管灸治疗面神经炎的机制研究.pptx

管灸治疗面神经炎的机制研究怎样进行机制研究？管灸作为灸法治疗的一种，主要用于治疗面神经炎、神经性耳聋等疾病。采用人类疾病动物模型进行治疗机制研究是目前国内外最常用的方法。因此我们通过建立家兔面神经损伤模型，采用管灸和电针进行治疗，对其机理进行研究，同时和电针进行对比。所运用的技术病理形态学技术 形态计量学 原位杂交RT-PCR病理学技术分子生物学技术检测内容 测量髓鞘厚度、神经束神经纤维总数、神经纤维直径、轴突面积和神经束面积，颊肌组织。面神经核、面神经、表情肌中神经生长因子（NGF）、神经营养因子-3（NT-3）表达水平。拟解决的问题对损伤面神经是否具有促进修复作用？修复的机制是什么？对临床运用管灸有什么指导作用？操作流程动物分组模型组制作面神经损伤模型，但不做任何治疗 电针组制作面神经损伤模型，给予电针治疗 假手术组仅手术暴露面神经，但不损伤面神经管灸组制作面神经损伤模型，给予管灸治疗模型制作方法 家兔麻醉后取耳屏前至下颌角下缘“S”形切口，钝性分离暴露面神经颊支，用同一特定钳于瞳孔下正对神经干处一扣压榨30秒钟、松开30秒钟、再压榨30秒钟后（Sunderland III度损伤的力度），用缝线标记损伤段，缝合皮下及皮肤层。假手术组动物暴露双侧面神经颊支，钝性分离面神经后，不予压榨即缝合皮下及皮肤层。术后常规抗感染治疗5天后开始治疗，每天1次，6天为一疗程，疗程间隔1天。假手术组：常规饲养，仅做术后常规抗感染治疗。模型组：常规饲养，仅做术后常规抗感染治疗。电针组：常规饲养，治疗时用兔台固定，选用双侧翳风，直刺1.0cm；颊车，直刺0.5cm；下关，直刺0.5cm；合谷，约当第2掌骨中点桡侧，直刺1.0cm。其中翳风与颊车采用强度为20100Hz(波型间动频为30次/min)；电压24V，强度由小逐渐增大，电针时间30min；治疗时间每次30分钟。管灸组：照常饲养，治疗时用兔箱固定，取2g艾绒置入特制的管灸器中，点燃后将软管插入家兔双侧外耳道约2cm，施以熏灸，每次约30分钟。各组分别于第一、二、四疗程后随机选择7只动物处死，按相应的要求取材进行相关指标检测。实验结束时切取一侧面神经核、标记段的面神及颊肌组织冻于液氮中保存以备RTPCR检测，切取动物另一侧面神经核、部分标记段面神经及颊肌组织，经4%多聚甲醛/0.1molPBS（Ph7.07.6），含有1/1000DEPC中固定4hr，全自动组织脱水机处理，石蜡组织包埋机包埋，石蜡组织切片机连续作4m厚切片。将切片裱贴于原位杂交专用玻片上。其余面神经分别固定于4%甲醛-钙液及10%甲醛中。损伤近、远点作横断石蜡包埋，损伤处作纵断石蜡包埋，分别作HE染色、水溶性猩红-亮绿双重染色。观察神经纤维结缔组织、雪旺细胞、髓鞘、轴突的病理改变。采用Image-Pro Plus 5.0图像分析系统测量髓鞘厚度、神经束神经纤维总数、神经纤维直径、轴突面积和神经束面积。颊肌组织亦作HE染色，光镜观察肌肉组织病理改变情况。模型制作流程面神经钳子丝线病理检测方法病理切片HE染色猩红-亮绿染色神经纤维数、纤维直径髓鞘厚度、轴突面积神经束面积 髓鞘厚度、轴突面积比较髓鞘厚度、轴突面积比较组组 别别 髓鞘厚度髓鞘厚度(m)m)轴突面积轴突面积(mm2 2)第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗程第四疗程 第一疗程第一疗程 第二疗程第四疗程第二疗程第四疗程假手术组假手术组 1.520.53 1.520.53 1.540.62 1.540.621.580.581.580.58 8.251.51 8.251.51 8.971.42 8.971.42 8.351.468.351.46模型组模型组 0.720.15 0.760.24 0.720.15 0.760.24 0.860.16 5.350.92 5.861.02 7.521.38 0.860.16 5.350.92 5.861.02 7.521.38 管灸组管灸组 0.820.18 0.820.18 1.220.31 1.220.31 1.380.321.380.32 6.171.02 7.841.336.171.02 7.841.33 13.932.21 13.932.21电针组电针组 0.790.22 1.180.26 0.790.22 1.180.26 1.290.271.290.27 5.930.98 7.361.24 5.930.98 7.361.24 12.691.83 12.691.83注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01 病理检测结果病理检测结果神经束面积比较组组 别别 第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗程第四疗程 假手术组假手术组 435721439435721439 429651241 429651241 431981395 431981395模型组模型组 298561153 368581324 453721691 298561153 368581324 453721691 管灸组管灸组 320841584320841584 408891729 408891729 594963574 594963574 电针组电针组 309281365 396621903309281365 396621903 537513318 537513318注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01 病理检测结果病理检测结果神经纤维数、纤维直径比较神经纤维数、纤维直径比较组组 别别 神经纤维数神经纤维数(条条)纤维直径纤维直径(m)m)第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗程第四疗程第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗程第四疗程假手术组假手术组 