第01章蛋白质的结构与功能1.pptx
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目录目录Biochemistry生物化学生物化学目录目录绪绪 论论生物化学的概念生物化学的概念生物化学的发展简史生物化学的发展简史生物化学研究的主要内容生物化学研究的主要内容生物化学的重要性生物化学的重要性目录目录一、生物化学概念:一、生物化学概念:是研究生物体内是研究生物体内化学分子化学分子与与化学反应化学反应的基础生的基础生命科学,从分子水平探讨生命现象的本质。命科学,从分子水平探讨生命现象的本质。组成:组成:1.1.蛋白质蛋白质 核酸核酸 多糖多糖 脂类脂类四大基本组成四大基本组成2.2.维生素维生素 激素激素 有机酸有机酸次生物质次生物质3.3.水和无机盐水和无机盐目录目录二、发展简史二、发展简史生化发展史:生化发展史:w叙述生物化学阶段(认知)叙述生物化学阶段(认知)-生物体的化学组成生物体的化学组成w动态生物化学阶段(理解)动态生物化学阶段(理解)-功能研究及代谢研究功能研究及代谢研究w分子生物学时期(细化)分子生物学时期(细化)-核酸蛋白及相互关系核酸蛋白及相互关系中国中国:古代古代42004200年前已开始造酒、酿醋、做豆腐年前已开始造酒、酿醋、做豆腐世界世界:生化是在物理、化学、生物学、医学有了一生化是在物理、化学、生物学、医学有了一 定发展才出现的定发展才出现的目录目录“DNA双螺旋双螺旋”模型的创立者模型的创立者“人类基因组计划人类基因组计划”的首任负责人的首任负责人诺贝尔奖金获得者诺贝尔奖金获得者D.J.Watson 1.DNA双螺旋结构的发现双螺旋结构的发现1962年诺贝尔生理学和医学奖年诺贝尔生理学和医学奖目录目录克隆羊克隆羊转基因动物转基因动物转基因植物转基因植物2.DNA克隆技术使基因操作无所不能克隆技术使基因操作无所不能目录目录基因组基因组蛋白质组学蛋白质组学RNA组学组学代谢组学代谢组学糖组学糖组学3.基因基因组学组学及其它及其它组学组学研究研究目录目录已经测序的生物DrosophilaSaccharomyces Cerevisiae Zebra fishRat paddy rice WirewormChimpanzeerhesus Arabidopsis thaliana 目录目录三、生物化学研究的主要内容三、生物化学研究的主要内容生物大分子的结构和功能生物大分子的结构和功能物质代谢及其调节物质代谢及其调节基因信息传递及其调控基因信息传递及其调控目录目录四、生物化学的重要性四、生物化学的重要性与各学科之间相互联系与各学科之间相互联系与医学的关系与医学的关系有更多内容需要探索有更多内容需要探索?目录目录 课程安排课程安排绪论绪论 第一章第一章 蛋白质的结构与功能蛋白质的结构与功能 第二章第二章 核酸的结构与功能核酸的结构与功能 第三章第三章 酶酶 第四章第四章 糖代谢糖代谢第五章第五章 脂类代谢脂类代谢 第六章第六章 生物氧化生物氧化 第第七七章章 氨基酸代谢氨基酸代谢 第八章第八章 核苷酸代谢核苷酸代谢第九章第九章 物质代谢的联系与调解物质代谢的联系与调解 第十五章第十五章 细胞信息转导细胞信息转导第十六章第十六章 血液的生物化学血液的生物化学第十七章第十七章 肝的生物化学肝的生物化学 生物大分子生物大分子物质代谢物质代谢及其调节及其调节专题篇专题篇目录目录蛋白质的结构与功能蛋白质的结构与功能第第1 1章章Structure and Function of Protein目录目录n蛋白质研究的历史蛋白质研究的历史18331833年年,从从麦麦芽芽中中分分离离淀淀粉粉酶酶;随随后后从从胃胃液液中中分离到类似胃蛋白酶的物质。分离到类似胃蛋白酶的物质。18641864年,血红蛋白被分离并结晶。年,血红蛋白被分离并结晶。1919世世纪纪末末,证证明明蛋蛋白白质质由由氨氨基基酸酸组组成成,并并合合成成了多种短肽。了多种短肽。2020世世纪纪初初,发发现现蛋蛋白白质质的的二二级级结结构构;完完成成胰胰岛岛素一级结构测定。素一级结构测定。目录目录2020世世纪纪中中叶叶,各各种种蛋蛋白白质质分分析析技技术术相相继继建建立立,促进了蛋白质研究迅速发展;促进了蛋白质研究迅速发展;19621962年,确定了血红蛋白的四级结构。年,确定了血红蛋白的四级结构。2020世世纪纪9090年年代代,功功能能基基因因组组与与蛋蛋白白质质组组研研究究地地展开。展开。目录目录n什么是蛋白质什么是蛋白质?蛋蛋白白质质(protein)是是由由许许多多氨氨基基酸酸(amino acids)通通过过肽肽键键(peptide bond)相相连连形形成成的的高分子含高分子含氮氮化合物。化合物。目录目录n蛋白质的生物学重要性蛋白质的生物学重要性分分布布广广:所所有有器器官官、组组织织都都含含有有蛋蛋白白质质;细细胞的各个部分都含有蛋白质。