细菌基本检验技术三.pptx

目的v掌握观察菌落的方法，了解细菌在液体、半固体培养基的生长表现及意义。v掌握革兰染色法和熟悉细菌涂片的制备。v掌握细菌和基本形态和特殊结构。【器材器材】v显微镜、载玻片、察镜纸、小镊子、接种环、酒精灯等 细菌染色标本的制作程序细菌染色标本的制作程序涂涂 片片干干 燥燥固固 定定染染 色色 染色方法染色方法v革兰染色法（革兰染色法（Gram stain）v芽胞染色法（芽胞染色法（spore stain）革兰染色法（革兰染色法（Gram stainGram stain）方法（改良快速法）方法（改良快速法）初染：初染：结晶紫等量结晶紫等量NaHCO3 35s，水洗，水洗 媒染：媒染：碱性碘液碱性碘液 35s，水洗，水洗 脱色：脱色：丙酮酒精丙酮酒精 35s，水洗，水洗 复染：复染：碱性稀释复红碱性稀释复红 35s，水洗，水洗结果结果 紫色：革兰阳性菌紫色：革兰阳性菌 红色：革兰阴性菌红色：革兰阴性菌芽胞染色法（芽胞染色法（spore stainspore stain）方法：方法：涂片涂片干燥干燥固定固定5%5%孔雀绿加温染孔雀绿加温染 3 35min 5min 水洗水洗0.5%0.5%沙黄沙黄1min1min水洗、晾干、油镜检水洗、晾干、油镜检结果：结果：菌体呈红色，芽胞呈绿色。菌体呈红色，芽胞呈绿色。影响因素影响因素 染色关键：脱色时间的长短染色关键：脱色时间的长短 其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液质量控制质量控制p革兰阳性菌革兰阳性菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌ATCC25923革兰阴性菌革兰阴性菌大肠埃希菌大肠埃希菌ATCC25922三、拉丝试验三、拉丝试验原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破裂，释放出未断裂的裂，释放出未断裂的DNADNA螺旋，使菌液呈粘性。螺旋，使菌液呈粘性。方法：方法：结果：有丝出现（结果：有丝出现（拉丝试验）拉丝试验）革兰阴性菌革兰阴性菌 无丝出现（无丝出现（拉丝试验）拉丝试验）革兰阳性菌革兰阳性菌用途：用于快速鉴别革兰阳性菌和革兰阴性菌用途：用于快速鉴别革兰阳性菌和革兰阴性菌【注意事项注意事项】v1.每次取菌前后注意将接种环灭菌。v2.涂片薄而均匀，干燥时注意勿将标本烤枯，不要忘记标本的固定。v3.革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须严格把握脱色时间。v4.选用培养1824小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰阳性菌转呈阴性反应。