微生物的实验室培养新课.pptx
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1、专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用一、培养基作用、种类一、培养基作用、种类二、无菌技术二、无菌技术三、制备牛肉膏蛋白胨培养基三、制备牛肉膏蛋白胨培养基四、纯化大肠杆菌四、纯化大肠杆菌主要内容主要内容一、培养基一、培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求,配人们按照微生物对营养物质的不同需求,配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基置出供其生长繁殖的营养基质称培养基 一般的培养基均需要一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和碳源、氮源、无机盐和水水等等培养基的基本成分培养基的基本成分 液体培养基:液体培养基:(一般用锥形瓶盛装)(一般用锥形瓶盛装)固体培养基:固体培养基:(一般用试
2、管或培养皿盛装,(一般用试管或培养皿盛装,在液体培养基的基础上再添加琼脂。)在液体培养基的基础上再添加琼脂。)培养基的种类培养基的种类1、按物理状态分:、按物理状态分:2、按功能分:、按功能分:选择培养基选择培养基:加入某种化学物质,从众多微:加入某种化学物质,从众多微生物中分离出所需微生物生物中分离出所需微生物鉴别培养基鉴别培养基:加入某种试剂,鉴别不同种类:加入某种试剂,鉴别不同种类的微生物的微生物加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:几种选择培养基举例:几种选择培养基举例:分离酵母菌、霉菌等真
3、菌分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离固氮菌 分离自养型微生物分离自养型微生物唯一碳源为纤维素的培养基唯一碳源为纤维素的培养基分解纤维素的细菌分解纤维素的细菌二、无菌技术二、无菌技术 无菌技术无菌技术泛指在培养微生物的操作中,泛指在培养微生物的操作中,所所有防止杂菌污染的方法技术有防止杂菌污染的方法技术。获得纯净培养物的获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入关键是防止外来杂菌的入侵侵,无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。,无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。消毒消毒 1、无菌技术的种类、无菌技术的种类灭菌灭菌 使用较为温和的方法(酒精、紫外线)使用较为温和的方法(酒精、紫外线)来杀死部分对人体
4、有害的微生物。来杀死部分对人体有害的微生物。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒;洁消毒;将培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌;将培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌;接种的过程要在酒精灯火焰附近进行。接种的过程要在酒精灯火焰附近进行。避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触使用较为强烈的理化因素杀死物体内外使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物(包括芽孢和孢子)。的所有微生物(包括芽孢和孢子)。(1 1)、灼烧灭菌:)、灼烧灭菌:接种用具和接种过程中的接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火
5、焰的充分燃烧层中试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。进行灼烧灭菌。2、常用的消毒与灭菌的方法、常用的消毒与灭菌的方法(2 2)、干热灭菌:)、干热灭菌:将玻璃器皿、金属用具等能将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内,在内,在160160170170O OC C中加热中加热1 12h2h即可。即可。(3 3)、高压蒸汽灭菌:)、高压蒸汽灭菌:将需灭菌的物品放到盛有将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内煮沸,待冷空气排尽后,密闭水的高压灭菌锅内煮沸,待冷空气排尽后,密闭继续加热至锅内压力到继续加热至锅内压力到10
6、0kPa100kPa,温度到,温度到121121O OC C后,后,维持维持151530min30min即可。即可。(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算:计算:物质物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl琼脂琼脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至1000mL1000mL2.2.称量称量 准确称取各种成分,注意事项:牛肉膏要放准确称取各种成分,注意事项:牛肉膏要放在称量纸上称量,牛肉膏、蛋白胨都易吸潮,称在称量纸上称量,牛肉膏、蛋白胨都易吸潮,称取时动作要迅速,称后及时盖上瓶盖。取时动作要迅速,称后及时盖上瓶盖。三、实验操
7、作三、实验操作 3.3.溶化:溶化:先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯,加少量水,加热至牛肉膏溶化并与称量纸杯,加少量水,加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后,用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和分离后,用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠,用玻璃棒搅拌使之溶解,再加入琼脂,氯化钠,用玻璃棒搅拌使之溶解,再加入琼脂,搅拌,待溶解后,加自来水定溶至搅拌,待溶解后,加自来水定溶至100mL100mL。4.4.灭菌:灭菌:将配制好的培养基放到锥形瓶中(瓶将配制好的培养基放到锥形瓶中(瓶口加棉塞,包上牛皮纸),连同培养皿(口加棉塞,包上牛皮纸),连同培养皿(3 35 5套,套,用
8、几层报纸包好)一起放到高压锅内灭菌。用几层报纸包好)一起放到高压锅内灭菌。5.5.倒平板:倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到5050O OC C左右时倒平板。左右时倒平板。倒平板操作的讨论倒平板操作的讨论 1.1.培养基灭菌后要冷却到培养基灭菌后要冷却到5050O OC C时倒平板。用什时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度?么办法来估计培养基的温度?用手触摸锥形瓶,温度下降到刚刚不烫手时用手触摸锥形瓶,温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。即可开始倒平板。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养通过灼烧灭菌,防止瓶口
9、的微生物污染培养基。基。3.3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置?平板冷凝后,为什么要将平板倒置?平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。的水珠落入培养基,造成污染。4.4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?微
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