液相色谱基础知识.pptx
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1、HPLC Business DeptShimadzu Corporation液相色谱基础知识 SHIMADZUHPLC Business DeptShimadzu Corporation液相色谱:以液体作为流动相的色谱分离方法液相色谱:以液体作为流动相的色谱分离方法液相色谱:以液体作为流动相的色谱分离方法液相色谱:以液体作为流动相的色谱分离方法vv适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析分析分析分析vv流动相具有运载样品分子和选择性
2、分离的双重作用流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用 气相色谱:以气体作为流动相的色谱分离方法气相色谱:以气体作为流动相的色谱分离方法气相色谱:以气体作为流动相的色谱分离方法气相色谱:以气体作为流动相的色谱分离方法vv适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析vv流动相只起运载样品分子的能力流动相只起运载样品分子的能力流动相只起运载样品分子的能力流动相只
3、起运载样品分子的能力 液相色谱基础知识HPLC Business DeptShimadzu Corporation一、色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱液相色谱基础知识HPLC Business DeptShimadzu Corporation液相色谱基础知识采用采用采用采用 “HPLCHPLCHPLCHPLC”级溶剂级溶剂级溶剂级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小溶
4、剂粘度要小溶剂粘度要小溶剂粘度要小与检测器相匹配与检测器相匹配与检测器相匹配与检测器相匹配流动相的选择HPLC Business DeptShimadzu Corporation溶溶 剂剂 等等 级级水的等级水的等级水的等级水的等级纯化水纯化水纯化水纯化水蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水去离子水去离子水去离子水去离子水波长波长(nm)纯化水纯化水去离子水去离子水因为不纯物的存在,去离子的吸光率较高因为不纯物的存在,去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物纯化水中去除了无机和有机的污染物吸吸吸吸光光光光率率率率HPLC Business DeptShimadzu Corporation溶溶 剂
5、剂 等等 级级溶剂的等级溶剂的等级溶剂的等级溶剂的等级HPLCHPLCHPLCHPLC级级级级优级纯优级纯优级纯优级纯分析纯分析纯分析纯分析纯都经过蒸馏和都经过蒸馏和0.45u的过滤的过滤(除纤维毛除纤维毛,未溶解的机械颗粒未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过级经过0.2u的过滤的过滤,且除去有紫外吸收的杂质且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱HPLC Business DeptShimadzu Corporation甲醇甲醇 乙睛乙睛 正己烷正
6、己烷分析纯级(实线)和HPLC 级溶剂(虚线)的吸光度比较溶溶 剂剂 等等 级级HPLC Business DeptShimadzu CorporationGeneral Maintenance and Troubleshooting缓冲液的使用缓冲液的使用 使用前必须过滤使用前必须过滤 使用后一定要对柱子进行清洗使用后一定要对柱子进行清洗,以免造成腐蚀、磨损及,以免造成腐蚀、磨损及 阻塞阻塞:首先用纯水冲洗首先用纯水冲洗10-30min(0.5-1ml/min),再用甲),再用甲醇冲洗醇冲洗30min(0.1-0.5ml/min)易受到细菌和霉菌的影响易受到细菌和霉菌的影响 溶溶 剂剂 等等
7、 级级注意冲洗次序,不能直接用注意冲洗次序,不能直接用有机溶剂冲洗有机溶剂冲洗 HPLC Business DeptShimadzu Corporation过滤:过滤:过滤:过滤:0.45um0.45um0.45um0.45um或更小孔径滤膜或更小孔径滤膜或更小孔径滤膜或更小孔径滤膜 目的:除去溶剂中的微小物理颗粒,避免堵塞色谱柱,目的:除去溶剂中的微小物理颗粒,避免堵塞色谱柱,目的:除去溶剂中的微小物理颗粒,避免堵塞色谱柱,目的:除去溶剂中的微小物理颗粒,避免堵塞色谱柱,尤其是在使用无机盐配制的缓冲液的时候必须过滤尤其是在使用无机盐配制的缓冲液的时候必须过滤尤其是在使用无机盐配制的缓冲液的时
