纯培养。通过吲哚试验和糖发酵试验以及小型发酵实验证明通过吲哚试验和糖发酵试验以及小型发酵实验证明该菌种为乳酸菌,杆状的叫做短乳杆菌,链球状的叫做该菌种为乳酸菌,杆状的叫做短乳杆菌,链球状的叫做乳链球菌。乳链球菌。三、实验器材:三、实验器材:菌种来源:菌种来源:市场销售的各种新鲜酸乳市场销售的各种新鲜酸乳培养基:培养基:BGC 牛乳培养基牛乳培养基乳酸菌培养基乳酸菌培养基蛋白胨水培养基蛋白胨水培养基糖发酵培养基糖发酵培养基BGC 牛乳培养基牛乳培养基(A)溶液:)
3、溶液:脱脂乳粉脱脂乳粉 100g,水,水500mL,加入加入1.6%溴甲酚绿溴甲酚绿(B.G.C)乙醇溶液乙醇溶液1mL,80灭菌灭菌20min。(B)溶液:)溶液:酵母膏酵母膏10g,水,水500mLmL,琼脂,琼脂20g,pH6.8,121灭菌灭菌20min。以无菌操作趁热将(以无菌操作趁热将(A)、()、(B)溶液混合均)溶液混合均匀后倒平板。匀后倒平板。乳酸菌培养基乳酸菌培养基n牛肉膏5g,酵母膏5g,蛋白胨10g,葡萄糖10g,乳糖5g,氯化钠5g,水1000mL,pH:6.8;1.6%溴甲酚绿溴甲酚绿蛋白胨水培养基蛋白胨水培养基n蛋白胨10g,氯化钠5g,水1000mL,pH:7.
4、27.4糖发酵培养基糖发酵培养基n蛋白胨水培养基1000mL,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液12mL,pH:7.6,另配20%糖溶液(葡萄糖,蔗糖)各10mL。n制法:n1)将上述含指示剂的蛋白胨水培养基(pH:7.6)分装于试管中,在每管内放一倒置的小玻璃管。n2)将已分装好的蛋白胨水培养基和20%的各种糖溶液分别灭菌,蛋白胨水培养基121灭菌20min,糖溶液112灭菌30min。n3)灭菌后,每管以无菌操作分别加入20%的糖溶液0.5mL,则成1%的浓度。有关溶液:n1.6%溴甲酚紫乙醇溶液:溴甲酚紫1.6g溶于100mL乙醇中,贮存于棕色瓶中保存备用。n吲哚试剂:对二甲基氨基苯甲醛8g,95
5、%乙醇760mL,浓盐酸160mL。n10%硫酸n2%高锰酸钾n含氨的硝酸盐溶液:n称取硝酸银2g,蒸馏水100mL,待硝酸银溶解后,取出10mL备用,向其余的90mL硝酸银中滴加氨水,即可形成很厚的沉淀,继续滴加氨水至沉淀刚刚溶解成为澄清溶液为止,再将备用的硝酸银慢慢滴入,则溶液出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状的沉淀又消失,继续滴入硝酸银,直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。四、操作步骤:四、操作步骤:(一)乳酸菌的分离纯化(一)乳酸菌的分离纯化 1.1.稀释分离稀释分离 培养基的配制培养基的配制 灭菌灭菌 倒平板倒平板 制备样品稀释液制备样品稀释液 接种(涂布法)接种(涂布法)培养培
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