微生物的实验室培养.pptx

微生物微生物:1.1.特点：特点：结构简单结构简单,个体微小个体微小.通常要用光学显微镜或通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体且体内一般不含有叶绿素内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用不能进行光合作用.一、基础知识2.微生物包括五类微生物包括五类病病 毒毒细细 菌菌放线菌放线菌真真 菌菌原生动物原生动物一、培养基一、培养基概念：人们按照微生物对营养物质的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。养基质。固体培养基固体培养基 用于微生物的分离、计数、鉴定用于微生物的分离、计数、鉴定 液体培养基液体培养基 常用于工业生产常用于工业生产分分类类固体培养基：菌落半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)观察微生物的运动、鉴定菌种等观察微生物的运动、鉴定菌种等液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长微生物需要的营养物质微生物需要的营养物质 （1 1）一般都含有一般都含有水、碳源、和氮水、碳源、和氮源、源、无机盐无机盐等等营养物质营养物质 （2 2）还需要满足微生物生长对）还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质 (例如例如生长因子即细菌生生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物长必需，而自身不能合成的化合物,如如维生素维生素)以及以及氧气、氧气、渗透压渗透压等等的要求。的要求。1.碳源：为微生物提供碳元素。为微生物提供碳元素。无机碳化合物无机碳化合物CO2、NaHCO3等等有机碳有机碳化合物化合物糖类糖类（最常用的碳源，尤其是葡萄糖最常用的碳源，尤其是葡萄糖）烃类、醇类、脂肪酸烃类、醇类、脂肪酸蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）2.氮源:N2NH3等等有机物中的氮（有机物中的氮（还还有尿素）有尿素）无机氮无机氮牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨为微生物提供氮元素。为微生物提供氮元素。圆褐固氮菌、硝化细菌、大肠杆菌圆褐固氮菌、硝化细菌、大肠杆菌氨盐、硝酸盐等是常用的氮源氨盐、硝酸盐等是常用的氮源氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是()A碳源 B氮源 C无机盐 D特殊营养物质A思考：C注意：注意：1、最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖、最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖2、最常用的氮源是铵盐、硝酸盐、最常用的氮源是铵盐、硝酸盐3、对异养生物而言，含、对异养生物而言，含C、H、O、N的化合物既的化合物既是碳源，也是氮源，如蛋白质是碳源，也是氮源，如蛋白质2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不管哪种培养基，一般都含有水、无机盐、碳源和氮源等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求3.培养基的成分1 1、消毒、消毒 使用使用较温和较温和的物理或化学方法仅的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物害的微生物（不包括不包括芽孢和孢子芽孢和孢子）。）。2 2、灭菌、灭菌 使用使用强烈的理化因素强烈的理化因素杀死物体内杀死物体内所有的微生物，所有的微生物，包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子。二、无菌技术二、无菌技术2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 比较比较项目项目理化因素的理化因素的作用强度作用强度消灭微生物的消灭微生物的程度程度芽孢和孢子能芽孢和孢子能否被消灭否被消灭消毒消毒较为温和较为温和部分生活状态部分生活状态的微生物的微生物不能不能灭菌灭菌强烈强烈全部微生物全部微生物能能常用的消毒方法常用的消毒方法1 1、煮沸消毒法：、煮沸消毒法：100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、用、用75%75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4 4、氯气消毒水源、氯气消毒水源5 5、紫外线消毒、紫外线消毒二、无菌技术二、无菌技术1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌、干热灭菌：160 160 -170 170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min15-30min。常用的灭菌方法常用的灭菌方法二、无菌技术二、无菌技术高压蒸气灭菌的原理是（）A高压使细菌DNA变性 B高压使细菌蛋白质凝固变性 C高温烫死细菌 D高温使细菌DNA变性B（一）制备培养基（一）制备培养基 牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基1.1.计算计算2 2称量称量3 3溶化溶化4 4灭菌灭菌5 5倒平板倒平板三、实验操作三、实验操作倒平板技术倒平板技术1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。课本习题：课本习题：1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左左右时，才能用来倒平板。你用什么办法右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？用来培养微生物吗？为什么？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。染。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。1b.纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.菌落菌落 菌菌落落是是鉴鉴定定菌菌种种的的重重要要依依据据平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。1.接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置但要在培养基不同位置连续划线多次连续划线多次.2.划线划线首尾不能相接首尾不能相接3.划线后划线后,培养皿培养皿倒置培养倒置培养划线分离法注意事项划线分离法注意事项:其他画线分离图：其他画线分离图：答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板的操作方法答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养伊红美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢产物与伊红美蓝结合，使菌落呈黑色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。例如：鉴别大肠杆菌培养基大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。2、长期保存：甘油冷冻管藏法本课题知识小结:四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。养学生良好的科学态度与习惯。