微生物检验培养基质量控制技术.pptx
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1、培养基质量的重要性培养基质量的重要性 培养基是微生物试验的基础,直接影培养基是微生物试验的基础,直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。提供优质培养基的保证。主主 要要 内内 容容l培养基制备、使用、贮存中的注意事项培养基制备、使用、贮存中的注意事项l培养基质量控制培养基质量控制2010版药典附录版药典附录实例(培养基质量对实验结果的影响)实例(培养基质量对实验结果的影响)CHP与与USP的异同点的异同点同行的方法介绍同行的方法介绍新技术新技术l部分菌种在培养基上的典型特征部分菌
2、种在培养基上的典型特征 培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的水化培养基的水化 培养基水化时不得用铜锅或铁锅培养基水化时不得用铜锅或铁锅,以防有离以防有离 子混入培养基中子混入培养基中,影响微生物的生长;影响微生物的生长;配制培养基最常用的溶剂是纯化水配制培养基最常用的溶剂是纯化水,不能含不能含 有任何可能抑制或影响微生物生长的物质;有任何可能抑制或影响微生物生长的物质;培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的溶解培养基的溶解 在培养基分装灭菌前在培养基分装灭菌前,各成分应溶解均各成分应溶解均匀匀,使用电炉等设备煮沸培养基时使用电炉等设备煮沸培养基
3、时,应应用小火加热用小火加热,并边加热边搅拌并边加热边搅拌,避免培避免培养基焦化或爆沸溢出。养基焦化或爆沸溢出。培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的灭菌培养基的灭菌 已配制好的培养基必须立即灭菌已配制好的培养基必须立即灭菌 湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的培养基的pH微生物必须在适宜的微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。或体现其生物特性。调整培养基的调整培养基的pH,应用应用1 mol/LNaOH或或1 mol/L HCl调
4、整调整pH,一般灭菌前比最终,一般灭菌前比最终pH高高0.20.3。培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的保温培养基的保温 灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度温度,避免长时间保存在灭菌锅内避免长时间保存在灭菌锅内,造造成过度灭菌成过度灭菌,影响培养基的营养成分影响培养基的营养成分或选择性效果。或选择性效果。培养基使用过程中的注意事项培养基使用过程中的注意事项 培养基的接种培养基的接种 平板在接种使用时平板在接种使用时,表面必须无明表面必须无明 显潮湿水珠;显潮湿水珠;对于保存的培养基对于保存的培养基,需待温度回复需待温度回复 至室温后才
5、可使用至室温后才可使用,并且使用前应并且使用前应 检查;检查;培养基贮存过程中的注意事项培养基贮存过程中的注意事项 干燥培养基干燥培养基 应遵循先入先出的原则;应遵循先入先出的原则;贮存于阴凉干燥处贮存于阴凉干燥处,避免强光直射;避免强光直射;培养基贮存过程中的注意事项培养基贮存过程中的注意事项 已配制的培养基已配制的培养基 建议平板倾注后立即使用;建议平板倾注后立即使用;在平板上标上制备日期和在平板上标上制备日期和/或有效期或有效期 和名称;和名称;固体培养基灭菌后的再融化只允许固体培养基灭菌后的再融化只允许 一次一次;实实 例例三糖铁培养基(三糖铁培养基(TSI)未校正未校正pH时,不同厂
6、家的时,不同厂家的TSI培养基产培养基产硫化氢强度不一;硫化氢强度不一;校正校正pH7.5后,各培养基硫化氢反应均后,各培养基硫化氢反应均有改善有改善,不同厂家的不同厂家的TSI培养基产硫化氢培养基产硫化氢强度仍不相同;强度仍不相同;实实 例例三糖铁培养基(三糖铁培养基(TSI)由于培养基由于培养基pH太低太低,本身就是黄色本身就是黄色,细菌细菌生长后下层仍为黄色生长后下层仍为黄色,而斜面变为橙红而斜面变为橙红色色,易误判断为下层易误判断为下层“变为变为黄色黄色”。由。由此定为发酵菌,造成误判;此定为发酵菌,造成误判;培养基质量控制(培养基质量控制(2010版药典)版药典)培养基适用性检查培养
7、基适用性检查计数培养基计数培养基 控制菌检查用控制菌检查用培养基培养基 计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查对照培养基对照培养基 系指按培养基处方特别系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基,用于培养制备、质量优良的培养基,用于培养基适用性检查。由中国药品生物制品基适用性检查。由中国药品生物制品检定所研制及分发。检定所研制及分发。计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查 大肠埃希菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 白色念珠菌白色念珠菌 黑曲霉黑曲霉 白色念珠菌白色念珠菌营养琼脂培养基营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖酵
8、母浸出粉胨葡萄糖 琼脂培养基琼脂培养基 计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查 结果判定结果判定 被检培养基上的菌落平均数被检培养基上的菌落平均数 对照培养基上的菌落平均数对照培养基上的菌落平均数 菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致 计数培养基计数培养基 70%控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基适用性检查 促生长能力促生长能力 抑制能力抑制能力 指示能力指示能力 检查项目检查项目控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基适用性检查增菌培养基促生长能力检查:分别接增菌培养基促生长能力检查:分别接种不大于种不大于100cfu 的试验菌于被
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