微生物染色.pptx
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1、微 生 物 染 色染色的意义微生物细胞小而透明,在普通光学显微镜下不易观察。染色后微生物细胞与背景形成明显的色差,从而能清楚的观察到其形态;用于鉴别猪链球菌染色照片染色染料简介主要有三大类:碱性染料、酸性染料、中性染料。碱性染料的离子带正电荷,可与带负电荷的物质结合。微生物蛋白质常带负电荷,故碱性染料常用。常用碱性染料有:美蓝、结晶紫、碱性复红和孔雀绿。染色染料简介酸性染料的离子带负电荷,能与带正电荷的物质结合。中性染料是碱性染料和酸性染料的结合物,故又称复合染料。染色方法普通染色法:利用一种染料使微生物着色革兰氏染色:细菌学中的鉴别性染色法芽孢染色法:区分芽孢和营养体的不同菌仪实验材料种:大
2、肠杆菌和四联球菌混合液,杀螟杆菌染色液:石炭酸复红液,结晶紫液,路哥尔碘液,芽孢染色液器:显微镜,载玻片,接种环,二甲苯,香柏油,擦镜纸,吸水纸,煤气灯实验步骤1.涂片 烧红无菌环,稍冷后无菌操作取试管中菌液于洁净的玻片中央,涂成薄层。如为固体培养基上的菌种,先在洁净的玻片中央放一滴蒸馏水,无菌操作取少许菌体与水滴混合,涂成薄层。干燥 室温中自然干燥,或在火焰高处烘干,但不能过烫,以手试不烫为宜固定 手执玻片一端,有菌膜的一面朝上,于火焰中通过3次。冷却后再加染料。普通染色法(1)4.染色 将玻片放平,在其上加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红染色液),染色约一分钟。5.水洗 染
3、色时间到后,用水冲去染料只流下的水无色为止。6.干燥 自然干燥或用吸水纸吸去水分。普通染色法(2)7.镜检 用油镜观察所制标本片并绘出其形态图革兰氏染色(1)初染:加草酸铵结晶紫染色液,染色,约一分钟后自来水小心冲洗。媒染:加路哥尔碘液,约一分钟水洗脱色:95%乙醇脱色20秒水洗复染:石炭酸复红染色液染色30秒水洗革兰氏染色(2)干燥 自然干燥或用吸水纸吸去水分。镜检 用油镜观察所制标本片并绘出其形态图。判断革兰氏染色反应。芽孢染色(1)染色 加5%孔雀绿水溶液于玻片上,微火加热至冒气,维持约5min,(期间需添加染色液,火焰要小。)冷却后水洗。用石炭酸复红染30秒水洗。干燥 自然干燥或用吸水纸吸去水分。芽孢染色(2)镜检 用油镜观察所制标本片并绘出其形态图。注意芽孢和营养体各自的颜色注意事项1.涂片的无菌操作;2.火焰烘干及固定时的温度控制;3.染色时间的掌握;4.水洗时水流不能急,不能冲有菌的一面;5.吸水时勿擦去菌体;6.革兰氏染色特别注意乙醇脱色时间的掌握,且勿使染色液干涸;7.芽孢染色加热要用微火,且要添加染色液。思考题1.芽孢染色加孔雀绿时为什麽要加热?2.如何判断视野中的景象是否确系标本?
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