胞的各个部分都含有蛋白质。含含量量高高:蛋蛋白白质质是是细细胞胞内内最最丰丰富富的的有有机机分分子子,占占人人体体固固体体成成分分的的4545,某某些些组组织织含含量量更更高高,例如脾、肺及横纹肌等高达例如脾、肺及横纹肌等高达8080。1.蛋白质是生物体重要组成成分蛋白质是生物体重要组成成分目录目录作为生物催化剂(酶)作为生物催化剂(酶)代谢调节作用代谢调节作用免疫保护作用免疫保护作用物质的转运和存储物质的转运和存储运动与支持作用运动与支持作用参与细胞间信息传递参与细胞间信息传递2.蛋白质具有重要的生物学功能蛋白质具有重要的生物学功能3.氧化供能氧化供能目录目录蛋白质的分子组成蛋白质的分子组成The Molecular Component of Protein第一节第一节目录目录n组成蛋白质的元素组成蛋白质的元素主要有主要有C C、H H、O O、N N和和 S S。有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼,个别蛋白质还含有碘锌、锰、钴、钼,个别蛋白质还含有碘 。目录目录 各种蛋白质的含氮量很接近,平均为各种蛋白质的含氮量很接近,平均为16。由由于于体体内内的的含含氮氮物物质质以以蛋蛋白白质质为为主主,因因此此,只只要要测测定定生生物物样样品品中中的的含含氮氮量量,就就可可以以根根据据以以下公式推算出蛋白质的大致含量:下公式推算出蛋白质的大致含量:100克样品中蛋白质的含量克样品中蛋白质的含量(g%)=每克样品含氮克数每克样品含氮克数 6.251001/16%n蛋白质元素组成的特点蛋白质元素组成的特点目录目录一、组成人体蛋白质的一、组成人体蛋白质的20种氨基酸种氨基酸均属于均属于L-氨基酸氨基酸 存存在在自自然然界界中中的的氨氨基基酸酸有有300300余余种种,但但组组成成人人体体蛋蛋白白质质的的氨氨基基酸酸仅仅有有2020种种,且且均均属属 L-L-氨基酸氨基酸(甘氨酸除外)。(甘氨酸除外)。目录目录H甘氨酸甘氨酸CH3丙氨酸丙氨酸L-L-氨基酸的通式氨基酸的通式RC+NH3COO-H目录目录非极性脂肪族氨基酸非极性脂肪族氨基酸极性中性氨基酸极性中性氨基酸芳香族氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸碱性氨基酸二、氨基酸二、氨基酸可根据侧链结构和理化性质可根据侧链结构和理化性质进行分类进行分类目录目录(一一)侧链含烃链的氨基酸属于侧链含烃链的氨基酸属于非极性脂肪族非极性脂肪族氨基酸氨基酸目录目录(二二)侧链有极性但不带电荷的氨基酸是侧链有极性但不带电荷的氨基酸是极性极性中性氨基酸中性氨基酸目录目录(三三)侧链含芳香基团的氨基酸是侧链含芳香基团的氨基酸是芳香族氨基酸芳香族氨基酸 Tyr Trp目录目录(四四)侧链含负性解离基团的氨基酸是侧链含负性解离基团的氨基酸是酸性氨基酸酸性氨基酸目录目录(五五)侧链含正性解离基团的氨基酸属于侧链含正性解离基团的氨基酸属于碱性碱性氨基酸氨基酸目录目录n几种特殊氨基酸几种特殊氨基酸 脯氨酸脯氨酸(亚氨基酸)(亚氨基酸)CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2目录目录 半胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫键二硫键-HH3 33-OOC-CH-CH2-S+NHS-CH2-CH-COO-OOC-CH-CH2-S+NHS-CH2-CH-COO-+NH-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-COO-HS-COO-CH2-CH-CH2-CH-+NH3目录目录特殊归类含羟基氨基酸含羟基氨基酸:丝氨酸(:丝氨酸(ser),苏氨酸(),苏氨酸(thr),),酪氨酸(酪氨酸(tyr)含硫氨基酸含硫氨基酸:甲硫氨酸(:甲硫氨酸(Met),半胱氨酸),半胱氨酸(cys)含苯环氨基酸含苯环氨基酸:酪氨酸,色氨酸,苯丙氨酸:酪氨酸,色氨酸,苯丙氨酸目录目录三、三、20种氨基酸具有共同或特异的理化性质种氨基酸具有共同或特异的理化性质n两性解离及等电点两性解离及等电点氨基酸是两性电解质,其解离程度取决于所氨基酸是两性电解质,其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。处溶液的酸碱度。等电点等电点(isoelectric point,pI)在在某某一一pH的的溶溶液液中中,氨氨基基酸酸解解离离成成阳阳离离子子和和阴阴离离子子的的趋趋势势及及程程度度相相等等,成成为为兼兼性性离离子子,呈呈电电中性。此时溶液的中性。此时溶液的pH值值称为该氨基酸的称为该氨基酸的等电点等电点。