浙江大学生物化学实验甲蛋白质的沉淀和变性反应.pptx
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1、蛋白质的沉淀和变性反应蛋白质的沉淀和变性反应W1.1、原理、原理蛋白质分子在水溶液中,由于其表面形成了水化层蛋白质分子在水溶液中,由于其表面形成了水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒,所以蛋白质溶液和双电层而成为稳定的胶体颗粒,所以蛋白质溶液为一种亲水胶体溶液。为一种亲水胶体溶液。当蛋白质溶液在一定物理化学因素的影响下,蛋白当蛋白质溶液在一定物理化学因素的影响下,蛋白质胶体颗粒的稳定条件被破坏,如失去电荷、脱水,质胶体颗粒的稳定条件被破坏,如失去电荷、脱水,甚至变性,则蛋白质分子将以固态形式从溶液中析甚至变性,则蛋白质分子将以固态形式从溶液中析出,这个过程称为蛋白质的沉淀反应。出,这个过程称为蛋
2、白质的沉淀反应。根据其特点的不同可分为可逆沉淀反应和不可逆沉根据其特点的不同可分为可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应两种类型。淀反应两种类型。蛋白质的沉淀和变性反应蛋白质的沉淀和变性反应1、可逆沉淀反应、可逆沉淀反应蛋白质虽已沉淀析出,但其分子内部结构并未发生蛋白质虽已沉淀析出,但其分子内部结构并未发生显著变化,如果把引起沉淀的因素去除后,沉淀的显著变化,如果把引起沉淀的因素去除后,沉淀的蛋白质能重新溶于原来的溶剂中,并保持其原有的蛋白质能重新溶于原来的溶剂中,并保持其原有的天然结构和性质。天然结构和性质。如蛋白质的盐析作用和等电点沉淀作用如蛋白质的盐析作用和等电点沉淀作用及在低温下,乙醇、丙酮短时
3、间内对蛋白质的沉淀及在低温下,乙醇、丙酮短时间内对蛋白质的沉淀作用。作用。蛋白质的沉淀和变性反应蛋白质的沉淀和变性反应p蛋白质盐析作用的原理蛋白质盐析作用的原理用大量中性盐使蛋白质从溶液中沉淀析出的过程称用大量中性盐使蛋白质从溶液中沉淀析出的过程称为蛋白质的盐析作用。为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体,蛋白质溶液在高浓度中性盐的蛋白质是亲水胶体,蛋白质溶液在高浓度中性盐的影响下,蛋白质分子被中性盐脱去水化层,同时所影响下,蛋白质分子被中性盐脱去水化层,同时所带的电荷被中和,结果蛋白质的胶体稳定性遭到破带的电荷被中和,结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。坏而沉淀析出。析出的蛋白质仍保持其
4、天然性质,当降低盐的浓度析出的蛋白质仍保持其天然性质,当降低盐的浓度时,还能溶解,即蛋白质的盐析作用是可逆过程。时,还能溶解,即蛋白质的盐析作用是可逆过程。蛋白质的沉淀和变性反应蛋白质的沉淀和变性反应沉淀不同的蛋白质所需中性盐的浓度不同;沉淀不同的蛋白质所需中性盐的浓度不同;沉淀相同的蛋白质,因所用中性盐的不同所需的盐沉淀相同的蛋白质,因所用中性盐的不同所需的盐浓度也不同。浓度也不同。所以在不同条件下,用不同浓度的盐类可将各种蛋所以在不同条件下,用不同浓度的盐类可将各种蛋白质从混合溶液中分别沉淀析出,该法称为蛋白质白质从混合溶液中分别沉淀析出,该法称为蛋白质的分级盐析,在提纯蛋白质时常被应用。
5、的分级盐析,在提纯蛋白质时常被应用。2、不可逆沉淀反应、不可逆沉淀反应蛋白质的沉淀和变性反应蛋白质的沉淀和变性反应蛋白质分子发生沉淀时,其分子内部空间结构遭到蛋白质分子发生沉淀时,其分子内部空间结构遭到破坏,蛋白质分子由规则性的结构变为无秩序的伸破坏,蛋白质分子由规则性的结构变为无秩序的伸展肽链,使原来的天然性质丧失,即蛋白质已发生展肽链,使原来的天然性质丧失,即蛋白质已发生了变性,这种由于蛋白质变性而产生的沉淀不能再了变性,这种由于蛋白质变性而产生的沉淀不能再溶解于原来的溶剂中。溶解于原来的溶剂中。如重金属盐、植物碱试剂、强酸、强碱、有机溶剂如重金属盐、植物碱试剂、强酸、强碱、有机溶剂等化学
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