38565243856524 3725473 3819569 3.520.573725473 3819569 3.520.57 3.290.85 3.290.853.670.713.670.71模型组模型组 2931489 3326591 2931489 3326591 4032653 2.160.33 2.520.45 3.010.46 4032653 2.160.33 2.520.45 3.010.46 管灸组管灸组 3418567 3418567 4251614 4251614 51297065129706 2.650.40 2.980.372.650.40 2.980.37 3.950.62 3.950.62电针组电针组 3328493 4185587 3328493 4185587 48566344856634 2.530.28 2.870.34 2.530.28 2.870.34 3.860.56 3.860.56注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01 病理检测结果病理检测结果结论 与假手术组相比，模型组神经纤维数、纤维直径、髓鞘厚度、轴突面积、神经束面积随着疗程延长均有增高趋势，但仍小于假手术组，有统计学差异（P0.05或0.01）；与模型组相比，管灸组和电针组第2、3疗程上述指标均增高，有统计学差异（P0.05或0.01）。管灸组与电针组上述指标各疗程无显著性差异。结果提示管灸和电针均可以促进面神经再生，且管灸和电针疗效相当。病理观察和分析表明，管灸和电针对损伤神经的修复再生具有促进作用，管灸疗效和电针相当。表情肌面神经核、面神经多点标记DIG（地高辛）探针原位杂交过氧化物酶显色法RT-PCR方法（逆转录PCR法）NGF NT-3检测NGF原位杂交检测结果管灸对面神经损伤模型家兔面神经核中管灸对面神经损伤模型家兔面神经核中NGFmRNANGFmRNA积分光密度的影响积分光密度的影响 组组 别别 动动 物物 数数 积分光密度（积分光密度（10106 6）1 1疗程疗程2 2疗程疗程4 4疗程疗程 假手术组假手术组 7 9.492.51 10.003.14 7 9.492.51 10.003.14 10.862.9210.862.92 模型组模型组 7 11.852.29 14.193.63 7 11.852.29 14.193.63 15.613.1215.613.12 管灸组管灸组 7 18.363.14 7 18.363.14 35.255.95 35.255.95 36.725.0936.725.09 电针组电针组 7 17.184.21 7 17.184.21 26.276.70 26.276.70 28.197.0128.197.01注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01 管灸对面神经损伤模型家兔面神经中管灸对面神经损伤模型家兔面神经中NGFmRNANGFmRNA积分光密度的影响积分光密度的影响 组组 别别 动动 物物 数数 积分光密度（积分光密度（10106 6）1 1疗程疗程2 2疗程疗程4 4疗程疗程 假手术组假手术组 7 2.150.33 2.060.41 7 2.150.33 2.060.412.240.382.240.38 模型组模型组 7 2.070.58 2.510.44 7 2.070.58 2.510.44 2.760.12 2.760.12 管灸组管灸组 7 2.530.28 3.970.86 7 2.530.28 3.970.86 4.270.634.270.63 电针组电针组 7 2.820.62 7 2.820.62 3.230.41 3.230.41 3.610.923.610.92注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01NGF原位杂交检测结果NGF原位杂交检测结果管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中NGFmRNANGFmRNA积分光密度的影响积分光密度的影响 组组 别别 动动 物物 数数 积分光密度（积分光密度（10106 6）1 1疗程疗程 2 2疗程疗程 4 4疗程疗程 假手术组假手术组 7 2.720.24 7 2.720.24 2.810.80 2.810.80 2.680.432.680.43 模型组模型组 7 3.650.68 7 3.650.68 4.070.95 4.070.95 4.850.76 4.850.76 管灸组管灸组 7 4.860.51 7 4.860.51 7.620.12 7.620.128.010.598.010.59 电针组电针组 7 3.950.27 7 3.950.27 5.810.14 5.810.146.160.356.160.35注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01NGF原位杂交检测结果NGF RT-PCR检测结果 管灸对面神经损伤模型家兔面神经核中管灸对面神经损伤模型家兔面神经核中NGFmRNANGFmRNA的影响的影响 组组 别别 动动 物物 数数 第一疗程第二疗程第一疗程第二疗程 第四疗程第四疗程 假手术组假手术组 7 0.3470.029 7 0.3470.029 0.3250.028 0.3250.028 0.3390.037 0.3390.037 模型组模型组 7 0.3690.031 7 0.3690.031 0.4030.0770.4030.077 0.4730.066 0.4730.066 管灸组管灸组 7 0.4650.044 