化学毕业论文-女贞树根中黄酮提取及其清除羟基自由基初探.docx
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1、化学毕业论文 女贞树根中黄酮提取及其清除羟基自由基初探目录摘要关键词AbstractKeywords前言11 实验材料、试剂及仪器21.1 实验材料21.2仪器21.3 试剂22 实验方法22.1女贞树根的采集与预处理22.2 女贞树根黄酮的提取及其定性检验22.2.1女贞树根黄酮的提取.32.2.2提取液的定性检验.32.3芦丁标准溶液的配制和标准曲线的绘制. 32.3.1芦丁标准溶液的配制.32.3.2测定方法依据. 32.3.3芦丁标准溶液最大吸收波长的测定. .32.3.4芦丁标准曲线的绘制.32.4 单因素实验32.4.1乙醇浓度的选择32.4.2 料液比的选择42.4.3 回流提取
2、温度的选择42.4.4 回流提取时间的选择42.5 正交实验42.6比较提取液、芦丁溶液、BHT溶液对羟基自由基的清除43.实验结果与分析53.1 女贞根黄酮提取液的定性检验53.2 芦丁和女贞根黄酮提取液最大吸收波长的测定53.3 标准曲线的绘制及其线性回归方程53.4单因素实验53.4.1乙醇浓度的选择63.4.2 料液比的选择73.4.3 回流提取温度的选择83.4.4 回流提取时间的选择93.5 正交实验93.6比较提取液、芦丁溶液、BHT溶液对羟基自由基的清除104.结论.11参考文献12致谢13 女贞树根中黄酮提取及其清除羟基自由基初探摘要:采用乙醇回流法提取女贞树根中的黄酮,以乙
3、醇浓度、提取温度、提取时间、液料比为考察因素,对女贞树根黄酮的提取工艺进行单因素及正交实验,并探究了提取液清除羟基自由基。结果表明,乙醇回流法提取女贞树根中黄酮的最佳条件为:乙醇浓度70%,温度75,料液比1:15(g/mL),提取时间2.5h,此条件下黄酮提取得率为3.32%。同体积不同浓度的女贞根黄酮提取液与芦丁溶液和BHT溶液清除羟基自由基的能力,在70200ug/mL浓度范围内,强弱顺序为芦丁溶液女贞根黄酮提取液BHT溶液,表明在70200ug/mL浓度范围内,女贞根黄酮提取液能较好的清除羟基自由基。关键词:女贞树根;黄酮;提取;清除羟基自由基 Flavonoids and their
4、 scavenging of privet roots Abstract: The flavonoids in the ethanol reflux method to extract privet roots, ethanol concentration, extraction temperature, extraction time, liquid feed ratio for the investigated factors privet roots flavonoids extraction process of a single factor and orthogonal exper
5、iments, andexplore extract Clear the hydroxyl radical. The results showed that the extract privet roots, ethanol reflux method flavonoids: 70% of the ethanol concentration, temperature 75 C, the solid-liquid ratio of 1:15 (g / mL), extraction time 2.5 h, flavonoids mentioned under this condition ach
6、ieved was 3.32%. The same size but different concentrations of privet root flavonoid extract and rutin solution and BHT solution to remove the ability of the hydroxyl radical, 70 200ug/mL concentration range, the strength of the order of rutin solution privet root flavonoids extract BHT solution, in
7、dicating that at 70 200ug/mL concentration range, the privet root flavonoid extract better scavenging.Keywords: privet roots; flavonoids; extract; scavengingII女贞树根中黄酮提取及其清除羟基自由基初探前 言黄酮类化合物(flavonoes compounds)泛指两个苯环(A与B)通过三个碳原子相互联结而成的一系列化合物1 。黄酮类化合物广泛存在于植物中,而且生理活性多种多样,在花、叶、果等组织中,一般多以苷的形式存在2。黄酮类化合物具有
8、广泛的生物活性,包括抗氧化,抗衰老,抗菌,抗肿瘤等,此外,黄酮类化合物还具有降压、降血脂增加冠脉流量、强心、抗心律不齐等药理作用3。女贞(L igu strum lucidum)是木犀科女贞属常绿乔木, 广泛分布于亚洲国家。查阅相关资料,知目前提取黄酮的方法有水提法有机溶剂提取法碱性水或碱性稀醇提取法微波提取法超声波提取法酶解法超临界流体萃取法双水相萃取分离法4。有研究表明用乙醇水溶液提取女贞子中的黄酮,浸出率高, 且能够回收乙醇,极大降低了成本5。故本实验采用乙醇水溶液提取女贞根中黄酮含量的提取。刘晓庚等对女贞果实进行了抗氧化性研究6,但对女贞根中黄酮类化合物的提取及清除羟基自由基研究尚未有
