猪血清IgG的分离纯化及鉴定.pptx
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1、1Contents材料与方法结果与讨论总结与感想2一、材料与方法一、材料与方法(一)试验材料(一)试验材料1 1、供试材料、供试材料 采用猪血为实验材料,采自宁波方兴食品有限公司采用猪血为实验材料,采自宁波方兴食品有限公司屠宰场。收集健康肉猪颈动脉血液,室温下放置屠宰场。收集健康肉猪颈动脉血液,室温下放置1-2h,析出血清,于析出血清,于4、8000r/min离心离心10min,除去血球和,除去血球和纤维蛋白原后,取上层血清,纤维蛋白原后,取上层血清,-20冰箱内保存备用。冰箱内保存备用。32 2、主要试剂、主要试剂 试剂名称试剂名称规格规格出产厂家出产厂家三氯醋酸三氯醋酸正辛酸正辛酸氯化钠氯
2、化钠氢氧化钠氢氧化钠盐酸盐酸TrisTris无水乙醇无水乙醇醋酸醋酸分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯上海光铧科技有限公司上海光铧科技有限公司衢州巨化试剂有限公司衢州巨化试剂有限公司天津市永大化学试剂开发中心天津市永大化学试剂开发中心上海三鹰化学试剂有限公司上海三鹰化学试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司杭州瓶窑和顺化工试剂厂杭州瓶窑和顺化工试剂厂浙江中星化工试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司4试剂名称试剂名称规格规格出产厂家出产厂家考马斯亮蓝考马斯亮蓝甘油甘
3、油巯基乙醇巯基乙醇SDSSDS甘氨酸甘氨酸溴酚蓝溴酚蓝DEAE52DEAE52过硫酸铵过硫酸铵乙酸钡分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯浙江中星化工试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司无锡市龙吉化工试剂有限公司无锡市龙吉化工试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司上海源聚生物科技有限公司上海源聚生物科技有限公司天津市永大化学试剂开发中心天津市永大化学试剂开发中心浙江中星化工试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司安徽三星树脂科技有限公司安徽三星树脂科技有限公司上海三鹰化学试剂有限公司上海三鹰化学试剂有限公司
4、浙江中星化工试剂有限公司浙江中星化工试剂有限公司53 3、仪器设备、仪器设备 仪器名称仪器名称型号型号生产厂家生产厂家紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计S52S52恒达仪器厂恒达仪器厂电泳仪电泳仪CS101CS101上海精密科学仪器有限公司上海精密科学仪器有限公司低速大容量离心机低速大容量离心机TDL-5TDL-5上海安亭科学仪器厂上海安亭科学仪器厂高速万能粉碎机高速万能粉碎机FW100FW100天津市泰斯特仪器有限公司天津市泰斯特仪器有限公司数显恒温水浴锅数显恒温水浴锅HH-2HH-2常州国华电器有限公司常州国华电器有限公司真空干燥箱真空干燥箱DZF-6050DZF-6050上海一恒科技有
5、限公司上海一恒科技有限公司电子精密天平电子精密天平AB-LAB-L梅特勒托利多仪器有限公司梅特勒托利多仪器有限公司全温振荡(空气)培养箱全温振荡(空气)培养箱QYC-211QYC-211上海福玛实验设备有限公司上海福玛实验设备有限公司自动液相色谱分离层析仪自动液相色谱分离层析仪MC99-3MC99-3上海沪西分析仪器厂上海沪西分析仪器厂电热恒温鼓风干燥箱电热恒温鼓风干燥箱OHG-907385-OHG-907385-上海新苗医疗器械制造有限公司上海新苗医疗器械制造有限公司酸度计酸度计DELTA-320DELTA-320梅特勒托利多仪器梅特勒托利多仪器(上海上海)有限公司有限公司层析拄层析拄1.0
6、301.030上海沪西分析仪器厂上海沪西分析仪器厂恒温磁力搅拌器恒温磁力搅拌器90-290-2上海亚荣生化仪器厂上海亚荣生化仪器厂6AA猪血清IgG的提取BB 猪血清IgG的纯化C C提取液蛋白含量测定(二)试验方法(二)试验方法DD猪血清IgG分子量测定71、猪血清IgG的提取正辛酸法l准确量取猪血清准确量取猪血清40mL40mL于于500mL500mL烧杯中,加入烧杯中,加入60mmol/L 60mmol/L pH4.0pH4.0醋酸缓冲液醋酸缓冲液160mL160mL,用氢氧化钠溶液调,用氢氧化钠溶液调pH4.5pH4.5。l以每毫升稀释液加入以每毫升稀释液加入25L25L正辛酸的比例,
7、在磁力搅拌正辛酸的比例,在磁力搅拌条件下缓慢加入正辛酸,室温搅拌条件下缓慢加入正辛酸,室温搅拌30min30min,44,50005000 r/min r/min离心离心30min30min,弃去沉淀。,弃去沉淀。l上清液上清液44预冷,以预冷,以1mL1mL上清液加上清液加0.227g0.227g硫酸铵的比例,硫酸铵的比例,缓慢加入硫酸铵粉末,边加边搅拌,室温下继续搅拌缓慢加入硫酸铵粉末,边加边搅拌,室温下继续搅拌30min30min,5000r/min5000r/min离心离心15min15min。l将沉淀溶于将沉淀溶于20mL20mL生理盐水中,透析过夜,离心去沉淀,生理盐水中,透析过夜
8、,离心去沉淀,上清液即为上清液即为粗提粗提IgGIgG。82 2、猪血清、猪血清IgGIgG的纯化的纯化 将上述将上述IgGIgG粗品溶于少量生粗品溶于少量生理盐水后装入透析袋,悬于装有理盐水后装入透析袋,悬于装有0.01mol/L0.01mol/L,pH7.4pH7.4的的PBSPBS的大烧的大烧杯中,于磁力搅拌器上杯中,于磁力搅拌器上44透析透析24h24h,每,每6h6h换一次液。换一次液。(1 1)透析脱盐)透析脱盐9l取取2g2g预处理的预处理的DEAE-52DEAE-52纤维素纤维素、装成、装成1.530cm1.530cm,柱床高,柱床高25cm25cm层析柱。层析柱。l缓冲液缓冲
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