分子生物学工具酶.pptx
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1、8/22/2024分子生物学工具酶分子生物学工具酶中晶生物8/22/2024工具酶是一类用于DNA重组过程中不同DNA分子的制备、切割、修饰、扩增,核酸分子的标记以及它们的核苷酸序列测定的酶。概概 述述分类:分类:u 限制性内切酶u 连接酶u 逆转录酶u DNA、RNA聚合酶u 其它酶类大多数来自不同的微生物和噬菌体少数酶来自动物和动物病毒另一些工具酶编码的基因也被克隆出来,并用大肠杆菌细胞来生产这些工具酶。8/22/2024一、限制性内切酶5-GA A T T C-3 3-C T T A AG-5EcoRI#ER02715000u#ER02725x5000u#ER0273H,25000u市场
2、容量:市场容量:1.5亿美金亿美金8/22/2024其命名以该酶来源的原核生物的名称为依据。第一个大写字母:取自于属名的第一个字母第二、三个小写字母:取自于种名的前两个字母字母后面罗马字:该种生物中不同限制酶分离先后顺序限制酶名称的前三个字母常用斜体或加下横线表示限制酶的命名限制酶的命名分离纯化:几千种限制性内切酶 商品化:200多种限制性内切酶限制酶的种类限制酶的种类8/22/2024限制性内切酶8/22/2024兰白反应兰白反应推荐缓冲液推荐缓冲液作用最适温度作用最适温度作用产物连作用产物连接效率接效率星号活星号活性性GC甲基化甲基化末端失活末端失活高浓度高浓度Genome Qualifi
3、ed限制性内切酶说明书限制性内切酶说明书8/22/2024Fermentas公司30多年研发生产历史,提供200多种高质量的工具酶通过ISO9002国际质量体系认证 v精湛的实验室研发技术和实力 具有全球第二大的产限制酶的菌株(2500株)库 REBASE 中30%限制酶经过Fermentas的鉴定 30%II型限制修饰相关基因在Fermentas得到克隆 全球率先合成了“人造”酶(Eco57MI,N.Bpu10I)v生产中执行最高级别的生产标准(LO Test)v致力于通过提高生产效率从而提升产品质量和价格竞争力v全球限制性内切酶(REs)生产的领先企业v市场份额:20左右,个别国家超过30
4、的市场占有率8/22/2024执行最严格生产标准 PureExtremev自 1996 年以来,只有Fermentas始终执行分子生物学产品生产中最严格的纯度标准 “标记寡核苷酸测试”(the Labeled Oligonucleotide test,”LO”test)v独有的“标记寡核苷酸测试”确保 Fermentas 产品达到 PureExtreme级别v在限制酶、dNTPs、DNA/RNA 修饰酶等的生产中都进行了“标记寡核苷酸测试”传统分析方法包括:非特异性核酸酶内切分析、核酸外切酶分析、连接重切分析、蓝白斑筛选分析等。但是要检测痕量污染的内切、外切核酸酶,磷酸酶,必需但是要检测痕量污
5、染的内切、外切核酸酶,磷酸酶,必需选择更高灵敏度的检测方法:选择更高灵敏度的检测方法:LO Test8/22/2024Labeled Oligonucleotide(LO)test A Invitrogen B Roche C NEB D Stratagene E Promega F Fermentas 8/22/2024不同供应商RE LO检测分析-purecontaminatedminor contaminationX*8/22/202419962001通过通过LO检测的检测的REs(%)RocheInvitrogen NEBStratagene PromegaFermentas8/22/
6、2024PureExtreme 限制性内切酶优势v所有Fermentas内切酶都达到 PureExtreme(致纯)最高品质保证v产品投诉少v严格的批间一致性 v保证产品质量稳定性 v几乎所以的酶都采用标准浓度 10 units/lv实时质量监督8/22/2024所有Fermentas RE在优化Buffer中有100%活性Easy-to-use Five Buffer Plus System每个Fermentas RE含两种buffer:-颜色区分,优化buffer:blue(B+)green(G+)orange(O+)red(R+)yellow(Y+/Tango)和-Universal Y
7、+/Tango Double Digest buffer浓度优化的BSA预先加入所有RE缓冲液中8/22/2024改进的 REsearch 提供DD最佳反应条件http:/ RE畅销排行榜(Top 20)v BamHIv BcuI(SpeI)v BglIIv EcoRIv Eco47IIIv Eco57Iv HindIIIv MboIv MnlIv NotIv NcoIv NdeIv NheIv PaeI(SphI)v SacIv SalIv TaiI(MaeII)v Tru1I(MseI)v XbaIv XhoI 补充:补充:PstI8/22/2024与竞争对手的比较vLO 测试 达到Pur
8、eExtreme:无其它活性的污染v种类第二多 vISO9002 认证和质量控制 vFive Buffer Plus System,加有 BSAvY+/Tango,通用双酶切bufferv列出有效期,通过实时监控保证100活性v价格优势v未经LO测试,但有很多重组内切酶v种类第一多 v无认证,质量控制未核实v单独提供BSA v无双酶切用bufferv仅有出厂化验日期,距客户购买日期可能会有一年之久v价格相当Fermentas vs NEB8/22/2024与竞争对手的比较vLO 测试 达到PureExtreme:无其它活性的污染v种类第二多 vISO9002 认证和质量控制 vFive Buf
9、fer Plus System,加有 BSAvY+/Tango,通用双酶切bufferv列出有效期,实时监控保证100活性v价格优势v未经LO测试,v种类较少,约100种 v有认证,质量控制不严vBuffer中加有BSA v无双酶切用bufferv列出有效期v价格相当Fermentas vs Takara8/22/2024与竞争对手的比较vLO 测试 达到PureExtreme:无其它活性的污染v内切酶种类第二多vISO9002 认证和质量控制 v列出有效期,通过实时监控保证100活性vFive Buffer Plus System,加有 BSAvY+/Tango,通用双酶切bufferv专注
10、于内切酶方面v价格优势v未经 LO测试v内切酶种类少v有认证v11种 buffers及 Multi-Core 4,不提供BSAv未提供双酶切的详细信息v非主要产品线v大幅度折扣Fermentas vs Promega8/22/2024与竞争对手的比较vLO 测试 达到PureExtreme:无其它活性的污染v内切酶种类第二多vISO9002 认证和质量控制 vFive Buffer Plus System,加有 BSAvY+/Tango,通用双酶切bufferv价格优势v未经 LO测试v有认证v非主要产品线v9种 buffers,不提供BSA v未提供双酶切的详细信息v大幅度折扣Ferment
11、as vs Invitrogen8/22/2024FastDigest Restriction Enzymes8/22/2024FastDigest 限制性内切酶vFastDigest5min digestion1l of enzyme37oC temperatureONE bufferFor ALL FastDigest enzymes超过超过70多种多种FastDigest酶酶数量快速增长数量快速增长8/22/2024产品特点v独特的产品线v酶切质粒DNA只需5 min at 37Cv特殊的形式:1l enzyme v无需换算酶切单位v通用Buffer,针对所有的酶切实验 v一种温度:37
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