细胞生物学教程细胞核.pptx

1781年 Trontana发现于鱼类细胞；1831年，Brown发现于植物。大小：植物14m，动物10m。常以核质比来估算核的大小。正常细胞NP0.5，分裂期细胞NP0.5，衰老细胞NP105）。3种构像：B-DNA、Z-DNA、A-DNA。3种基本元素：自主复制序列(ARS)，是DNA复制的起点。着丝粒序列(CEN)，含卫星DNA。端粒序列(TEL)。酵母人工染色体(YAC)：含上述3种成分，用于转基因。Three DNA conformationsThree key regions of a chromosome带正电荷，含Arg，Lys，属碱性蛋白，共5种，分为：核心组蛋白（core histone）：H2A、H2B、H3、H4；连接组蛋白（linker histone）：H1。结构：高度保守，尤其是H4。核心组蛋白由球形部和尾部构成，球形部借Arg与磷酸二脂骨架间的静电作用使DNA分子缠绕在组蛋白核心上，形成核小体，尾部含有大量Arg和Lys，为组蛋白转译后进行修饰的部位。H1多样性，具有属(genus)和组织特异性。（二）组蛋白序列特异性DNA结合蛋白。特性：1.含有较多天冬氨酸、谷氨酸，带负电荷，属酸性蛋白质。2.整个细胞周期都进行合成，组蛋白只在S期合成。3.能识别特异的DNA序列，识别与结合籍氢键和离子键。功能：帮助DNA折叠；协助DNA复制；调节基因表达。（三）非组蛋白二、染色质的结构人体的一个细胞核中有23对染色体，每条染色体的DNA双螺旋若伸展开，平均长为5cm，核内全部DNA连结起来约1.72.0m。nucleosomes(10 nm)condensed form(30 nm)二、从DNA到染色体核小体（nucleosome）：一种串珠状结构，由核心颗粒和连结线DNA两部分组成，通过酶消化实验建立。每个核小体单位包括约200bp的DNA、一个组蛋白核心和一个H1；由H2A、H2B、H3、H4各两分子形成八聚体，构成核心颗粒；DNA分子以左手螺旋缠绕在核心颗粒表面，每圈80bp，共1.75圈，约146bp，两端被H1锁合；相邻核心颗粒之间为一段60bp的连接线DNA。通过核小体，DNA长度压缩7倍，形成11nm的纤维。但是在电镜下观察用温和方法分离的染色质是直径30nm的纤维，这种纤维的形成有两种解释：由核小体螺旋化形成，每6个核小体绕一圈，长度压缩6倍；由核小体纤维Z字形折叠而成，长度压缩40倍。对于更高级染色体包装方式，至今尚不明确。目前多认为30nm的纤维折叠为一系列的环（loop）结合在核骨架上（或称染色体骨架），结合点是富含AT的区域。solenoidChromatin PackingChromatin Packing三、异染色质和常染色质间期核中染色质可分为异染色质（heterochromatin）和常染色质（enchromatin）。异染色质的特点：在间期核中处于凝缩状态，无转录活性、是遗传惰性区。在细胞周期中表现为晚复制、早凝缩（异固缩现象）。分为两类：结构（恒定）异染色质（constitutive heterochromatin）、兼性（功能）异染色质（facultative heterochromatin）巴氏小体（barr body）。雌性哺乳动物细胞中一条异固缩化的X染色体。人的胚胎发育到16天以后，出现巴氏小体。barr body四、染色体一、染色体相关的术语随体次缢痕主缢痕端粒长臂短臂核仁组织区（nucleolar orgnizing regions NORs）构成核仁，位于染色体的次缢痕区，但并非所有的次缢痕都是NORs。How a nucleolus is organized端粒（telomere）：由高度重复的短序列组成，高度保守。作用：1.维持染色体的稳定性。2.起细胞分裂计时器的作用。端粒核苷酸复制和基因DNA不同，每复制一次减少50100bp，其复制要靠具有反转录酶性质的端粒酶来完成，正常体细胞缺乏此酶，故随细胞分裂而变短，细胞随之衰老。性细胞染色体为单倍体（haploid），用n表示;体细胞为2倍体（diploid）以2n表示，还有一些物种的染色体成倍增加成为4n、6n、8n等，称为多倍体。染色体的数目因物种而异，如人类2n=46，黑猩猩2n=48，果蝇2n=8，家蚕2n=56，小麦2n=42，水稻2n=24，洋葱2n=16.（二）染色体的数目着丝粒（centromere）和着丝点（kinetochore）是两个不同的概念，前者指中期染色单体相互联系在一起的特殊部位，后者指主缢痕处两个染色单体外侧与纺锤体微管连接的部位。着丝粒包含3个结构域1、着丝点结构域（kinetochore domain）位于着丝粒的表面，包括三层板状结构和围绕外层的纤维冠(fibrous corona)。（三）着丝粒的结构OPinterzone IPSatellite DNA(FISH image)2、中央结构域位于着丝粒结构域的下方。其中含有高度重复的卫星DNA。3、配对结构域位于着丝粒结构的内层，中期两条染色单体在此处相互连结。对于着丝粒蛋白研究主要是使用ACA来研究的。用ACAs发现鉴定出来的CENP主要有6种，即：CENP-A至F。