目的基因供体细胞受体细胞思考题.pptx
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1、基因工程及其应用基因工程及其应用基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说,就是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向地改造生物的性状。原理:基因重组操作水平:DNA分子水平操作环境:生物体外结果:定向改造生物的性状,获得人类所需要的品种。目的基因目的基因供体细胞供体细胞受体细胞受体细胞思考题:思考题:在以上把人的胰岛素基因在以上把人的胰岛素基因“嫁接嫁接”到大肠杆菌上的过程中,关键步骤或难点到大肠杆菌上的过程中,关键步骤或难点是什么?是什么?关键步骤一:胰岛素基因怎样从人的细胞内提取?关键步骤一:胰岛素基因怎样从人的细胞内提取?
2、关键步骤二:胰岛素基因由谁负责关键步骤二:胰岛素基因由谁负责“运输运输”?关键步骤三:胰岛素基因怎样进入到大肠杆菌细胞内?关键步骤三:胰岛素基因怎样进入到大肠杆菌细胞内?在关键步骤的完成过程中都要用哪些基因操在关键步骤的完成过程中都要用哪些基因操作工具作工具?关键步骤一的工具:基因的剪刀关键步骤一的工具:基因的剪刀限制性内切酶。限制性内切酶。关键步骤二的工具:基因的针线关键步骤二的工具:基因的针线DNA连接酶。连接酶。关键步骤三的工具:基因的运输工具关键步骤三的工具:基因的运输工具运载体。运载体。二、基因操作的工具二、基因操作的工具1.1.基因的基因的“剪刀剪刀”限制性内切酶(限限制性内切酶(
3、限制酶)制酶)一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切割点上将列,并在特定的切割点上将DNA DNA 分子切断。分子切断。专一性专一性基因工程的基本工具基因工程的基本工具(1)基因的)基因的“剪刀剪刀”:限制性核酸内切酶:限制性核酸内切酶C T T A AG A A T T C G 作用特点:作用特点:结果:结果:举例:举例:特异性,即识别特定核苷酸序列,切割特定切点。特异性,即识别特定核苷酸序列,切割特定切点。产生黏性未端(碱基互补配对)。产生黏性未端(碱基互补配对)。大肠杆菌的一种大肠杆菌的一种ECORI限制酶识别限制酶识别GAATTCGAA
4、TTC序列,并序列,并在在G G和和A A之间切开)。之间切开)。黏性末端黏性末端基因的针线:基因的针线:DNA连接酶连接酶GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG用同种限制酶切割用同种限制酶切割被同一种限制酶切断的几个被同一种限制酶切断的几个DNADNA是否具是否具有相同的黏性末端?有相同的黏性末端?、基因的针线、基因的针线DNADNA连接酶连接酶连接酶的作用是:将互补配对的两个黏性连接酶的作用是:将互补配对的两个黏性末端连接起来,使之成为一个完整的末端连接起来,使之成为一个完整的DNADNA分子。分子。3 3、
5、基因的运输工具、基因的运输工具运载体运载体常常用用的的运运载载体体:质质粒粒、噬菌体和动植物病毒噬菌体和动植物病毒标记基因,标记基因,便于进行便于进行检测。检测。第一步:获取目的基因:第一步:获取目的基因:三、工程基本步骤三、工程基本步骤1.从供体细胞的从供体细胞的DNA中直接分离基因中直接分离基因2.人工合成基因人工合成基因2 2、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合用与提取目用与提取目的基因相同的限的基因相同的限制酶切割质粒使制酶切割质粒使之出现一个切口,之出现一个切口,将目的基因插入将目的基因插入切口处,让目的切口处,让目的基因的黏性末端基因的黏性末端与切口上的黏性与切口上的黏性末
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