微生物学实验革兰氏染色与细菌个体形态的观察.pptx

1.1.学习革兰氏染色的实验原理与方法学习革兰氏染色的实验原理与方法2.2.了解细菌革兰氏染色的应用及意义了解细菌革兰氏染色的应用及意义3.3.显微观察显微观察实实 验验 五五革兰氏染色法革兰氏染色法实验目的：实验目的：一、革兰氏染色法原理一、革兰氏染色法原理1.1.细菌的细胞壁组成和结构差异细菌的细胞壁组成和结构差异G G+：壁厚，肽聚糖含量高，类脂质含量低：壁厚，肽聚糖含量高，类脂质含量低G G-：壁薄，肽聚糖含量低，类脂质含量高：壁薄，肽聚糖含量低，类脂质含量高革兰氏阳性细菌细胞壁革兰氏阳性细菌细胞壁 革兰氏阴性细菌细胞壁革兰氏阴性细菌细胞壁初染初染 媒染媒染 复染复染 脱色脱色2.2.染色染色（结晶紫）（结晶紫）（碘液）（碘液）（乙醇）（乙醇）（番红）（番红）G G+：蓝紫色蓝紫色G G-：红色红色革兰氏染色革兰氏染色甲菌甲菌乙菌乙菌媒染媒染碘液碘液脱色脱色乙醇乙醇复染复染沙黄沙黄紫色紫色（G）初染初染结晶紫结晶紫红色红色（G-）1、制片、制片 （1）涂涂菌菌：用用无无菌菌操操作作方方法法从从试试管管中中沾沾取取菌菌液液一一环环，用用接接种种环在洁净无脂的载玻片上做一环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀薄而均匀薄而均匀薄而均匀、直径约、直径约1 cm的菌膜。的菌膜。（2）干燥）干燥：自然干燥或火焰上部略加温加速干燥自然干燥或火焰上部略加温加速干燥。（3）固定）固定：将细菌涂片面向上，通过火焰将细菌涂片面向上，通过火焰3次。次。二、操作步骤二、操作步骤G G+G G-?G G G G+:Staphylococcus aureusStaphylococcus aureusStaphylococcus aureusStaphylococcus aureusG G G G-:Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli实验策略实验策略用铅笔做好标记用铅笔做好标记用铅笔做好标记用铅笔做好标记2 2、染色、染色(p82-83)(p82-83)滴加结晶紫染液初染滴加结晶紫染液初染1 min水洗水洗滴加卢戈氏碘液媒染滴加卢戈氏碘液媒染1 min 水洗水洗滴加滴加95乙醇脱色，摇动玻片至紫色不乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止再为乙醇脱退为止(约约30 s)水洗水洗滴加番红复染滴加番红复染12 min 水洗水洗用滤纸吸干，待镜检。用滤纸吸干，待镜检。初染初染媒染媒染脱色脱色脱色脱色复染复染冲残水冲残水 吸残水吸残水 3 3、显微镜观察（油镜）。、显微镜观察（油镜）。1.1.菌龄：应选择活跃生长期的培养物作革兰氏染色。菌龄：应选择活跃生长期的培养物作革兰氏染色。培养时间过长，或死亡及部分自溶，改变了细菌细培养时间过长，或死亡及部分自溶，改变了细菌细胞壁的通透性，造成阳性菌的假阴性反应。胞壁的通透性，造成阳性菌的假阴性反应。2.2.涂片不宜过厚，以免脱色不完全，造成假阳性。涂片不宜过厚，以免脱色不完全，造成假阳性。3.3.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。三、三、三、三、革兰氏染色注意问题及对策革兰氏染色注意问题及对策G G+G G-用用KOH区分革兰氏染色阴性和阳性细菌区分革兰氏染色阴性和阳性细菌*实验原理：实验原理：实验原理：实验原理：G G-：壁薄，肽聚糖含量低，类脂质含量高。脂多：壁薄，肽聚糖含量低，类脂质含量高。脂多糖和蛋白质的复合物遇强碱形成粘稠的胶胨状糖和蛋白质的复合物遇强碱形成粘稠的胶胨状物，可以拉出粘状丝来。物，可以拉出粘状丝来。G G+：壁厚，肽聚糖含量高，类脂质含量低。细胞：壁厚，肽聚糖含量高，类脂质含量低。细胞壁坚固，对强碱无此反应，不能拉出粘状丝来。壁坚固，对强碱无此反应，不能拉出粘状丝来。实验方法：实验方法：载玻片上滴一小滴载玻片上滴一小滴3%KOH3%KOH溶液溶液用接种环接挑取被检细菌于用接种环接挑取被检细菌于3%KOH3%KOH溶液中混匀溶液中混匀30-60 s30-60 s后观察菌液是否变粘稠，并拉出丝来后观察菌液是否变粘稠，并拉出丝来根据实验结果鉴别根据实验结果鉴别G G+和和G G-结果结果:1:1、p84 1.p84 1.（1 1）、（）、（2 2）：描述）：描述(绘绘)所观察细菌所观察细菌(G(G+和和G G-)的个体形态；的个体形态；2 2、描述、描述KOHKOH试验的结果；试验的结果；思考题思考题 1 1、p84 2.p84 2.（3 3）题）题 2 2、KOHKOH试验现象直观，可否取代现试验现象直观，可否取代现有染色方法，为什么？有染色方法，为什么？四、实验报告四、实验报告操作考核操作考核端正坐姿，臂悬空端正坐姿，臂悬空托住瓶底，慢拔塞托住瓶底，慢拔塞皿底在上，翻过来皿底在上，翻过来悬空倒下，轻晃动悬空倒下，轻晃动平推平板，勿再碰平推平板，勿再碰冷却凝固，倒放置冷却凝固，倒放置写上标记，在皿底写上标记，在皿底下次下次实验实验实验六实验六.细菌的鞭毛染色与运动性观察细菌的鞭毛染色与运动性观察