(一)氨基酸具有两性解离的性质(一)氨基酸具有两性解离的性质目录目录pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性离子氨基酸的兼性离子 阳离子阳离子阴离子阴离子目录目录等电点的计算:等电点的计算:氨基酸的等电点由氨基酸的等电点由-羧基和羧基和 -氨基氨基解离常数解离常数的的 负对数负对数pK1和和pK2决定。决定。计算公式:计算公式:PI=1/2(pK1+pK2)举例:丙氨酸举例:丙氨酸pK-COOH=2.34 pK-NH2=9.69 丙氨酸的丙氨酸的PI=1/2(2.34+9.69)=6.02目录目录(二)含共轭双键的氨基酸具有紫外吸收性质(二)含共轭双键的氨基酸具有紫外吸收性质色氨酸、酪氨酸的色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在最大吸收峰在 280 nm 附近。附近。大大多多数数蛋蛋白白质质含含有有这这两两种种氨氨基基酸酸残残基基,所所以以 测测 定定 蛋蛋 白白 质质 溶溶 液液280nm的的光光吸吸收收值值是是分分析析溶溶液液中中蛋蛋白白质质含含量量的的快速简便的方法。快速简便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收芳香族氨基酸的紫外吸收目录目录(三)氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物(三)氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物氨氨基基酸酸与与茚茚三三酮酮水水合合物物共共热热,可可生生成成蓝蓝紫色紫色化合物,其最大吸收峰在化合物,其最大吸收峰在570nm处。处。由由于于此此吸吸收收峰峰值值与与氨氨基基酸酸的的含含量量存存在在正正比关系,因此可作为氨基酸定量分析方法。比关系,因此可作为氨基酸定量分析方法。目录目录四、蛋白质是由许多氨基酸残基组成四、蛋白质是由许多氨基酸残基组成的多肽链的多肽链肽肽键键(peptide bond)是是由由一一个个氨氨基基酸酸的的-羧羧基基与与另另一一个个氨氨基基酸酸的的-氨氨基基脱脱水水缩缩合合而而形形成成的的化学键。化学键。(一)(一)氨基酸通过肽键连接而形成肽氨基酸通过肽键连接而形成肽(peptide)目录目录+-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽键目录目录肽肽是是由由氨氨基基酸酸通通过过肽肽键键缩缩合合而而形形成成的的化化合物。合物。两两分分子子氨氨基基酸酸缩缩合合形形成成二二肽肽,三三分分子子氨氨基基酸缩合则形成酸缩合则形成三肽三肽肽肽链链中中的的氨氨基基酸酸分分子子因因为为脱脱水水缩缩合合而而基基团团不全,被称为不全,被称为氨基酸残基氨基酸残基(residue)。由由十十个个以以内内氨氨基基酸酸相相连连而而成成的的肽肽称称为为寡寡肽肽(oligopeptide),由由更更多多的的氨氨基基酸酸相相连连形形成成的的肽肽称称多肽多肽(polypeptide)。目录目录N 末端:多肽链中有末端:多肽链中有游离游离-氨基氨基的一端的一端C 末端:多肽链中有末端:多肽链中有游离游离-羧基羧基的一端的一端n多肽链有两端:多肽链有两端:多多肽肽链链(polypeptide chain)是是指指许许多多氨氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。基酸之间以肽键连接而成的一种结构。N末端末端C末端末端牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶目录目录(二)(二)体内存在多种重要的生物活性肽体内存在多种重要的生物活性肽 1.谷胱甘肽谷胱甘肽(glutathione,GSH)目录目录GSH过氧过氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH还原酶还原酶NADPH+H+NADP+nGSH与与GSSG间的转换间的转换 目录目录 体内许多激素属寡肽或多肽体内许多激素属寡肽或多肽 神经肽神经肽(neuropeptide)2.多肽类激素及神经肽多肽类激素及神经肽目录目录五、蛋白质的分类五、蛋白质的分类n根据蛋白质组成成分根据蛋白质组成成分:单纯蛋白质单纯蛋白质结合蛋白质结合蛋白质 =蛋白质部分蛋白质部分 +非蛋白质部分非蛋白质部分n根据蛋白质形状根据蛋白质形状:纤维状蛋白质纤维状蛋白质球状蛋白质球状蛋白质目录目录课堂小结一、蛋白质的元素组成,特征元素一、蛋白质的元素组成,特征元素二、氨基酸(一)结构通式二、氨基酸(一)结构通式 (二)分类(二)分类 (三)理化性质(三)理化性质三、多肽三、多肽 (一)概念(一)概念 (二)生物活性肽(二)生物活性肽目录目录蛋白质的分子结构蛋白质的分子结构The Molecular Structure of Protein 第二节第二节目录目录n蛋白质的分子结构包括蛋白质的分子结构包括:高级高级结构结构一级结构一级结构(primary structure)二级结构二级结构(secondary structure)三级结构三级结构(tertiary structure)四级结构四级结构(quaternary structure)目录目录n定义定义:蛋白质的一级结构指在蛋白质分子从蛋白质的一级结构指在蛋白质分子从N-端至端至C-端的端的氨基酸排列顺序氨基酸排列顺序。