戊肝诊断试剂在医院及疾控的应用.pptx
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1、戊肝诊断试剂在医院及疾控的应用戊肝诊断试剂在医院及疾控的应用北京万泰生物药业股份有限公司北京万泰生物药业股份有限公司技术工程师技术工程师 崔伟崔伟2 2一、戊型肝炎相关概念及特点戊型肝炎由戊型肝炎病毒(戊型肝炎由戊型肝炎病毒(HEVHEV)引起,)引起,HEVHEV是是单股正链单股正链RNARNA病毒病毒,属于嗜肝病毒科属于嗜肝病毒科.约占临床约占临床散发型肝炎的散发型肝炎的151520%20%,戊肝在病毒性肝炎中,戊肝在病毒性肝炎中病死率最高,孕妇病死率可高达病死率最高,孕妇病死率可高达20%20%。传播途径传播途径:主要经胃肠道传播,常通过水源和主要经胃肠道传播,常通过水源和食源暴发或流行
2、食源暴发或流行,丙球蛋白免疫无效丙球蛋白免疫无效临床症状临床症状:厌食、乏力、恶心、巩膜黄染、右厌食、乏力、恶心、巩膜黄染、右上腹部不适、呕吐、肝脏肿大等上腹部不适、呕吐、肝脏肿大等.其临床症状其临床症状与甲肝类似。与甲肝类似。3 3戊肝不同临床阶段的戊肝不同临床阶段的HEVHEV感染指标感染指标临床阶段临床阶段ALTALTRNARNAIgMIgMIgMIgMIgGIgG戊肝急性期戊肝急性期+近期隐性感染近期隐性感染-+戊肝恢复期戊肝恢复期-+既往感染既往感染-+4 4HEV-HEV-IgM M是良好的近期感染标志物是良好的近期感染标志物戊肝病程中各感染指标的变化过程清楚显示,HEV-IgMI
3、gM抗体是一个良好的戊肝病毒近期感染指标。5 5二二.优良的诊断试剂是检测结果优良的诊断试剂是检测结果准确可靠的保证准确可靠的保证优质的抗原是检测试剂的关键!优质的抗原是检测试剂的关键!6 6关键:构象抗原现有试剂以线性表位为主的重组蛋白或现有试剂以线性表位为主的重组蛋白或合成肽作为抗原,未能模拟出合成肽作为抗原,未能模拟出HEVHEV最主要最主要的构象依赖性抗原表位。的构象依赖性抗原表位。优质的抗原是检测试剂的关键优质的抗原是检测试剂的关键!7 72.1 HEV基因ORF1主要编码与病毒RNA复制有关的非结构蛋白,ORF2为HEV的主要结构基因编码区,编码病毒衣壳蛋白,ORF3基因编码产物p
4、ORF3为磷蛋白。8 8 试剂的关键试剂的关键E2E2抗原的发现及其特征抗原的发现及其特征 1998199819981998年,用大肠杆菌年,用大肠杆菌年,用大肠杆菌年,用大肠杆菌表达表达表达表达HEVHEVHEVHEV结构蛋白结构蛋白结构蛋白结构蛋白ORF2ORF2ORF2ORF2的一个片段的一个片段的一个片段的一个片段(E2)(E2)(E2)(E2)时发时发时发时发现,该蛋白可以自发现,该蛋白可以自发现,该蛋白可以自发现,该蛋白可以自发形成二聚体,并且二形成二聚体,并且二形成二聚体,并且二形成二聚体,并且二聚体蛋白对戊肝恢复聚体蛋白对戊肝恢复聚体蛋白对戊肝恢复聚体蛋白对戊肝恢复期血清有极强
5、的反应期血清有极强的反应期血清有极强的反应期血清有极强的反应性,这一反应性随着性,这一反应性随着性,这一反应性随着性,这一反应性随着二聚体的解聚而消失二聚体的解聚而消失二聚体的解聚而消失二聚体的解聚而消失 。Western Blot(See:J Med Virol,2001,64:125-132)单体二聚体SDS-PAGE9 9E2E2抗原反应性:抗原反应性:对戊肝急性期血清和多年后的恢复期血对戊肝急性期血清和多年后的恢复期血清有明显的反应,恢复期血清的反应性集中在二聚体上。清有明显的反应,恢复期血清的反应性集中在二聚体上。急性期血清急性期血清(10例例)恢复期血清恢复期血清(8例例)二聚体二
6、聚体E2单单 体体E210102.2 2.2 具有动物模型的诊断试剂具有动物模型的诊断试剂具有动物模型的诊断试剂具有动物模型的诊断试剂(恒河猴恒河猴恒河猴恒河猴HEVHEVHEVHEV感染模型感染模型感染模型感染模型)感染时间(周)感染时间(周)F9HEVHEV感染、发病与抗体发生过程感染、发病与抗体发生过程1111感染时间(周)感染时间(周)N2HEVHEV感染、发病与抗体发生过程感染、发病与抗体发生过程1212感染时间(周)感染时间(周)F4HEVHEV感染、发病与抗体发生过程感染、发病与抗体发生过程1313献血员中献血员中HEVHEV检测:检测:E2-IgM(+)E2-IgM(+)、E2
7、-IgG(-)E2-IgG(-)、GL-GL-IgMIgM和和IgGIgG均均(-)(-)的献血员的献血员206206血清血清HEV RNAHEV RNA基因分型基因分型I型IV型IV型II型III型1414206血清可感染猴子15155278构象性表构象性表位位线性表线性表位位猴HEV感染过程中各项指标消长分析1616三三.HEV ELISA.HEV ELISA 试剂试剂 与与 临床急性肝炎诊断临床急性肝炎诊断17173.1 3.1 人们对戊型肝炎的重视逐渐增强人们对戊型肝炎的重视逐渐增强新的中华人民共和国食品安全法实施条例实施条例对食品安全法中较为原则的制度作了具体规定:食品从业者应食品从
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