微生物的实验室培养完成稿.pptx

知识回顾：知识回顾：果酒果酒-果醋果醋-腐乳腐乳-泡菜泡菜-酵母菌酵母菌醋酸菌醋酸菌毛毛霉霉乳酸菌乳酸菌微生物的实验室培养微生物的实验室培养病病 毒毒蘑蘑 菇菇微生物的类群微生物的类群微微生生物物原核类原核类真核类真核类非细胞类非细胞类 细菌、支原体、蓝藻等细菌、支原体、蓝藻等 一般都是个体微小、结构简单、数一般都是个体微小、结构简单、数量多、繁殖快、分布广泛等。量多、繁殖快、分布广泛等。酵母菌、霉菌、食用菌酵母菌、霉菌、食用菌草履虫、变形虫草履虫、变形虫病毒病毒微生物的共同特点：微生物的共同特点：一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基是由人工方法配制而成的，培养基是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的营养基质。专供微生物生长繁殖使用的营养基质。（1 1）按物理状态：固体培养基和液体培养基）按物理状态：固体培养基和液体培养基（2 2）按功能来分：选择培养基和鉴别培养基）按功能来分：选择培养基和鉴别培养基（3 3）按成分来分：天然培养基和合成培养基）按成分来分：天然培养基和合成培养基1.1.培养基的分类培养基的分类琼琼 脂脂 2、培养基的营养成分、培养基的营养成分1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分培养基组分提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g蛋白胨蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至定容至1000mL碳源、磷酸盐和维生素碳源、磷酸盐和维生素氮源和维生素氮源和维生素无机盐无机盐氢元素、氧元素氢元素、氧元素(1)(1)水水 (2)(2)碳源碳源 (3)(3)氮源氮源 (4)(4)无机盐无机盐(1)pH(1)pH值值 如如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或 微碱性。微碱性。(2)(2)特殊营养物质特殊营养物质-生长因子生长因子 如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维 生素。生素。(3)(3)氧气的含量氧气的含量 如如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件3 3、培养基内所需的其他条件、培养基内所需的其他条件单个单个或少数菌体或少数菌体1.1.定义：定义：4 4、菌落、菌落鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据固体培养基固体培养基子细胞群体子细胞群体(二二)无菌技术无菌技术1 1、获得纯净培养物的关键、获得纯净培养物的关键:2 2、无菌技术包括的四大方面：、无菌技术包括的四大方面：防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵（1 1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和行清洁和消毒消毒 ；（2 2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行进行灭菌灭菌 ；（3 3）为避免周围微生物污染，实验操作应在）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近旁进行；酒精灯火焰附近旁进行；（4 4）避免已）避免已灭菌灭菌处理的材料用具与周围物品处理的材料用具与周围物品相接触。相接触。（）消毒定义：（）消毒定义：使用较为温和的物理或化学方法，仅使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体杀死物体表面或内部的表面或内部的部分微生物的过程。部分微生物的过程。不包括芽孢和孢子。不包括芽孢和孢子。（2 2 ）灭菌的定义：）灭菌的定义：使用强烈的理化因素杀死物体使用强烈的理化因素杀死物体内外所内外所有微生物有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。消毒与灭菌消毒与灭菌1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法：2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：3 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法：4 4、紫外线消毒紫外线消毒 (1)(1)消毒的方法：消毒的方法：常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法 100 100煮沸煮沸5-6min5-6min70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或80 80 下煮下煮15min15min用用75%75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒毒;氯气消毒水源。氯气消毒水源。紫外灯照射紫外灯照射1 1、灼烧灭菌灼烧灭菌 接种环、接种针、接种环、接种针、试管口试管口2 2、干热灭菌干热灭菌160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h玻璃器皿的灭菌玻璃器皿的灭菌3 3、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min15-30min培养基的灭菌培养基的灭菌灭菌的方法：灭菌的方法：耐高温需保持干燥的耐高温需保持干燥的物品，物品，16017012小时小时接种环、接种针等接种环、接种针等金属用具金属用具7075、30min80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为较为温和温和理化方法，理化方法，杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基，培养基，100KPa、121、1530min消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较二、实验操作二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算称量计算称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌 接种方法：接种方法：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法（三）将接种后的培养基和一个未接种的培（三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入养基放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养12h12h和和24h24h后，后，观察并记录。观察并记录。（四）菌种的保存（四）菌种的保存1 1、下列有关培养基的叙述正确的是、下列有关培养基的叙述正确的是 ()A A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D D微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼 可见的单个细菌可见的单个细菌 2 2、不同培养基的具体配方不同，但一般都含有、不同培养基的具体配方不同，但一般都含有()A A碳源、磷酸盐和维生素碳源、磷酸盐和维生素 B B氮源和维生素氮源和维生素 C C水、碳源、氮源和无机盐水、碳源、氮源和无机盐 D D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素碳元素、氧元素、氢元素、氮元素 3 3下列常用的无菌操作中错误的是下列常用的无菌操作中错误的是 ()A A用酒精擦拭双手用酒精擦拭双手 B B用氯气消毒水源用氯气消毒水源 C C实验操作应在酒精灯火焰附近进行实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D D玻璃器皿玻璃器皿(吸管、培养皿吸管、培养皿)可用酒精擦拭可用酒精擦拭 4 4有关倒平板的操作错误的是有关倒平板的操作错误的是 ()A A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 思考思考1 1溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热一起加热?加琼脂的目的是什么加琼脂的目的是什么?可保证粘附在称量纸上的牛肉膏可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中也能溶于水中,减少误差减少误差.作为凝固剂作为凝固剂思考思考2 2在灭菌前在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？培养基的锥形瓶的目的是什么？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？在灭菌时能避免水蒸汽浸湿棉塞在灭菌时能避免水蒸汽浸湿棉塞,取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。杂菌污染的作用。不能不能因为培养皿要保持干燥因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌应该用干热灭菌.倒倒平平板板操操作作1.1.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？2.2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使既可以使培养基表面的水分更好地挥发培养基表面的水分更好地挥发，又可，又可以防止皿盖上的以防止皿盖上的水珠落入培养基水珠落入培养基，造成污染。，造成污染。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。平板培养微生物。（1）平板划线法）平板划线法答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。细菌污染环境和感染操作者。问题讨论问题讨论1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧接种环吗？为什么？2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.2.稀释涂布平板稀释涂布平板的操作方法的操作方法稀释涂布平板操作稀释涂布平板操作