Centromeric proteins Proteins associated with the centromere have been identified using antibodies from scleroderma patients CENP proteins CENP-Acentromere-specific histone CENP-Bbinds central domain satellite DNA CENP-Cbinds kinetochore CENP-Dbinds kinetochore CENP-Ekinesin-like motor,involved in chromatid segregationCENP-F binds kinetochoreINCENP proteins INCENP-Asister chromatid associationINCENP-Bsister chromatid association1.核型：即细胞分裂中期染色体特征的总和。包括染色体的数目、大小和形态特征等方面。2.带型：染色体经物理、化学因素处理后，再进行分化染色，使其呈现特定的深浅不同带纹（band）的方法。分带技术可分为两类：一类是产生的染色带分布在整过染色体的长度上如：Q、G和R带，另一类是局部性的显带，如C、Cd、T和N带。（四）核型与带型1.多线染色体：由Balbiani(1881)发现于摇蚊幼虫唾腺细胞，特点：体积巨大，是由于核内有丝分裂的结果；多线性；体细胞联会；横带纹。膨突和环。在幼虫发育的某个阶段，多线染色体的某些带区疏松膨大，形成膨突（puff），或巴氏环（Balbiani ring）。用H3-UdR处理细胞，发现膨突被标记，说明膨突是基因活跃转录的区域。（五）几类的特殊的染色体Polytene chromosomesLampbrush chromosome from Pleurodeles oocyte Polytene chromosome2、灯刷染色体最早发现于鱼类、两栖类和爬行类卵母细胞减数分裂的双线期，双线期是卵黄合成的旺盛期。由于染色体主轴两侧有侧环，状如灯刷，故名灯刷染色体。侧环是RNA活跃转录的区域。3、B染色体1928年伦道夫（Randolph）把生物的正常染色体叫做A染色体，而把存在于许多动、植物中，形态和行为不同为A染色体的超数染色体呈B染色体。第三节 核仁核仁（nucleolus）见于间期的细胞核内，呈圆球形，一般12个，有时多达35个。主要功能是转录rRNA和组装核糖体单位。一般蛋白质合成旺盛和分裂增殖较快的细胞有较大和数目较多的核仁，反之核仁很小或缺如。核仁在分裂前期消失，分裂末期又重新出现。一、核仁形态纤维中心(fibrillar centers，FC)：是被致密纤维包围的一个或几个低电子密度的圆形结构，主要成分为RNA聚合酶和rDNA，这些rDNA是裸露的分子。致密纤维组分(dense fibrillar component，DFC)：呈环形或半月形包围FC，由致密的纤维构成，是新合成的RNP，转录主要发生在FC与DFC的交界处。颗粒组分(granular component，GC)：由直径15-20 nm的颗粒构成，是不同加工阶段的RNP。Nucleolus（一）核糖体的结构含40%的蛋白质、60%的RNA，由两个亚单体构成。分为70S和80S两种类型。由大小两个亚基构成，只在以mRNA为模板合成蛋白质时才结合在一起，肽链合成终止后，大小亚单位又解离。核糖体并不是单独工作的，而是由多个甚至几十个串连在一条mRNA分子上，称多聚核糖体（polyribosome）。二、核糖体二、核糖体ribosome核糖体的组成核糖体的组成Protein Synthesis（二）核糖体组装rRNA基因是重复的多拷贝基因。人的一个细胞中约有200个拷贝，rDNA没有组蛋白核心，是裸露的DNA节段，相邻基因之间为非转录的间隔DNA。转录时，RNA聚合酶沿DNA分子排列，此酶由基因头端向末端移动，转录好的rRNA分子从聚合酶处伸出，愈近末端愈长，从左右两侧均可伸出，呈羽毛状。rRNA首先出现在纤维部，而后转向颗粒部。纤维部的纤维状物质是新合成的45SrRNA，它与蛋白质形成RNP复合体。45SrRNA甲基化以后经RNA酶裂解形成18s、28s、5.8srRNA。成熟的rRNA仅为45srRNA的一半，丢失的大部分是非甲基化和GC含量较高的区域。5SrRNA通常定位在常染色体，合成后被转运至核仁区参与大亚基的装配。第四节 核骨架nucleoskeleton核基质（nuclear matrix）或称核骨架，为真核细胞核内的网络结构，是指除核被膜、染色质、核纤层及核仁以外的核内网架体系。非组蛋白性纤维蛋白，10多种次要蛋白质，包括肌动蛋白和波形蛋白，后者构成核骨架的外罩。核骨架碎片中还存在三种支架蛋白（scaffold proteins，SC、SC、SC)，SC则是DNA拓朴异构酶。少量RNA（占0.5%）和DNA(占0.8%，即：MAR)。少量磷脂（1.6%）和糖类（0.9%）。（一）核基质的组成1.为DNA的复制提供支架结合有DNA复制所需要的酶。2.是基因转录加工的场所有RNA聚合酶的结合位点，RNA的合成在核骨架上进行。3.与染色体构建有关一般认为核骨架与染色体骨架为同一类物质，30nm的染色质纤维就是结合在核骨架上，形成放射环状的结构，在分裂期进一步包装成光学显微镜下可见的染色体。（二）核骨架的功能Chromosome Structure