7 0.4650.044 0.6350.071 0.6350.0710.6580.0570.6580.057 电针组电针组 7 0.4530.037 7 0.4530.037 0.5240.063 0.5240.063 0.6460.0590.6460.059注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01 管灸对面神经损伤模型家兔面神经中管灸对面神经损伤模型家兔面神经中NGFmRNANGFmRNA的影响的影响 组组 别别 动动 物物 数数 第一疗程第二疗程第一疗程第二疗程 第四疗程第四疗程 假手术组假手术组 7 0.2200.024 0.2690.029 7 0.2200.024 0.2690.029 0.2540.031 0.2540.031 模型组模型组 7 0.2410.027 7 0.2410.027 0.3010.026 0.3010.026 0.3210.027 0.3210.027 管灸组管灸组 7 0.4030.041 7 0.4030.041 0.5940.053 0.5940.0530.6120.0580.6120.058 电针组电针组 7 0.4160.054 7 0.4160.054 0.5720.061 0.5720.061 0.5890.0420.5890.042注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01NGF RT-PCR检测结果 管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中NGFmRNANGFmRNA的影响的影响组组 别别 动动 物物 数数 第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第三疗程第三疗程 假手术组假手术组 7 0.2520.031 0.2450.029 7 0.2520.031 0.2450.029 0.2500.032 0.2500.032 模型组模型组 7 0.2900.038 7 0.2900.038 0.3510.0320.3510.032 0.3540.039 0.3540.039 管灸组管灸组 7 0.3380.047 0.5020.054 7 0.3380.047 0.5020.0540.5270.0500.5270.050 电针组电针组 7 0.3300.052 0.4900.058 7 0.3300.052 0.4900.0580.5140.0490.5140.049注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01NGF RT-PCR检测结果管灸和电针对NGF表达的影响 结论:1.管灸和电针均可以提高面神经核、面神经及表 情肌中NGF表达。2.部分指标显示管灸较电针为优。NT-3原位杂交检测结果 管灸对面神经损伤模型家兔面神经核中管灸对面神经损伤模型家兔面神经核中NT-3mRNANT-3mRNA积分光密度的影响积分光密度的影响 组组 别别 动动 物物 数数 积分光密度（积分光密度（10106 6）1 1疗程疗程2 2疗程疗程4 4疗程疗程 假手术组假手术组 7 3.980.76 3.800.89 7 3.980.76 3.800.893.730.683.730.68 模型组模型组 7 4.991.23 5.491.76 7 4.991.23 5.491.76 6.291.86 6.291.86 管灸组管灸组 7 7.032.02 7 7.032.02 10.981.95 10.981.95 10.832.2410.832.24 电针组电针组 7 6.651.58 7 6.651.58 8.091.69 8.091.698.241.818.241.81注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01NT-3原位杂交检测结果 管灸对面神经损伤模型家兔面神经中管灸对面神经损伤模型家兔面神经中NT-3mRNANT-3mRNA积分光密度的影响积分光密度的影响 组组 别别 动动 物物 数数 积分光密度（积分光密度（10106 6）1 1疗程疗程 2 2疗程疗程4 4疗程疗程 假手术组假手术组 7 3.280.73 3.340.50 7 3.280.73 3.340.503.430.493.430.49 模型组模型组 7 3.460.67 3.720.45 7 3.460.67 3.720.45 3.910.76 3.910.76 管灸组管灸组 7 3.940.62 7 3.940.62 4.540.81 4.540.814.991.024.991.02 电针组电针组 7 3.880.51 4.880.63 7 3.880.51 4.880.635.150.835.150.83注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01NT-3原位杂交检测结果管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中NT-3mRNANT-3mRNA积分光密度的影响积分光密度的影响 组组 别别 动动 物物 数数 积分光密度（积分光密度（10106 6）1 1疗程疗程2 2疗程疗程4 4疗程疗程 假手术组假手术组 7 3.130.49 3.070.54 7 3.130.49 3.070.543.230.643.230.64 模型组模型组 7 3.380.51 4.000.45 7 3.380.51 4.000.45 4.250.66 4.250.66 管灸组管灸组 7 4.250.76 7 4.250.76 5.440.97 5.440.975.651.135.651.13 电针组电针组 7 4.050.82 