微生物的利用微生物的选择培养和计数.pptx
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1、微生物的应用微生物的应用土壤中微生物的分离与计数土壤中微生物的分离与计数实验设计一实验设计一实验目的:实验目的:(1)从土壤中能分离出能够分解尿素的细菌)从土壤中能分离出能够分解尿素的细菌(2)统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌)统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌实验原理:实验原理:(1)尿素)尿素CO(NH2)2,可以被含有脲酶的微生物降解,可以被含有脲酶的微生物降解,降解成氨后可以被植物吸收,是重要的农田氮肥降解成氨后可以被植物吸收,是重要的农田氮肥(2)尿素略呈中性,如果被分解将产生)尿素略呈中性,如果被分解将产生NH3,溶液略呈碱性溶液略呈碱性(3)尿素高温、高压下会被降解
2、)尿素高温、高压下会被降解过滤灭菌:使用过滤灭菌:使用0.22m 0.22m 孔径过滤器孔径过滤器尿素的灭菌可供参考的资料可供参考的资料v资料资料1:土壤是:土壤是“微生物的天然培养基微生物的天然培养基”,土壤中,土壤中的微生物大约的微生物大约70%90%是细菌,主要分布在是细菌,主要分布在距地表约距地表约38cm的土壤层的土壤层v资料资料2:样品稀释程度直接影响平板上生长的菌落:样品稀释程度直接影响平板上生长的菌落数,通常选用一定稀释范围的样品液进行培养数,通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数在以保证获得菌落数在30300之间,适于计数的之间,适于计数的平板平板v资料资料3
3、:不同微生物需要不同的培养温度和时间,:不同微生物需要不同的培养温度和时间,细菌一般在细菌一般在3037的温度下培养的温度下培养12d;放线;放线菌一般在菌一般在2528温度下培养温度下培养57d;而霉菌一;而霉菌一般在般在2528的温度下培养的温度下培养34d;定期观察;定期观察菌落的形态菌落的形态 特征包括菌落的形状、大小、隆起程特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等,统计并记录数据度和颜色等,统计并记录数据v以尿素为唯一氮源的固体选择培养基以尿素为唯一氮源的固体选择培养基v尿素、细菌过滤器尿素、细菌过滤器v土壤原液、装有无菌水的试管、移液器、土壤原液、装有无菌水的试管、移液器、枪头枪
4、头v培养皿、涂布器(三角刮刀)培养皿、涂布器(三角刮刀)v酒精棉球、镊子酒精棉球、镊子v酒精灯、火柴酒精灯、火柴v记号笔记号笔可以参考的实验用具可以参考的实验用具可供使用的实验技术可供使用的实验技术v1.培养基的制备技术培养基的制备技术v2.无菌操作技术无菌操作技术v3.接种技术接种技术v4.培养技术培养技术v5.微生物的数量统计技术(计数):微生物的数量统计技术(计数):在统在统计菌落数目时,常用来统计样品中活菌数计菌落数目时,常用来统计样品中活菌数目的方法是目的方法是 稀释涂布平板法稀释涂布平板法。除此之外,。除此之外,显微镜直接计数显微镜直接计数 也是测定微生物数量的常也是测定微生物数量
5、的常用方法。用方法。稀释涂布计数法稀释涂布计数法v采用稀释涂布平板法统计菌落数目时,培养基表采用稀释涂布平板法统计菌落数目时,培养基表面生长的一个菌落,来源于面生长的一个菌落,来源于 样品稀释液中一个活样品稀释液中一个活菌菌。通过统计。通过统计 平板上的菌落数平板上的菌落数,就能推测出样,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在般选择菌落数在 30300 的平板进行计数的平板进行计数v从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是计算方法是(平均菌落数(平均菌落数涂布的稀释液体
6、涂布的稀释液体积)积)稀释倍数稀释倍数。v利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是关键是 恰当的稀释度恰当的稀释度。显微直接计数法显微直接计数法v又称为血球计数板直接计数又称为血球计数板直接计数v观察到的红细胞平均数观察到的红细胞平均数 观察到的细菌平均数红观察到的细菌平均数红细胞含量细胞含量 细菌含量细菌含量血球计数板,通常是一块特制的载玻片,其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网。如左图。显微直接计数法显微直接计数法(血球计数板直接计数)血球计数板直接计数)v每个方格网共分九个大方格,中间的大每个方格网
7、共分九个大方格,中间的大方格即为计数室,微生物的计数就在计方格即为计数室,微生物的计数就在计数室中进行。计数室构造如左图。数室中进行。计数室构造如左图。v 计数室的刻度一般有两种规格,一种计数室的刻度一般有两种规格,一种是一个大方格分成是一个大方格分成2525个中方格,而每个个中方格,而每个中方格又分成中方格又分成1616个小方格;另一种是一个小方格;另一种是一个大方格分成个大方格分成1616个中方格,而每个中方个中方格,而每个中方格又分成格又分成2525个小方格。但无论是哪种规个小方格。但无论是哪种规格的计数板,每一个大方格中的小方格格的计数板,每一个大方格中的小方格数都是相同的,即数都是相
8、同的,即1625=4001625=400小方格,小方格,如左图。如左图。计数室血球计数板25161625v 每一个大方格边长为每一个大方格边长为l mml mm,则每一大方格的面积为,则每一大方格的面积为l mm l mm 2 2,盖上盖玻片后,载玻片与盖玻片之间的高,盖上盖玻片后,载玻片与盖玻片之间的高度为度为0.1 mm0.1 mm,所以计数室的容积为,所以计数室的容积为0.1 mm0.1 mm3 3。v设五个中方格中总菌数为设五个中方格中总菌数为A A,菌液稀释倍数为,菌液稀释倍数为B B,那,那么,一个大方格中的总菌数么,一个大方格中的总菌数(即即0.1mm0.1mm3 3中的总菌数中
9、的总菌数)为为A/525BA/525B。因为因为:1 ml=lc m:1 ml=lc m3 3=1 000mm=1 000mm3 3,故,故:l ml:l ml菌液中的菌液中的总菌数为:总菌数为:A/525l0l 000BA/525l0l 000BA/525l0l 000BA/525l0l 000B可供参考的实验流程可供参考的实验流程可供参考的实验流程可供参考的实验流程接接接接 种种种种培培培培 养养养养涂布平板法涂布平板法涂布平板法涂布平板法鉴鉴鉴鉴 定定定定采集土样采集土样采集土样采集土样制备土壤稀释液制备土壤稀释液制备土壤稀释液制备土壤稀释液菌落计数菌落计数菌落计数菌落计数酚红指示剂酚红
10、指示剂酚红指示剂酚红指示剂请依据实验请依据实验目的、原理目的、原理和可供参考和可供参考的资料和实的资料和实验流程进行验流程进行实验设计并实验设计并将方案写在将方案写在学案的相应学案的相应位置位置实验设计方案实验设计方案v土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么?土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么?土壤中营养物质含量丰富,环境条件适宜等。土壤中营养物质含量丰富,环境条件适宜等。v29 实验过程:实验过程:1)取土样用的小铁铲和盛土样)取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要的的信封在使用前都要灭菌灭菌。2)应在)应在火焰火焰旁称旁称取土壤取土壤 10 g。将称好的土样倒入盛有。将称好的
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