微生物的实验室培养版.pptx

课题1 微生物的实验室培养(2)1.提供营养和条件2.防止污染1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g实验操作实验操作大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ：原则原则1.1.计算：计算：培养基用量培养基用量依配方计算各成分的用量依配方计算各成分的用量2.2.称量：称量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解、少量水加热溶解 取纸取纸蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl琼脂琼脂 补水定容补水定容4.4.调调pHpH、分装、封口：、分装、封口：5.5.灭菌：灭菌：6.6.倒平板：倒平板：培养基、培养皿培养基、培养皿分散成单个细胞分散成单个细胞,形成单个菌落形成单个菌落倒平板倒平板约约50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。养基。问题讨论问题讨论1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？的温度？3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？答：答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以以防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。微生物。二二.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：平板划线法：平板划线法：菌种菌种划划3 3个平板个平板1 1个不划线个不划线1.1.接种：接种：接种环接种环防止划破培养基防止划破培养基（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧接种环吗？为什么？避免接种环上可能存在的微生物污染培养物避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。环境和感染操作者。6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液1.移液管要经过灭菌。移液管要经过灭菌。2.操作时，在酒精灯操作时，在酒精灯火焰附近进行。火焰附近进行。稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼涂涂稀稀释释10103 3倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍浸浸平板划线法：平板划线法：二二.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：1.1.接种：接种：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：2.2.培养：培养：将将接种后接种后的培养基和一个的培养基和一个未接种未接种的培养基的培养基放入放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养12h12h24h24h后，后，观察并记录观察并记录三三.菌种的保藏：菌种的保藏：1.1.临时保藏：临时保藏：试管固体斜面培养基上试管固体斜面培养基上442.2.长期保存：长期保存：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020三三.结果分析与评价结果分析与评价 .培养基的制作是否合格培养基的制作是否合格培养基的制作是否合格培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 1 1 12d2d2d2d后无菌落生长后无菌落生长后无菌落生长后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。.接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。.是否进行了及时细致的观察与记录是否进行了及时细致的观察与记录是否进行了及时细致的观察与记录是否进行了及时细致的观察与记录培养培养培养培养12h12h12h12h与与与与24h24h24h24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。些细微的变化。些细微的变化。些细微的变化。【典例解析典例解析】例例例例:关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是()()()()A.A.A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.C.C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量解析：解析：解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于A A A A、B B B B选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NHNHNHNH4 4 4 4HCOHCOHCOHCO3 3 3 3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于C C C C选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；源；源；源；NaHCONaHCONaHCONaHCO3 3 3 3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaClNaClNaCl则则则则只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于D D D D选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如存在的，如存在的，如存在的，如NHNHNHNH3 3 3 3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。D D例例2 2：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是()()A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌 C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A A A说的是灭菌说的是灭菌说的是灭菌说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B B B是错误是错误是错误是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C C C是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。B B本课题知识小结本课题知识小结: