微生物数量的测定.pptx
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1、v微生物的生长通常以群体的生长作为指标。群体生长表现微生物的生长通常以群体的生长作为指标。群体生长表现为细胞数目的增加或者细胞物质的增加。为细胞数目的增加或者细胞物质的增加。v测定微生物数量的主要方法:测定微生物数量的主要方法:显微镜直接计数法显微镜直接计数法(不辨死活)(不辨死活)平板菌落计数法(形成菌落的微生物)平板菌落计数法(形成菌落的微生物)P32P32光电比浊法光电比浊法(不用于颜色太深的样品)(不用于颜色太深的样品)测定细胞重量法(测定丝状真菌生长量)测定细胞重量法(测定丝状真菌生长量)测定细胞总氮量或总碳量(适于浓度较高的样品)测定细胞总氮量或总碳量(适于浓度较高的样品)。实验十
2、一、十一、显微微镜直接直接计数法数法目的要求目的要求v了解血球计数板的构造、计数原理和计了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法;数方法;v掌握显微镜下直接计数的技能。掌握显微镜下直接计数的技能。v显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。直接计数法优缺点v优点:直观、快速、操作简单。v缺点:不能区分死菌与活菌,所得为总数;不适于对运动细菌的计数。常用常用计菌器菌器v常用计数器有血球计数板(血细胞计数板)、Petroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等。v各种计数板的计数原理相同,只是血球
3、计数板较厚,不能使用油镜观察,只能计数较大的霉菌孢子和酵母菌;而后两种计菌器细菌,可以使用油镜观察,因此可以直接计数细菌。血球计数板血球计数板 Petroff-HauserPetroff-Hauser计菌器计菌器HawksleyHawksley计菌器计菌器v血球计数板是一块特制的载玻片,血球计数板是一块特制的载玻片,其上由四条槽构成三个平台;中其上由四条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短横槽隔成间较宽的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各列有一两半,每一边的平台上各列有一个方格网。个方格网。v血球计数板是一块特制的载玻片,血球计数板是一块特制的载玻片,其上由四条槽构成三个平台;中其上
4、由四条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短横槽隔成间较宽的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各列有一两半,每一边的平台上各列有一个方格网。个方格网。v每个方格网共分为九个大方格,每个方格网共分为九个大方格,中间的大方格即为中间的大方格即为计数室计数室。v血球计数板是一块特制的载玻片,血球计数板是一块特制的载玻片,其上由四条槽构成三个平台;中其上由四条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短横槽隔成间较宽的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各列有一两半,每一边的平台上各列有一个方格网。个方格网。v每个方格网共分为九个大方格,每个方格网共分为九个大方格,中间的大方格即为计数室。中间的大
5、方格即为计数室。v计数室的刻度一般有两种规格:计数室的刻度一般有两种规格:一种是一个大方格分成一种是一个大方格分成2525个中方个中方格,而每个中方格又分成格,而每个中方格又分成1616个小个小方格;另一种是一个大方格分成方格;另一种是一个大方格分成1616个中方格,而每个中方格又分个中方格,而每个中方格又分成成2525个小方格。个小方格。v血球计数板是一块特制的载玻片,血球计数板是一块特制的载玻片,其上由四条槽构成三个平台;中其上由四条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短横槽隔成间较宽的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各列有一两半,每一边的平台上各列有一个方格网。个方格网。v每个方
6、格网共分为九个大方格,每个方格网共分为九个大方格,中间的大方格即为计数室。中间的大方格即为计数室。v计数室的刻度一般有两种规格:计数室的刻度一般有两种规格:一种是一个大方格分成一种是一个大方格分成2525个中方个中方格,而每个中方格又分成格,而每个中方格又分成1616个小个小方格;另一种是一个大方格分成方格;另一种是一个大方格分成1616个中方格,而每个中方格又分个中方格,而每个中方格又分成成2525个小方格。个小方格。v无论是哪一种规格的计数板,每一个大方格中的小方格都是无论是哪一种规格的计数板,每一个大方格中的小方格都是400400个。每一个大方格边长为个。每一个大方格边长为lmmlmm,
7、则每一个大方格的面积为,则每一个大方格的面积为lmmlmm2 2,盖上盖玻片后,盖玻片与载玻片之间的高度为,盖上盖玻片后,盖玻片与载玻片之间的高度为0.lmm0.lmm,所,所以计数室的容积为以计数室的容积为0.lmm0.lmm3 3(万分之一毫升万分之一毫升)。计数方法数方法v计算:计算:1mL1mL菌液中总菌数菌液中总菌数=A/5*25*10=A/5*25*104 4*B=50000*A*B*B=50000*A*B1mL1mL菌液中总菌数菌液中总菌数=A/5*16*10=A/5*16*104 4*B=32000*A*B*B=32000*A*B其中其中B B为稀释倍数。为稀释倍数。v使用血球
8、计数板计数时,通常使用血球计数板计数时,通常数数5 5个中方格个中方格的总菌的总菌数数A A,然后求每个中方格的平均值,再乘上大方格,然后求每个中方格的平均值,再乘上大方格(计数室)中方格的数量,就得出一个大方格中的(计数室)中方格的数量,就得出一个大方格中的总菌数。数两个大方格总菌数,平均后,再换算成总菌数。数两个大方格总菌数,平均后,再换算成每毫升菌液中微生物细胞的数量。每毫升菌液中微生物细胞的数量。注意事注意事项v对于对于出芽的酵母菌出芽的酵母菌,芽体,芽体达到母细胞大小一半时,达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。即可作为两个菌体计算。v对于对于压线酵母压线酵母,按照数上,按照数
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