4.870.88 7 4.050.82 4.870.885.041.085.041.08注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01NT-3 RT-PCR检测结果 管灸对面神经损伤模型家兔面神经核中管灸对面神经损伤模型家兔面神经核中NTNT3mRNA3mRNA的影响的影响 组组 别别 动动 物物 数数 第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第三疗程第三疗程 假手术组假手术组 7 0.4260.038 0.4380.043 7 0.4260.038 0.4380.043 0.4410.049 0.4410.049 模型组模型组 7 0.4620.031 7 0.4620.031 0.5260.054 0.5260.054 0.5320.054 0.5320.054 管灸组管灸组 7 0.5240.049 7 0.5240.049 0.7270.0770.7270.077 0.7320.0680.7320.068 电针组电针组 7 0.5060.046 0.7100.082 7 0.5060.046 0.7100.082 0.7090.0720.7090.072注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01NT-3 RT-PCR检测结果 管灸对面神经损伤模型家兔面神经中管灸对面神经损伤模型家兔面神经中NTNT3mRNA3mRNA的影响的影响 组组 别别 动动 物物 数数 第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗程第四疗程 假手术组假手术组 7 0.4060.047 0.4150.044 7 0.4060.047 0.4150.044 0.4030.046 0.4030.046 模型组模型组 7 0.4450.052 0.4830.061 7 0.4450.052 0.4830.061 0.4940.053 0.4940.053 管灸组管灸组 7 0.5210.069 7 0.5210.069 0.6940.057 0.6940.057 0.7130.0590.7130.059 电针组电针组 7 0.5170.065 7 0.5170.065 0.7020.065 0.7020.065 0.7100.0680.7100.068注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中NTNT3mRNA3mRNA的影响的影响 组组 别别 动动 物物 数数 第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗程第四疗程 假手术组假手术组 7 0.3590.047 7 0.3590.047 0.3760.046 0.3760.046 0.3730.035 0.3730.035 模型组模型组 7 0.4100.042 7 0.4100.042 0.5040.0570.5040.057 0.5420.067 0.5420.067 管灸组管灸组 7 0.4220.054 7 0.4220.054 0.6380.068 0.6380.068 0.6830.0710.6830.071 电针组电针组 7 0.4360.059 0.6120.077 7 0.4360.059 0.6120.0770.6310.0680.6310.068注：与模型组比较，注：与模型组比较，：p 0.05p 0.05；p0.01p0.01；与电针组比较；与电针组比较p 0.05p 0.05；p0.01p0.01NT-3 RT-PCR检测结果 结论:1.管灸和电针均可以提高面神经核、面神经及表 情肌中NT-3表达。2.部分指标显示管灸较电针为优。管灸和电针对NT-3表达的影响结论1.病理观察及分析表明，管灸治疗对损伤面神经的修复再生具有促进作用。2.原位杂交及RTPCR实验结果均表明管灸治疗可以增强面神经核、面神经、面部表情肌NGFmRNA、NT-3mRNA的表达。3.管灸治疗增强面神经核、面神经、面部表情肌NGFmRNA、NT-3mRNA的表达以治疗两疗程时达高峰，继续治疗虽有增高，但增高幅度不大。4.管灸治疗增强面神经核、面神经、面部表情肌NGFmRNA、NT-3mRNA的表达与电针总体疗效相当，部分指标优于电针。结果 以上结论提示，管灸治疗对损伤面神经纤维的修复再生具有促进以上结论提示，管灸治疗对损伤面神经纤维的修复再生具有促进作用，能增加面神经核、面神经、表情肌中作用，能增加面神经核、面神经、表情肌中NGFNGF与与NT-3mRNANT-3mRNA的表达，的表达，即在中枢、外周及效应器等不同层面均能提高即在中枢、外周及效应器等不同层面均能提高NGFNGF与与NT-3mRNANT-3mRNA的表达，的表达，这可能是其在治疗面神经炎过程中促进面神经再生，恢复神经机能的这可能是其在治疗面神经炎过程中促进面神经再生，恢复神经机能的分子作用机制之一，从神经营养因子的角度部分阐明了临床上管灸治分子作用机制之一，从神经营养因子的角度部分阐明了临床上管灸治疗面神经损伤的机理。疗面神经损伤的机理。管灸的作用机制之一管灸NGFNT-3中枢面神经核效应器表情肌外周面神经问题与展望 神经修复机制非常复杂，管神经修复机制非常复杂，管灸是通过何种途径影响这些神经营养灸是通过何种途径影响这些神经营养因子表达的？管灸影响神经修复的信号转导过程和特点是什么？等因子表达的？管灸影响神经修复的信号转导过程和特点是什么？等 等这些问题仍有待进一步的研究，从而更深层次的揭示管灸作用机理，等这些问题仍有待进一步的研究，从而更深层次的揭示管灸作用机理，利于管灸疗法的临床推广和临床疗效的提高。利于管灸疗法的临床推广和临床疗效的提高。本次课程结束，谢谢欣赏