核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析.pptx
《核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析.pptx(23页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、提取核酸的目的提取核酸的目的:1.实验研究实验研究2.用于研制核酸类药物及保健品用于研制核酸类药物及保健品?核酸分离与纯化的设计与原则核酸分离与纯化的设计与原则主要核酸类药物及用途主要核酸类药物及用途 名名 称称治治 疗疗 范范 围围核糖核酸(核糖核酸(RNA)口服用于精神迟缓、记忆衰退、动脉硬化性痴呆口服用于精神迟缓、记忆衰退、动脉硬化性痴呆治疗;静脉注射用于刺激造血和促进白细胞生成,治疗;静脉注射用于刺激造血和促进白细胞生成,治疗慢性肝炎、肝硬化初期癌症治疗慢性肝炎、肝硬化初期癌症脱氧核糖核酸(脱氧核糖核酸(DNA)有抗放射作用,能改善机体虚弱疲劳;与细胞毒有抗放射作用,能改善机体虚弱疲劳
2、;与细胞毒药物合用,能提高细胞毒药物对癌细胞的选择性药物合用,能提高细胞毒药物对癌细胞的选择性作用;与红霉素合用,能降低其毒性,提高抗癌作用;与红霉素合用,能降低其毒性,提高抗癌疗效疗效免疫核糖核酸(免疫核糖核酸(iRNA)推动正常推动正常RNA分子在基因水平上通过对癌细胞分子在基因水平上通过对癌细胞DNA分子进行诱导,或通过反转录酶系统促使癌分子进行诱导,或通过反转录酶系统促使癌细胞发生逆分化,如:可用于肝炎治疗的抗乙肝细胞发生逆分化,如:可用于肝炎治疗的抗乙肝iRNA,治疗肺癌的抗肺癌,治疗肺癌的抗肺癌iRNA转移因子(转移因子(TF)相对分子质量较小,含有多核苷酸、多肽化合物,相对分子质
3、量较小,含有多核苷酸、多肽化合物,Mr10000;它只传递细胞免疫信息,无体液免;它只传递细胞免疫信息,无体液免疫作用,不致促进肿瘤生长,治疗恶性肿瘤比较疫作用,不致促进肿瘤生长,治疗恶性肿瘤比较安全;亦可用于治疗肝炎等安全;亦可用于治疗肝炎等主要核酸类药物及用途主要核酸类药物及用途名名称称治治疗疗范范围围聚肌胞苷酸(聚肌胞)聚肌胞苷酸(聚肌胞)干扰素诱导物,具有广普抗病毒作用;用化学合干扰素诱导物,具有广普抗病毒作用;用化学合成、酶促合成方法生产成、酶促合成方法生产腺苷三磷酸(腺苷三磷酸(ATP)用于心力衰竭、心肌炎、心肌梗死、脑动脉和冠用于心力衰竭、心肌炎、心肌梗死、脑动脉和冠状动脉硬化、
4、急性脊髓灰质炎、肌肉萎缩、慢性状动脉硬化、急性脊髓灰质炎、肌肉萎缩、慢性肝炎等肝炎等核酸核酸-氨基酸混合物氨基酸混合物用于气管炎、神经衰弱等用于气管炎、神经衰弱等辅酶辅酶A(CoA)用于动脉硬化,白细胞、血小板减少,肝、肾病用于动脉硬化,白细胞、血小板减少,肝、肾病脱氧核苷酸钠脱氧核苷酸钠用于放疗、化疗引起的急性白细胞减少症用于放疗、化疗引起的急性白细胞减少症腺苷一磷酸(腺苷一磷酸(AMP)有周围血管扩张作用、减压作用;用于静脉曲张有周围血管扩张作用、减压作用;用于静脉曲张性溃疡等性溃疡等鸟苷三磷酸(鸟苷三磷酸(GTP)用于慢性肝炎、进行性肌肉萎缩等症用于慢性肝炎、进行性肌肉萎缩等症辅酶辅酶(
5、NDA)用于白细胞减少及冠状动脉硬化用于白细胞减少及冠状动脉硬化辅酶辅酶(NADP)促进体内物质的生物氧化促进体内物质的生物氧化lDNA:主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少量量DNA,如线粒体,如线粒体DNA(mtDNA),叶绿体),叶绿体DNA(cpDNA),质粒),质粒DNA。lRNA:主要存在于细胞质中,如主要存在于细胞质中,如mRNA,rRNA,tRNA,miRNA等。等。l除上述除上述DNA,RNA外,还有非细胞形式存在的病毒和外,还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体,其或只含噬菌体,其或只含DNA,或只含有,或只含有RNA。细胞内的核酸具有复杂
6、的结构,均与蛋白质结合成细胞内的核酸具有复杂的结构,均与蛋白质结合成核蛋核蛋白白。分子的分子的总长度在不同生物间差异很大总长度在不同生物间差异很大,一般随生物的一般随生物的进化程度而增长。进化程度而增长。DNA与与RNA性质上的差异性质上的差异决定了两者的决定了两者的最适分离与纯最适分离与纯化的条件是不同化的条件是不同的。的。一、一、材料与方法的选择材料与方法的选择 核酸存在于各种生物中。临床常见的样品核酸存在于各种生物中。临床常见的样品有血液、尿液、唾液、头发、组织及培养有血液、尿液、唾液、头发、组织及培养细胞等。细胞等。核酸分离与纯化的方法非常多。如何选择核酸分离与纯化的方法非常多。如何选
