液相色谱2分配离子交换凝胶.pptx
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1、 第二节第二节 分配色谱分配色谱一、基本原理一、基本原理1、吸附色、吸附色谱的局限性的局限性(1)吸附色谱不适合于分离强极性的亲水性物质(成分);(2)吸附剂的含水量对吸附剂的吸附能力影响较大,常使结果重现性较差;(3)易出现拖尾峰。2 2、分配色、分配色、分配色、分配色谱谱原理原理原理原理(1)固定相为液体将某种溶剂涂布在吸附剂颗粒表面或纸纤维上,形成一层液膜,称为固定相。吸附剂颗粒表面或纸纤维叫载体或担体。根据组分在两相中的溶解度不同而分离。(2)“相似相溶”原则极性物质在极性溶剂中溶解度大,K大;非极性物质在非极性溶剂中溶解度大,K大。(3)分配定律与分配等温线(4)分配色谱的特点:a、
2、重现性 b、峰对称c、无强烈滞留现象.几乎适用于各种几乎适用于各种类型的化合物,特型的化合物,特别适宜于适宜于亲水性物水性物质,如极性,如极性较大的生物碱、苷大的生物碱、苷类、有机酸、糖、有机酸、糖类及氨基酸的衍生物等。及氨基酸的衍生物等。二、载体只起只起负载固定相的作用。固定相的作用。要求:惰性、无吸附能力、要求:惰性、无吸附能力、纯净、颗粒粒均匀。均匀。种种类 1)硅胶:重)硅胶:重现性差性差 2)硅藻土:)硅藻土:应用最多用最多 3)纤维素:素:纸色色谱三、固定相和流动相的选择正相分配色正相分配色谱:固定相的极性固定相的极性大于大于流流动相的极相的极性;性;固定相:水、缓冲溶液、稀硫酸、
3、甲醇、丙二醇等;按一定的比例与载体混匀后填装于色谱柱。流动相:石油醚等洗脱顺序:极性大的组分保留作用强;极性小的组分保留作用弱 反相分配色反相分配色谱:固定相的极性:固定相的极性小于小于流流动相相的极性。的极性。固定液:硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂。流动相:水、各种水溶液(酸、碱、盐及缓冲液)、与水混合的有机溶剂。洗脱顺序:极性小的组分保留作用强;极性大的组分保留作用弱四、分配色谱操作注意事项四、分配色谱操作注意事项1 1、两相溶、两相溶、两相溶、两相溶剂剂的的的的处处理理理理2 2、上、上、上、上样样量与量与量与量与样样品前品前品前品前处处理。理。理。理。3 3、柱色、柱色、柱色、柱色
4、谱谱4 4、纸纸色色色色谱谱第三节第三节 离子交换色谱法离子交换色谱法(ion exchange chromatography)一、基本原理一、基本原理1、离子交换剂与离子交换过程(1 1)离子交)离子交换剂换剂为一种固体状可在水溶液中浸润和溶胀的多孔颗粒,其表面有许多可电离的基团,在水中电离时,有一种离子可在水中自由移动,而另一种则在固定相上不能自由移动。可自由移动的离子可以被其它同类离子置换,即离子交换。(2 2)离子交)离子交换过换过程程水溶液中(流动相中)的各种离子,可与离子交换树脂上固定的离子基团结合,使原来与其结合的离子被置换,进入流动相而发生置换。带负电的交换基团(固定的离子基团
5、,如磺酸基、羧酸基):用于阳离子分离;带正电的交换基团(固定的离子基团,如季胺盐):用于阴离子分离。2、分离机理(1)不同的离子与交换树脂的结合力不同,从而固定相对它的保留能力不同,从而造成差速迁移。(2)离子交换平衡:K K K K 大,大,大,大,Na+Na+Na+Na+易与固定相结合,移动慢;易与固定相结合,移动慢;易与固定相结合,移动慢;易与固定相结合,移动慢;反之,移动快。反之,移动快。反之,移动快。反之,移动快。t tR R=t=tmm(1+K)(1+K)V VR R=V=Vmm(1+K)=V(1+K)=Vmm+KV+KVS SK K K K 为分配系数为分配系数为分配系数为分配系
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