一、一、氨基酸的排列顺序决定蛋白质的氨基酸的排列顺序决定蛋白质的一级结构一级结构n主要的化学键主要的化学键:肽键肽键,有些蛋白质还包括二硫键。,有些蛋白质还包括二硫键。目录目录一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能功能的基础的基础,但不是决定蛋白质空间构象的但不是决定蛋白质空间构象的唯一因素唯一因素。目录目录二、二、多肽链的局部主链构象为蛋白质多肽链的局部主链构象为蛋白质二级结构二级结构蛋蛋白白质质分分子子中中某某一一段段肽肽链链的的局局部部空空间间结结构构,即即该该段段肽肽链链主主链链骨骨架架原原子子的的相相对对空空间间位位置置,并并不不涉涉及及氨氨基基酸酸残残基基侧侧链链的的构构象象。n定义定义:n主要的化学键主要的化学键:氢键氢键 目录目录(一)参与肽键形成的(一)参与肽键形成的6个原子在同一平面上个原子在同一平面上参参与与肽肽键键的的6个个原原子子C 1、C、O、N、H、C 2位位于于同同一一平平面面,C 1和和C 2在在平平面面上上所所处处的的位位置置为为反反式式(trans)构构型型,此此同同一一平面上的平面上的6个原子构成了所谓的个原子构成了所谓的肽单元肽单元(peptide unit)。目录目录(一)参与肽键形成的(一)参与肽键形成的6个原子在同一平面上个原子在同一平面上参参与与肽肽键键的的6个个原原子子C 1、C、O、N、H、C 2位位于于同同一一平平面面,C 1和和C 2在在平平面面上上所所处处的的位位置置为为反反式式(trans)构构型型,此此同同一一平面上的平面上的6个原子构成了所谓的个原子构成了所谓的肽单元肽单元(peptide unit)。目录目录目录目录 -螺旋螺旋 (-helix)-折叠折叠 (-pleated sheet)-转角转角 (-turn)无规卷曲无规卷曲 (random coil)(二)(二)-螺旋结构是常见的蛋白质二级结构螺旋结构是常见的蛋白质二级结构n蛋白质二级结构蛋白质二级结构目录目录 -螺旋螺旋(-helix)目目 录录右手螺旋右手螺旋,侧链伸向螺旋侧链伸向螺旋外侧外侧每每3.6个氨基酸残基螺旋个氨基酸残基螺旋上升一圈,螺距为上升一圈,螺距为0.54nm;维系力:链内维系力:链内氢键氢键,氢,氢键的方向与螺旋长轴基本键的方向与螺旋长轴基本平行平行 目录目录(三)(三)-折叠使多肽链形成片层结构折叠使多肽链形成片层结构目录目录 -折叠折叠(-pleated sheet)锯齿状结构锯齿状结构侧链交替地侧链交替地位于锯齿状结位于锯齿状结构的构的上下方上下方;肽链的肽链的走向走向可相同,也可可相同,也可相反。相反。链间氢键链间氢键,且氢键方向与且氢键方向与折叠方向折叠方向垂直。垂直。目录目录目录目录(四)(四)-转角和无规卷曲转角和无规卷曲-转角转角(-turn)180的转角部位的转角部位由由4个个氨基酸残基构成氨基酸残基构成由第一个残基的羰基由第一个残基的羰基氧(氧(O)与第四个残基的)与第四个残基的氨基氨基 氢(氢(H)可形成)可形成氢氢键键多含多含脯氨酸脯氨酸和甘氨酸和甘氨酸目录目录无规卷曲无规卷曲(random coil)无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。常见于球状蛋白质分子中,在其它类型二级结构肽段之间起活节作用,有利于整条肽链盘曲折叠。H H2 2N NCOOHCOOH目录目录举例:蜘蛛网丝蛋白目录目录(五)(五)模体模体是具有特殊功能的是具有特殊功能的超二级结构超二级结构在许多蛋白质分子中,可发现二个或三个具在许多蛋白质分子中,可发现二个或三个具有二级结构的肽段,在空间上相互接近,形成一有二级结构的肽段,在空间上相互接近,形成一个个有规则的二级结构组合,被称为有规则的二级结构组合,被称为超二级结构超二级结构。二级结构组合形式有二级结构组合形式有3 3种:种:,(p17p17)。)。目录目录二个或三个具有二级结构的肽段,在空间二个或三个具有二级结构的肽段,在空间上相互接近,形成一个特殊的空间构象,称为上相互接近,形成一个特殊的空间构象,称为模体模体(motif)。模体是具有特殊功能的超二级结构。模体是具有特殊功能的超二级结构。