淀粉酶紫外育种.pptx
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1、实验二实验二淀粉酶产生菌紫外线诱变育种淀粉酶产生菌紫外线诱变育种1 1、掌握紫外线诱变育种的原理和方法步骤掌握紫外线诱变育种的原理和方法步骤2 2、了解淀粉酶活力测定方法了解淀粉酶活力测定方法实验目的要求实验目的要求实实验验原原理理实实验验步步骤骤分三阶段进行分三阶段进行:诱变处理诱变处理观察诱变效应、观察诱变效应、接种、培养接种、培养-淀粉酶活力淀粉酶活力测定测定第一部分第一部分诱变处理诱变处理1)制备菌(芽孢)悬液;制备菌(芽孢)悬液;2)显微镜直接计数,调整细胞(芽孢)浓度至约显微镜直接计数,调整细胞(芽孢)浓度至约108/ml/;3)倒平板(牛肉膏蛋白胨;每组倒平板(牛肉膏蛋白胨;每组
2、12套);套);4)紫外线处理(紫外线处理(3ml,直径,直径6cm平皿,平皿,15min););5)稀释(至稀释(至105););实验步骤(continued)实验步骤(continued)6)涂平板(取后涂平板(取后3个稀释度,每稀释度个稀释度,每稀释度2皿,每皿加菌液皿,每皿加菌液100ul););注意:注意:4)6)在暗室红灯下进行)在暗室红灯下进行7)培养:平板倒置装于遮光袋,放置于培养:平板倒置装于遮光袋,放置于37培养培养48小时;小时;8)采用采用5)6)步同样方法稀释未经照射的菌液,并涂)步同样方法稀释未经照射的菌液,并涂平板(平板(6个),个),37培养培养48小时。小时。
3、两天后进行第二阶段工作两天后进行第二阶段工作实验步骤(continued)第二部分:第二部分:观察诱变效应、接种、摇瓶培养观察诱变效应、接种、摇瓶培养 1111)接种、培养:)接种、培养:选取诱变组透明圈直径和菌落直径比值较大的菌落(菌选取诱变组透明圈直径和菌落直径比值较大的菌落(菌株)株)3个,分别接种牛肉膏蛋白胨液体培养基(每株接个,分别接种牛肉膏蛋白胨液体培养基(每株接1瓶),瓶),37,160rpm,培养,培养23天。天。9)分别计数诱变组和对照组平板上菌落数,并计算致死率;)分别计数诱变组和对照组平板上菌落数,并计算致死率;10)观察诱变效应:)观察诱变效应:加入碘液,分别测量诱变组
4、和对照组加入碘液,分别测量诱变组和对照组1020个菌落的透明个菌落的透明圈直径和菌落直径,并计算比值,求平均数;将诱变组和对圈直径和菌落直径,并计算比值,求平均数;将诱变组和对照组数据作比较。照组数据作比较。实验步骤(continued)第三部分第三部分-淀粉酶活力测定淀粉酶活力测定(部颁标准)(部颁标准)1、原理、原理-淀粉酶能将淀粉分子键的淀粉酶能将淀粉分子键的-1-1,4 4葡萄糖苷键任意切断葡萄糖苷键任意切断成长短不一的短链糊精,以及少量麦芽糖和葡萄糖,而使成长短不一的短链糊精,以及少量麦芽糖和葡萄糖,而使淀粉对碘呈蓝紫色特异反应逐渐消失,以该颜色消失的速淀粉对碘呈蓝紫色特异反应逐渐消
5、失,以该颜色消失的速度计算酶的活力。度计算酶的活力。实验步骤(continued)2 2、试剂、试剂 1 1、原原碘碘液液 称称取取碘碘5.5g5.5g,碘碘化化钾钾11g11g,先先用用少少量量蒸蒸馏馏水水使碘完全溶解后定容至使碘完全溶解后定容至250ml250ml,贮存于棕色瓶中。,贮存于棕色瓶中。2 2、稀稀碘碘液液 取取原原碘碘液液1ml1ml,加加入入碘碘化化钾钾10g10g,用用蒸蒸馏馏水水溶溶解解定容至定容至225ml225ml,贮于棕色瓶中。,贮于棕色瓶中。3 3、2%2%可可溶溶性性淀淀粉粉 精精确确称称取取2g2g可可溶溶性性淀淀粉粉(以以绝绝干干计计),然然后后用用少少量
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