7、择合适的分离与纯化方法是一个首要的问题。合适的分离与纯化方法是一个首要的问题。因为因为不同的研究目的不同的研究目的对核酸的完整性、产对核酸的完整性、产量、纯度和浓度量、纯度和浓度有不同的要求。有不同的要求。近年来,近年来,试剂盒试剂盒(Kit)的开发与自动化仪器的开发与自动化仪器的使用大大提高了分离与纯化的效率。的使用大大提高了分离与纯化的效率。根据具体生物材料的性质与起始根据具体生物材料的性质与起始量、待分离核酸的量、待分离核酸的性质与用途而采取不同的方案。性质与用途而采取不同的方案。无论采取何种方法,都应遵循总的原则:无论采取何种方法,都应遵循总的原则:q 保证核酸一级结构的完整性,保证核
8、酸一级结构的完整性,q 尽量排除其它分子的污染,尽量排除其它分子的污染,保证核酸样品的纯度。保证核酸样品的纯度。选择原则选择原则 核酸制备时应注意的事项核酸制备时应注意的事项:尽量简化操作步骤,缩短提取过程。尽量简化操作步骤,缩短提取过程。减少化学因素对核酸的降解减少化学因素对核酸的降解(pH4-10)减少物理因素对核酸的降解减少物理因素对核酸的降解,如机械剪如机械剪切力和高温切力和高温 防止核酸的生物降解。防止核酸的生物降解。核酸制备的步骤:破碎细胞破碎细胞破碎细胞破碎细胞提取提取提取提取纯化纯化纯化纯化二二 技术路线的设计技术路线的设计 破碎细胞破碎细胞微生物:溶菌酶、微生物:溶菌酶、SD
9、S裂解。裂解。高等植物:捣碎器破碎、液氮研磨。高等植物:捣碎器破碎、液氮研磨。动物:液氮处理后用匀浆器破碎。动物:液氮处理后用匀浆器破碎。细胞器细胞器DNA,首先纯化细胞器。,首先纯化细胞器。以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂 (一一)核酸的释放核酸的释放 正常情况下,无论是正常情况下,无论是DNA还是还是RNA均位均位于细胞内,因此核酸分离与纯化的于细胞内,因此核酸分离与纯化的第一步就第一步就是破碎细胞是破碎细胞、释放核酸释放核酸。DNA酶抑制剂:酶抑制剂:1.金属离子螯合剂:金属离子螯合剂:DNA酶需要金属二价离子酶需要金属二价离子Mg2+、Ca2+的的激
10、活,因此使用金属二价离子螯合剂,可抑制激活,因此使用金属二价离子螯合剂,可抑制DNA酶活性。酶活性。如:如:EDTA2.阴离子表面活性剂:阴离子表面活性剂:如如SDS。该试剂除对核酸酶有抑制作。该试剂除对核酸酶有抑制作用外,还能使蛋白质变性,并与变性蛋白结合成带负电荷用外,还能使蛋白质变性,并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物,该复合物在高盐溶液中沉淀。的复合物,该复合物在高盐溶液中沉淀。RNA酶抑制剂:酶抑制剂:1.皂土:皂土:带负电荷,能吸附带负电荷,能吸附RNase,使其失活。,使其失活。2.DEPC(焦碳酸二乙酯焦碳酸二乙酯):通过和通过和RNA酶的活性基团组氨酸酶的活性基团组氨酸的咪唑
11、环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。(二二)核酸的分离与纯化核酸的分离与纯化 利用核酸与其它物质在一个或多个性质利用核酸与其它物质在一个或多个性质上的差异设计有效方案,才能使核酸得以分上的差异设计有效方案,才能使核酸得以分离。核酸与其它物质的差异包括离。核酸与其它物质的差异包括细胞定位与细胞定位与组织分布上的差异、物理化学性质上的不同组织分布上的差异、物理化学性质上的不同以及以及各自独特的生物学特性各自独特的生物学特性。1.DNA分离纯化过程分离纯化过程破碎细胞破碎细胞+DNA抽提液抽提液(EDTA、去污剂去污剂、蛋白酶蛋白酶K)65温温育育20冰
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 核酸 分离 纯化 鉴定 技术 生化 分析
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【a199****6536】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【a199****6536】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。