目录目录钙结合蛋白中结合钙结合蛋白中结合钙离子的模体钙离子的模体锌指结构锌指结构-螺旋螺旋-转角(或转角(或环)环)-螺旋模体螺旋模体链链-转角转角-链模体链模体链链-转角转角-螺旋螺旋-转角转角-链模体链模体n模体常见的形式模体常见的形式目录目录(六)氨基酸残基的侧链对二级结构形成的影响(六)氨基酸残基的侧链对二级结构形成的影响蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成-螺旋螺旋或或-折叠,它就会出现相应的二级结构。折叠,它就会出现相应的二级结构。目录目录三、三、在二级结构基础上多肽链进一步折叠在二级结构基础上多肽链进一步折叠形成蛋白质三级结构形成蛋白质三级结构疏水键、离子键、氢键和疏水键、离子键、氢键和 Van der Waals力等。力等。n主要的化学键主要的化学键:整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。n定义定义:(一)三级结构是指整条肽链中全部氨基酸(一)三级结构是指整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置残基的相对空间位置目录目录目录目录 肌红蛋白肌红蛋白(Mb)N 端端 C端端目录目录(二)结构域(二)结构域是三级结构层次上的局部折叠区是三级结构层次上的局部折叠区分子量较大的蛋白质常可折叠成多个结构较为紧分子量较大的蛋白质常可折叠成多个结构较为紧密的区域,并各行其功能,称为结构域密的区域,并各行其功能,称为结构域 (domain)。目录目录(三)分子伴侣(三)分子伴侣参与蛋白质折叠参与蛋白质折叠分子伴侣分子伴侣(chaperon)通过提供一个保护环境从而通过提供一个保护环境从而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松开,如此重复进行可防止错误的聚集发生,后松开,如此重复进行可防止错误的聚集发生,使肽链正确折叠。使肽链正确折叠。分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合,使之解聚分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合,使之解聚后,再诱导其正确折叠。后,再诱导其正确折叠。分子伴侣在蛋白质分子折叠过程中二硫键的正确分子伴侣在蛋白质分子折叠过程中二硫键的正确形成起了重要的作用。形成起了重要的作用。伴侣蛋白在蛋白质折叠中的作用伴侣蛋白在蛋白质折叠中的作用目录目录亚基之间的结合主要是亚基之间的结合主要是氢键和离子键。氢键和离子键。四、四、含有二条以上多肽链的蛋白质含有二条以上多肽链的蛋白质具有四级结构具有四级结构蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用,称为触部位的布局和相互作用,称为蛋白质的四级蛋白质的四级结构结构。有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链,有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链,每一条多肽链都有完整的三级结构,称为蛋白每一条多肽链都有完整的三级结构,称为蛋白质的质的亚基亚基 (subunit)。目录目录由由2个个亚亚基基组组成成的的蛋蛋白白质质四四级级结结构构中中,若若亚亚基基分分子子结结构构相相同同,称称之之为为同同二二聚聚体体(homodimer),若若亚亚基基分分子子结构不同,则称之为结构不同,则称之为异二聚体异二聚体(heterodimer)。血红蛋白的血红蛋白的四级结构四级结构目录目录五、蛋白质组学五、蛋白质组学(一)蛋白质组学基本概念(一)蛋白质组学基本概念蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表达的全部蛋白质,即达的全部蛋白质,即“一种基因组所表达的一种基因组所表达的全套蛋白质全套蛋白质”。目录目录(二)蛋白质组学研究技术平台(二)蛋白质组学研究技术平台 蛋白质组学是高通量,高效率的研究蛋白质组学是高通量,高效率的研究:双向电泳分离样品蛋白质双向电泳分离样品蛋白质 蛋白质点的定位、切取蛋白质点的定位、切取 蛋白质点的质谱分析蛋白质点的质谱分析 (三)蛋白质组学研究的科学意义(三)蛋白质组学研究的科学意义目录目录小结小结蛋白质的分子结构蛋白质的分子结构 一级结构一级结构 二级结构二级结构 三级结构三级结构 