8、候必须过滤尤其是在使用无机盐配制的缓冲液的时候必须过滤脱气:除去在流动相中溶解或彼此混合而产生的气泡脱气:除去在流动相中溶解或彼此混合而产生的气泡脱气:除去在流动相中溶解或彼此混合而产生的气泡脱气:除去在流动相中溶解或彼此混合而产生的气泡 气泡对测定的影响:气泡对测定的影响:气泡对测定的影响:气泡对测定的影响:1 1 1 1)泵中气泡使液流波动,改变保留时间和峰面积)泵中气泡使液流波动,改变保留时间和峰面积)泵中气泡使液流波动,改变保留时间和峰面积)泵中气泡使液流波动,改变保留时间和峰面积 2 2 2 2)柱中气泡使流动相绕流,峰变形)柱中气泡使流动相绕流,峰变形)柱中气泡使流动相绕流,峰变形
9、)柱中气泡使流动相绕流,峰变形 3 3 3 3)检测器中的气泡产生基线波动)检测器中的气泡产生基线波动)检测器中的气泡产生基线波动)检测器中的气泡产生基线波动 无在线脱气应注意:无在线脱气应注意:无在线脱气应注意:无在线脱气应注意:1 1 1 1)每天脱气)每天脱气)每天脱气)每天脱气 2 2 2 2)如使用氦脱气,对混合溶剂脱气时间不能过长)如使用氦脱气,对混合溶剂脱气时间不能过长)如使用氦脱气,对混合溶剂脱气时间不能过长)如使用氦脱气,对混合溶剂脱气时间不能过长溶溶 剂剂 前前 处处 理理HPLC Business DeptShimadzu Corporation岛津岛津VPVP系列输液泵
10、系列输液泵目的 单元 流速范围特性和应用 分析 LC-10ADVP0.001-9.999无脉动,适于半微量LC 和 LC-MS LC-10ATVP0.001-9.999非凡的耐用性,适于常量分析*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度液相色谱基础知识HPLC Business DeptShimadzu CorporationLC-10ATvp泵:泵:串联式往复泵串联式往复泵LC-10ADvp泵:泵:并联式微体积往复泵并联式微体积往复泵LC-10ADVP/LC-10ATVP工作原理工作原理HPLC Business DeptShimadzu Corporat
11、ion单向阀结构单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球单向阀原理单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头LC-10ADVP/LC-10ATVP工作原理工作原理HPLC Business DeptShimadzu Corporation液相色谱基础知识梯度洗脱形式:梯度洗脱形式:v线性梯度:在梯度洗脱时,流动相强度的变化和时间成线性比例v指数梯度:在梯度洗脱时,流动相强度随时间的变化呈指数关系v折线梯度:在梯度洗脱时,流动相强度随时间的变化呈跳跃关系梯度洗脱装置:梯度洗脱装置:v高压梯度:用两台高压输液泵将两种溶剂输入v低压梯度:在常压下将两种溶剂(或多元溶剂)混合,然后用高压输液泵将流动
12、相输入到色谱柱中。HPLC Business DeptShimadzu Corporation1.使用适宜的流动相溶解样品 在溶剂选择的时候,应注意以下原则:-减少溶剂峰,尤其是不可使用组分峰靠近溶剂峰 的流动相 -保证样品在流动相中的溶解度,避免样品在系统中尤其在色谱柱中产生沉淀 2.进样前最好使用0.45um 的膜进行过滤 如果样品很脏,要使用0.2um的膜进行过滤样 品 处 理HPLC Business DeptShimadzu Corporation进样器进样器自动进样器(SIL-10A/SIL-10Ai/SIL-10ADvp)手动进样器 原理:(六通阀)注入方式:1 1)全量注入)全
13、量注入 2 2)部分注入)部分注入液相色谱基础知识HPLC Business DeptShimadzu Corporation进样量和检测器响应的关系示意图进样量和检测器响应的关系示意图Volume of Injection Response of DetectorHalf volumeof sample loopThree times volumeof sample loopLoop injectionPartialinjection液相色谱基础知识HPLC Business DeptShimadzu Corporation手动进样器的原理图手动进样器的原理图 装填状态装填状态液相色谱基础知
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