微生物实验3.pptx

医学微生物学实验综合性实验一v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）空气、手指皮肤细菌学检查结果分析菌落特征观察P11细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时）脓汁和粪便标本检验（录像）肠道致病菌的分离与鉴定（录像）油镜使用方法（讲解）空气的细菌学检查空气的细菌学检查组号时间地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU/m3 50,000NAT 86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数 A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟)CFU：colony forming unit 医院各类房间空气中细菌总数要求 细菌数分级细菌数分级 细菌总数细菌总数/M/M3 3 病房类型病房类型v最低细菌数 10 器官移植、心血管手术室、制剂室。v低细菌数 200 无菌室或其他手术室、婴儿室、产 房、术后恢复室、供应室。v一般细菌数 200500 普通病房、治疗室、放射科、按摩室。注1：以上为世界卫生组织建议标准。注2：我国卫生部要求，手术室、产房及婴儿室空气中细菌总数 不得超过500个/M3。液体或固体标本菌落总数测定v可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。v分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内。v倾注46营养琼脂培养基大约15ml，混合均匀。琼脂完全凝固以后，37培养48小时。v选择菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准测定标准。v将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)。1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮肤的细菌学检查第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。2人1块平板甲、丙常规洗手乙、丁标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁手指皮肤细菌学检查结果分析第1格为洗手前：+第2格为洗手后 常规(甲、丙)洗手方法：?标准(乙、丁)洗手方法：?第3格为消毒后：第4格空白对照：-细菌在固体培养基中的生长现象v菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。v菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性.v菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）v菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌落特征P11v大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约13mm)，小(直径约1mm以下)。v形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。v边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。v表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。v溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。v色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。细菌的纯培养v挑选单菌落:脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径12mm。选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落，进行接种。v斜面接种法P10（1组4支）甲普通平板黄色菌落1支斜面乙普通平板白色菌落1支斜面丙伊红美蓝紫黑菌落1支斜面丁伊红美蓝粉红菌落1支斜面标记：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。培养时间不得超过18小时。斜面接种法P10甲黄色,乙白色,丙紫黑,丁粉红。标记：组号，颜色安全警告v接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。v气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um通过呼吸道直接到达肺泡。vPike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。v实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。奥林巴斯奥林巴斯 CX21CX21型型 生物显微镜生物显微镜（实验柜内，实验柜内，每人一台）每人一台）注意：只能横放，不得竖放。奥林巴斯 CX21型 生物显微镜使用须知v显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作。v在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。如果拿住载物台和镜筒等部位搬运的话，有可能会造成损坏。显微镜各部件名称开关与调整光强v开或关之前，必须将亮度调整旋钮按箭头相反相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。v电源开关拨到侧为开，拨到侧为关闭。v按箭头方向转动亮度调整旋钮变亮，相反方向转动则变暗。放置标本v按箭头方向转动粗调旋钮降下载物台。v按箭头方向拉开载物台标本夹，自前向后将标本片放入平台，标本夹 轻轻放回原位。v转动上侧垂直移动杆和下侧水平移动杆，移动标本至光路中间。载物台位置刻度v载物台上的刻度方便确定标本位置，标本移动后可以快速回到原位。水平刻度的标识位置以机械载物台的位置来读取。垂直刻度的标识线以的位置来读取。聚焦v从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮，使物镜尽可能接近接近标本。一边看目镜，一边慢慢逆逆箭头方向转动粗调旋钮，使载物台下降下降。v看到标本以后，用微调旋钮来正确对焦。10倍物镜的工作距离工作距离（WD，从物镜到标本的 距离）为10.5mm。油镜的WD为0.13mm。调整瞳距v调整瞳距是调整双目间的距离，使两眼同时看到一个显微镜像，能防止观察时的疲劳。v方法：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右的视野一致。v标识的位置表示瞳距。请记住自己的瞳距值，以便下次观察时调整。调整屈光度数v调整观察者左右视力。以右眼看右侧的目镜，旋转粗微调粗微调旋转盘，对好焦距。以左眼看左侧的目镜，旋转屈光度屈光度调整环，对好焦距。调整聚光镜位置和孔径光阑v用聚光镜上下移动旋钮，将聚光镜转到最上面。v在孔径光阑环上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面。转换物镜v旋转物镜转盘，将希望使用的物镜（10倍、100倍）转到标本的上方。100倍浸油物镜使用方法v油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。v旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。v如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过12次浸油，排除油内气泡。显微镜油镜的使用P13v10物镜标本位置滴加香柏油100油镜浸泡油中,几乎与标本接触（工作距离0.13mm）细调节调焦，观察物像记录结果关闭电源。v油镜处理：擦镜纸拭去香柏油 擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭擦镜纸擦拭油镜。v显微镜罩上防尘罩 横放在实验柜内。实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请使用离你最近的电源插座。细菌的显微镜检查法v显微镜：光学显微镜v目镜：10倍v物镜：油镜头（90或100倍）v放大倍数：1090或100900或1000v镜油：香柏油或石蜡油v香柏油折射率（n1.515），玻片折射率（n1.52），石蜡油（n1.46），空气（n1.00）。油镜使用完毕必须擦拭油镜头。油透镜光线载玻片思考题v在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染?v空气的卫生标准规定如何?v你的实验结果说明了什么问题?v怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄球菌?v菌落特征主要描述哪几方面问题？任何挑选单菌落？医学微生物学实验综合性实验一v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）空气、手指皮肤细菌学检查结果分析菌落特征观察P11细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时）油镜使用方法（讲解）脓汁标本检验（录像）肠道致病菌的分离鉴定（录像）常用器材摆放顺序：电源插座常用器材摆放顺序：电源插座试管架试管架酒精灯酒精灯污物盘。污物盘。试管架上器材：按接种针、试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火接种环、油性笔和打火机的顺序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源机的顺序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧，使用以后必须放回原处，依次摆整齐。插座一侧，使用以后必须放回原处，依次摆整齐。实验室器材实验室器材 整齐有序整齐有序