四级结构四级结构超二级结构超二级结构,motif(模序模序)结构域结构域目录目录蛋白质的结构层次从低到高可表示:蛋白质的结构层次从低到高可表示:一级结构(肽链结构,指多肽链中的氨基酸排列顺序)一级结构(肽链结构,指多肽链中的氨基酸排列顺序)二级结构(多肽链主链骨架盘绕折叠形成的有规律性的结构)二级结构(多肽链主链骨架盘绕折叠形成的有规律性的结构)超二级结构(相邻二级结构的聚集体)超二级结构(相邻二级结构的聚集体)结构域(在空间可明显区分的、相对独立的区域性结构)结构域(在空间可明显区分的、相对独立的区域性结构)三级结构(蛋白质总所有原子在空间的相对位置)三级结构(蛋白质总所有原子在空间的相对位置)四级结构(亚基的聚集体)四级结构(亚基的聚集体)目录目录蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系The Relation of Structure and Function of Protein第三节第三节目录目录(一)一级结构是空间构象的基础(一)一级结构是空间构象的基础一、蛋白质一级结构一、蛋白质一级结构是高级结构是高级结构与功能的基础与功能的基础牛核糖核酸酶的牛核糖核酸酶的一级结构一级结构二二硫硫键键一级结构一级结构决定决定高级结构高级结构目录目录 天然状态,天然状态,有催化活性有催化活性 尿素、尿素、-巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠状态,无活性非折叠状态,无活性目录目录(二)一级结构相似的蛋白质具有相似的高级(二)一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能结构与功能胰岛素胰岛素氨基酸残基序号氨基酸残基序号A5A6A10B30人人ThrSerIleThr猪猪ThrSerIleAla狗狗ThrSerIleAla兔兔ThrGlyIleSer牛牛AlaGlyValAla羊羊AlaSerValAla马马ThrSerIleAla目录目录(三)(三)氨基酸序列提供重要的生物化学信息氨基酸序列提供重要的生物化学信息一些广泛存在于生一些广泛存在于生物界的蛋白质如细胞色物界的蛋白质如细胞色素素(cytochrome C),比较,比较它们的一级结构,可以它们的一级结构,可以帮助了解物种进化间的帮助了解物种进化间的关系。关系。目录目录(四)重要蛋白质的氨基酸序列改变可引起疾病(四)重要蛋白质的氨基酸序列改变可引起疾病n例:镰刀形红细胞贫血例:镰刀形红细胞贫血N-val his leu thr pro glu glu C(146)HbS 肽链肽链HbA 肽肽 链链N-val his leu thr pro val glu C(146)这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病,这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病,称为称为“分子病分子病”。目录目录镰刀形红细胞贫血镰刀形红细胞贫血这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病,称为这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病,称为“分子病分子病”。目录目录n肌红蛋白肌红蛋白/血红蛋白血红蛋白含有血红素辅基含有血红素辅基血红素结构血红素结构 二、二、蛋白质空间结构与功能的关系蛋白质空间结构与功能的关系(一)(一)血红蛋白亚基与肌红蛋白结构相似血红蛋白亚基与肌红蛋白结构相似目录目录n肌红蛋白肌红蛋白(myoglobin,Mb)肌肌红红蛋蛋白白是是一一个个只只有有三三级级结结构构的的单单链链蛋蛋白白质质,有有8 8段段-螺螺旋结构。旋结构。血血红红素素分分子子中中的的两两个个丙丙酸酸侧侧链链以以离离子子键键形形式式与与肽肽链链中中的的两两个个碱碱性性氨氨基基酸酸侧侧链链上上的的正正电电荷荷相相连连,加加之之肽肽链链中中的的F8F8组组氨氨酸酸残残基基还还与与FeFe2+2+形形成成配配位位结结合合,所所以以血血红红素素辅辅基基与与蛋蛋白白质质部部分分稳定结合。稳定结合。目录目录n血红蛋白血红蛋白(hemoglobin,Hb)血血红红蛋蛋白白具具有有4个个亚亚基基组组成成的的四四级级结结构构,每每个个亚亚基基可可结结合合1 1个个血血红红素素并携带并携带1 1分子氧分子氧。Hb亚亚基基之之间间通通过过8对对盐盐键键,使使4个个亚亚基基紧紧密密结结合合而而形形成成亲亲水水的的球球状状蛋白。蛋白。目录目录Hb与与Mb一一样样能能可可逆逆地地与与O2结结合合,Hb与与O2 2结结合合后后称称为为氧氧合合Hb。氧氧合合Hb占占总总Hb的的百百分分数数(称(称百分饱和度百分饱和度)随)随O2 2浓度变化而改变。浓度变化而改变。