微生物学实验三.pptx
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1、抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology一、实验目的一、实验目的1.1.掌握抗酸染色方法。掌握抗酸染色方法。2.2.了解抗酸染色的原理和意义。了解抗酸染色的原理和意义。抗抗 酸酸 染染 色色 Acid fast stain抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology分枝杆菌的细胞壁内含有大量的分枝杆菌的细胞
2、壁内含有大量的脂质,主要是分脂质,主要是分枝菌酸枝菌酸,它包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌它包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌一般不易着色,要经过一般不易着色,要经过加热和延长染色时间加热和延长染色时间来促来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后,就很难被酸性脱色剂脱色,故名后,就很难被酸性脱色剂脱色,故名抗酸染色抗酸染色。齐齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物石炭酸复红牢固结合成复合物,用用3%3%盐酸酒精处盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后,分枝杆菌理也不脱色。
3、当再加碱性美兰复染后,分枝杆菌仍然为仍然为红色红色,而其他细菌及背景中的物质为兰色而其他细菌及背景中的物质为兰色。二、实验原理二、实验原理抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 细菌:卡介苗细菌:卡介苗 (Bacillus Calmette-GuerinBacillus Calmette-Guerin,BCGBCG)染液:石炭酸复红液、染液:石炭酸复红液、3%3%盐酸酒精、碱性美盐酸酒精、碱性美 兰溶液兰溶液 其它:接种环、酒精灯、载玻片等其它:
4、接种环、酒精灯、载玻片等三、实验材料三、实验材料抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology1 1、细菌涂片的制备、细菌涂片的制备 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 2 2、染色、染色1 1)初染:用玻片夹夹持涂片标本,滴加)初染:用玻片夹夹持涂片标本,滴加石炭酸复红石炭酸复红2-3 2-3 滴滴,在,在火焰高处徐徐加热,火焰高处徐徐加热,切勿沸腾,出现蒸汽即暂时离开,加热切勿沸腾,出现蒸汽即暂时离开,加热3 35min5min,若染液蒸发减少,应再加染液
5、,以免干涸,若染液蒸发减少,应再加染液,以免干涸,待标本待标本冷却后用水冲洗冷却后用水冲洗。2 2)脱色:)脱色:3%3%盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色30s30s1min1min;用水冲洗。;用水冲洗。3 3)复染:用)复染:用碱性美兰溶液复染碱性美兰溶液复染1min1min;用水冲洗后用吸水纸吸干。;用水冲洗后用吸水纸吸干。四、方法与步骤四、方法与步骤抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology五、实验结果五、实验结果未染色未染色 初染后初染后 脱色后脱
6、色后 复染后复染后初染初染脱色脱色复染复染石石炭炭酸酸复复红红盐盐酸酸酒酒精精碱碱性性美美兰兰抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 结核杆菌呈红色,常堆积成团,排列无序,偶呈分枝结核杆菌呈红色,常堆积成团,排列无序,偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medi
7、cal microbiology六、注意事项六、注意事项1 1、无菌操作、无菌操作2 2、染色时间、染色时间3 3、初染加热的温度,勿沸腾、初染加热的温度,勿沸腾抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology病毒的接种与培养病毒的接种与培养真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察 抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiolo
8、gy实验目的实验目的了解病毒的培养方法了解病毒的培养方法掌握病毒的鸡胚接种及动物接种掌握病毒的鸡胚接种及动物接种了解常见真菌的菌落特点了解常见真菌的菌落特点抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology一一.病毒的培养病毒的培养动物接种法动物接种法鸡胚培养法鸡胚培养法组织细胞培养法组织细胞培养法n病毒的分离培养病毒的分离培养病毒结构简单,病毒结构简单,缺乏完整的酶系统缺乏完整的酶系统,不能在无生不能在无生命的人工培养基中生长,必须在命的人工培养基中生长,
9、必须在活的组织细胞活的组织细胞中才中才能增殖。能增殖。抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology1.动物接种(动物接种(Animalinoculation)最早应用的病毒培养法最早应用的病毒培养法。用途:分离鉴定、传代、制备免疫血清。用途:分离鉴定、传代、制备免疫血清。缺陷:带菌,缺敏感动物。缺陷:带菌,缺敏感动物。常用动物:鼠、家兔、猴和羊等。常用动物:鼠、家兔、猴和羊等。接种的途径:脑内、鼻内、皮内、腹腔内和静接种的途径:脑内、鼻内、皮内、腹腔内
10、和静脉注射等。脉注射等。抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology病病 毒毒 分离材料分离材料 实验动物实验动物 接种途径接种途径 接种后症状接种后症状 脑炎病毒脑炎病毒 蚊体悬液、尸蚊体悬液、尸解脑悬液解脑悬液 小鼠小鼠 脑内、腹腔脑内、腹腔 脑炎脑炎 柯萨奇病毒柯萨奇病毒A组组 咽拭子、粪便咽拭子、粪便悬液、脑脊液、悬液、脑脊液、尸解脑悬液尸解脑悬液 乳鼠(小于乳鼠(小于3d)皮下、脑内、皮下、脑内、腹腔腹腔 弛缓性麻痹弛缓性麻痹 柯萨奇病毒柯萨
11、奇病毒B组组 咽拭子、粪便咽拭子、粪便悬液、脑脊液、悬液、脑脊液、尸解脑悬液尸解脑悬液 乳鼠(小于乳鼠(小于24h)皮下、脑内、皮下、脑内、腹腔腹腔 震颤、痉挛震颤、痉挛性麻痹性麻痹 狂犬病病毒狂犬病病毒 唾液、脑悬液唾液、脑悬液 小鼠小鼠 脑内脑内 脑炎脑炎 常用动物接种分离的病毒及接种途径常用动物接种分离的病毒及接种途径 抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology小白鼠的脑内接种小白鼠的脑内接种1、取取病病毒毒悬悬液液:用0.25ml注射器取0.
12、1ml病 毒悬液,去除注射器内的气泡。2、固固定定小小白白鼠鼠:用左手大拇指和食指握住小白鼠的头部,手掌轻轻按住小白鼠的体部。3、消消毒毒注注射射部部位位:右手用棉签蘸以碘酒,消毒小白鼠的右侧颞部皮毛(不碰到眼)。抗酸染色、病毒的接种与培养抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology4、接接种种:右手拿注射器在小白鼠颞部(眼与耳根联线的中点略偏耳朵的方向)注入,进入颅腔即可,(一般进针23mm)不要插得太深。5、观观察察:注射完毕,将用过的注射器放入煮沸消毒器内,煮沸消毒。实验
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