9、报道,为了充分利用女贞资源,本论文从两方面进行探究:一通过单因素及正交实验,确定最佳提取条件;二初步探究女贞根黄酮提取液清除羟基自由基的能力,为进一步开发和利用作一些参考。1实验材料、试剂及仪器1.1 实验材料女贞树根(采集于楚雄师院老校区实验室后)1.2仪器仪器:722-S型可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司);HH-S2S恒温水浴锅(金坛市大地自动化仪器厂);CP214C电子天平(奥豪斯仪器有限公司制造); SHZ-A型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);新型密封式粉碎机(广州市大祥电子机械设备有限公司);回流冷凝装置。1.3试剂芦丁(USP)、BHT、无水乙醇、氢氧化钠、
10、硝酸铝、亚硝酸钠、三氯化铁、三氯化铝、浓盐酸、锌粉、水杨酸、过氧化氢(30%)(以上均为国产分析纯),实验室自制的蒸馏水和超纯水。2实验方法2.1女贞树根的采集与预处理女贞根洗净晒干粉碎2.2女贞树根黄酮的提取及其定性检验2.2.1女贞树中根黄酮的提取称取3.0g女贞根粉置于100mL的圆底烧瓶中,加入60mL70%的乙醇溶液,在80的恒温水浴锅中回流2h,过滤,用70%的乙醇溶液反复洗涤圆底烧瓶,将滤液定容至100.00mL,制得提取液。2.2.2提取液的定性检验(1)盐酸镁粉反应:取1.0mL提取液于试管中加适量镁粉摇匀,再加入浓盐酸5滴,观察其泡沫颜色。若提取液中含有黄酮类化合物,则显橙
11、红色7。(2)三氯化铝反应:用胶头滴管滴3滴提取液在滤纸上,滴加2滴1%的三氯化铝乙醇溶液,观察颜色变化。若提取液中含有黄酮类化合物,则显黄色7。(3)三氯化铁反应:用胶头滴管滴3滴提取液在白色点滴板上,加2滴1%的三氯化铁乙醇溶液,观察颜色变化。若提取液中含有黄酮类化合物,则显墨绿色7。(4)氢氧化钠反应:用胶头滴管滴3滴提取液在滤纸上,滴加2滴4%的氢氧化钠溶液,观察颜色变化。若提取液中含有黄酮类化合物,则显黄色7。2.3芦丁标准溶液的配制和标准曲线的绘制2.3.1芦丁标准溶液的配制将芦丁置于干燥箱中,在120下干燥1.5h,冷却后准确称取芦丁标准品10mg,用70%的乙醇溶液溶解,并定容
12、至50.00mL,制得浓度为0.20mg/mL的芦丁溶液。2.3.2测定方法依据以芦丁标准液为对照品测定女贞树根中总黄酮的提取得率,黄酮与Al3+进行络合反应,在碱性条件形成络合物8,在可见光区能获得稳定的特征吸收峰,吸光度值与黄酮浓度服从朗伯比尔定律,可通过比色法进行测量9。 2.3.3芦丁标准溶液最大吸收波长的选择用移液管精确移取芦丁标准溶液0.50mL,置于25.00mL的比色管中,加入0.30mL 5%的亚硝酸钠溶液,混匀,放置6min;再加入0.30mL 10%的硝酸铝溶液,混匀,放置6min;再加入4.00mL 4%的氢氧化钠溶液,混匀,放置6min;再用浓度为70%的乙醇定容至1
13、0.00mL,摇匀,放置6min后,以试剂空白做参比,在450570nm的波长范围内,每隔10nm测定吸光度,确定最大吸收波长(此后的吸光度均在该波长下测定)。用同样的方法测定女贞根黄酮提取液的吸光度。2.3.4芦丁标准曲线的绘制精确吸取芦丁标准溶液0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.503.00 mL于7支25.00mL的比色管中,显色方法同2.3.3,在波长为510nm处测定吸光度(以第一支为空白溶液)。以芦丁溶液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。2.4单因素实验2.4.1乙醇浓度的选择各称取3.0g女贞根粉置于5个100mL的圆底烧瓶中,分别加入60mL不同浓
14、度的乙醇溶液,在80的恒温水浴锅中回流2h,过滤,用相应浓度的乙醇溶液反复洗涤圆底烧瓶,滤液定容至100.00mL。然后用移液管精确移取女贞根黄酮提取溶液0.50ml,置于25.00mL的比色管中,显色方法同2.3.3,在波长为510nm处测定吸光度,平行实验三组。再把吸光度值带入芦丁标准曲线的线性回归方程,计算出提取液的黄酮浓度。最后计算出女贞树根总黄酮提取得率。总黄酮提取得率的计算公式:提取得率(CnV)m100%其中:C为稀释以后提取液的浓度(mg/mL),n为稀释倍数,V为提取液定溶后的体积(mL),m为样品质量(mg)。2.4.2料液比的选择各称取5份不同质量的女贞根粉置于5个100
15、mL的圆底烧瓶中,分别加入60mL70%的乙醇溶液在,80的恒温水浴锅中回流2h,提取液的处理方法同2.4.1,显色方法同2.3.3,在波长为510nm处测定其吸光度,平行实验三组,最后计算出女贞树根总黄酮提取得率。2.4.3回流提取温度的选择称取3.0g女贞树根粉置于5个100mL的圆底烧瓶中圆底烧瓶中,分别加入60mL70%的乙醇溶液在不同温度下恒温提取2h,提取液的处理方法同2.4.1,显色方法同2.3.3,在波长为510nm处测定其吸光度,平行实验三组,最后计算出女贞树根总黄酮提取得率。2.4.4回流提取时间的选择称取3.0g女贞树皮粉置于5个100mL的圆底烧瓶中圆底烧瓶中圆底烧瓶中
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