(二)血红蛋白亚基构象变化可影响亚基(二)血红蛋白亚基构象变化可影响亚基与氧结合与氧结合 目录目录肌红蛋白肌红蛋白(Mb)和血红蛋白和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线的氧解离曲线目录目录n协同效应协同效应(cooperativity)一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后,能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合后,能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象,称为合能力的现象,称为协同效应协同效应。如果是促进作用则称为如果是促进作用则称为正协同效应正协同效应 (positive cooperativity)如果是抑制作用则称为如果是抑制作用则称为负协同效应负协同效应(negative cooperativity)目录目录目录目录O2血血红红素素与与氧氧结结合合后后,铁铁原原子子半半径径变变小小,就就能能进进入入卟卟啉啉环环的的小小孔孔中中,继继而而引引起起肽肽链链位位置置的的变动。变动。目录目录n变构效应变构效应(allosteric effect)蛋蛋白白质质空空间间结结构构的的改改变变伴伴随随其其功功能能的的变化,称为变化,称为变构效应变构效应。目录目录(三)蛋白质构象改变(三)蛋白质构象改变可引起疾病可引起疾病蛋蛋白白质质构构象象疾疾病病:若若蛋蛋白白质质的的折折叠叠发发生生错错误误,尽尽管管其其一一级级结结构构不不变变,但但蛋蛋白白质质的的构构象象发发生生改改变变,仍仍可可影影响响其其功功能能,严严重重时时可可导导致疾病发生。致疾病发生。目录目录蛋白质构象改变导致疾病的机理蛋白质构象改变导致疾病的机理:有些蛋:有些蛋白质错误折叠后相互聚集,常形成抗蛋白水解白质错误折叠后相互聚集,常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀,产生毒性而致病,表现酶的淀粉样纤维沉淀,产生毒性而致病,表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。这类疾病包括这类疾病包括:人纹状体脊髓变性病、老:人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。目录目录疯牛病是由朊病毒蛋白疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein,PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。引起的一组人和动物神经退行性病变。正常的正常的PrP富含富含-螺旋,称为螺旋,称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为为-折叠的折叠的PrPsc,从而致病。,从而致病。PrPc-螺旋螺旋PrPsc-折叠折叠正常正常疯牛病疯牛病n疯牛病中的蛋白质构象改变疯牛病中的蛋白质构象改变目录目录第四节第四节蛋白质的理化性质蛋白质的理化性质The Physical and Chemical Characters of Protein目录目录一、一、蛋白质具有两性电离的性质蛋白质具有两性电离的性质蛋蛋白白质质分分子子除除两两端端的的氨氨基基和和羧羧基基可可解解离离外外,氨氨基基酸酸残残基基侧侧链链中中某某些些基基团团,在在一一定定的的溶溶液液pH条条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。当当蛋蛋白白质质溶溶液液处处于于某某一一pH时时,蛋蛋白白质质解解离离成成正正、负负离离子子的的趋趋势势相相等等,即即成成为为兼兼性性离离子子,净净电电荷为零,此时溶液的荷为零,此时溶液的pH称为称为蛋白质的等电点。蛋白质的等电点。n蛋白质的等电点蛋白质的等电点(isoelectric point,pI)目录目录二、蛋白质具有胶体性质二、蛋白质具有胶体性质蛋蛋白白质质属属于于生生物物大大分分子子之之一一,分分子子量量可可自自1万万至至100万万之之巨巨,其其分分子子的的直直径径可可达达1100nm,为胶粒范围之内。为胶粒范围之内。颗粒表面电荷颗粒表面电荷水化膜水化膜n蛋白质胶体稳定的因素蛋白质胶体稳定的因素:+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜水化膜+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒酸酸碱碱酸酸碱碱酸酸碱碱脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉溶液中蛋白质的聚沉目录目录三、蛋白质空间结构破坏而引起变性三、蛋白质空间结构破坏而引起变性在在某某些些物物理理和和化化学学因因素素作作用用下下,其其特特定定的的空空间间构构象象被被破破坏坏,也也即即有有序序的的空空间间结结构构变变成成无无序序的的空空间间结结构构,从从而而导导致致其其理理化化性性质质改改变变和和生生物活性物活性的丧失。