印迹杂交.pptx
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1、LOGO印迹杂交分子杂交分子杂交分子杂交:在退火条件下,不同来源的DNA互补区形成双链,或DNA单链和RNA单链的互补区形成DNA-RNA杂合双链的过程。分子杂交广泛用于测定基因拷贝数、基因定位、确定生物的遗传进化关系。通常对天然或人工合成的DNA或RNA片段进行放射性同位素或荧光标记,做成探针,经杂交后,检测放射性同位素或荧光物质的位置,寻找与探针有互补关系的DNA或RNA。印迹技术印迹技术印迹技术印迹技术印迹技术是指将待测核酸分子结合到一定固相支持物上的方法。Southern印迹:将电泳分离的DNA片段转移到一定的固相支持物上的过程。Northern印迹:将RNA变性及电泳分离后,将其转移
2、到固相支持物上的过程。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。Western印迹:将经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品转移至到固相载体上的过程。S S S Southernouthernouthernouthern印迹印迹印迹印迹Southern印迹杂交:DNA片段经电泳分离后,从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,然后与探针杂交。被检对象为DNA,探针为DNA或RNA。其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按碱基互补的原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。Southern Southern 凝胶转凝胶转移杂交技术步骤移杂交技术步骤1.待测DNA样品
3、的制备、酶切2.待测DNA 样品的电泳分离:琼脂糖凝胶电泳3.凝胶中DNA的变性:碱变性4.Southern转膜(印迹)5.Southern杂交(预杂交、杂交、洗膜)6.杂交结果的检测(a)(b)(c)(d)(e)基因组基因组DNADNA限制片段限制片段硝酸纤维素滤膜硝酸纤维素滤膜同探针同源杂交的同探针同源杂交的基因基因DNA片段片段X光底片光底片(一)待测核酸样品的制备 1、裂解或破碎细胞 2、抽取纯化基因组DNA 3、限制酶消化DNA为大小不同的DNA片段(二)待测DNA样品的电泳分离 1、琼脂糖浓度:分离大片段用低浓度胶,分离小片段用高浓度胶 2、凝胶电泳:凝胶具有分子筛效应,大分子DN
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