的丧失。n蛋白质的变性蛋白质的变性(denaturation)目录目录n造成变性的因素造成变性的因素:如如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等重金属离子及生物碱试剂等。n变性的本质变性的本质:破坏非共价键和二硫键,不改变蛋白破坏非共价键和二硫键,不改变蛋白质的一级结构。质的一级结构。目录目录n 应用举例应用举例:临床医学上,变性因素常被应用来消毒及临床医学上,变性因素常被应用来消毒及灭菌。灭菌。此外此外,防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂(如疫苗等)的必要条件。制剂(如疫苗等)的必要条件。目录目录若若蛋蛋白白质质变变性性程程度度较较轻轻,去去除除变变性性因因素素后后,蛋蛋白白质质仍仍可可恢恢复复或或部部分分恢恢复复其其原原有有的的构构象和功能,称为象和功能,称为复性复性(renaturation)。目录目录 天然状态,天然状态,有催化活性有催化活性 尿素、尿素、-巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠状态,无活性非折叠状态,无活性目录目录在在一一定定条条件件下下,蛋蛋白白疏疏水水侧侧链链暴暴露露在在外外,肽肽链融会相互缠绕继而聚集,因而从溶液中析出。链融会相互缠绕继而聚集,因而从溶液中析出。变变性性的的蛋蛋白白质质易易于于沉沉淀淀,有有时时蛋蛋白白质质发发生生沉沉淀,但并不变性。淀,但并不变性。蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块,此凝块不易再溶于强酸和强碱中。的凝块,此凝块不易再溶于强酸和强碱中。n蛋白质沉淀蛋白质沉淀n蛋白质的凝固作用蛋白质的凝固作用(protein coagulation)目录目录四、蛋白质四、蛋白质在紫外光谱区有特征性吸收峰在紫外光谱区有特征性吸收峰由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此在和色氨酸,因此在280nm波长处有特征性吸收波长处有特征性吸收峰。蛋白质的峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系,因与其浓度呈正比关系,因此可作蛋白质定量测定。此可作蛋白质定量测定。目录目录蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。三酮反应。蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热,呈现紫色或红色,此反应称为硫酸铜共热,呈现紫色或红色,此反应称为双双缩脲反应缩脲反应,双缩脲反应可用来检测蛋白质水解,双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。程度。五、应用蛋白质呈色反应可测定蛋白质五、应用蛋白质呈色反应可测定蛋白质溶液含量溶液含量1.茚三酮反应茚三酮反应(ninhydrin reaction)2.双缩脲反应双缩脲反应(biuret reaction)目录目录第五节第五节蛋白质的分离纯化与结构分析蛋白质的分离纯化与结构分析The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein目录目录一、一、透析及超滤法可去除蛋白质溶液中的透析及超滤法可去除蛋白质溶液中的小分子化合物小分子化合物应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜,达到浓缩蛋白质溶液定截留分子量的超滤膜,达到浓缩蛋白质溶液的目的。的目的。n透析透析(dialysis)n超滤法超滤法利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法物分开的方法。目录目录透析:目录目录二、蛋白质沉淀方法二、蛋白质沉淀方法丙酮沉淀丙酮沉淀盐析盐析(salt precipitation)免疫沉淀法免疫沉淀法 三、利用荷电性质可用电泳法将蛋白质分离三、利用荷电性质可用电泳法将蛋白质分离四、四、层析层析 离子交换层析离子交换层析 凝胶过滤凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析又称分子筛层析五、五、超速离心分离超速离心分离- 配套讲稿:
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