细胞骨架的观察.pptx
《细胞骨架的观察.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《细胞骨架的观察.pptx(20页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室1.1.实验目的实验目的 熟悉免疫化学方法的原理及操作步骤。熟悉免疫化学方法的原理及操作步骤。掌握掌握考马斯亮蓝掌握掌握考马斯亮蓝R250R250染色法及观察细染色法及观察细胞内微丝的方法。胞内微丝的方法。掌握用间接免疫荧光法显示细胞内微管的掌握用间接免疫荧光法显示细胞内微管的方法。方法。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室2.2.实验原理实验原理2.1 2.1 免疫组织化学技术免疫组织化学技术 2.2 2.2 细胞骨架的观察细胞骨架的观察 生物科学与工程系细胞生物学实验
2、教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室2.1 2.1 免疫组织化学技术免疫组织化学技术 免疫组织化学免疫组织化学免疫组织化学免疫组织化学(Immunochistochemistry)(Immunochistochemistry)(Immunochistochemistry)(Immunochistochemistry)是利用免疫学抗原抗体反应是利用免疫学抗原抗体反应是利用免疫学抗原抗体反应是利用免疫学抗原抗体反应的原理,用带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体的原理,用带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体的原理,用带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过
3、抗原抗体的原理,用带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对组织细胞内特定抗原进行定性、定位反应和组织化学的呈色反应,对组织细胞内特定抗原进行定性、定位反应和组织化学的呈色反应,对组织细胞内特定抗原进行定性、定位反应和组织化学的呈色反应,对组织细胞内特定抗原进行定性、定位和定量研究的一项新技术,又称免疫细胞化学和定量研究的一项新技术,又称免疫细胞化学和定量研究的一项新技术,又称免疫细胞化学和定量研究的一项新技术,又称免疫细胞化学(immunocytochemistry)(immunocytochemistry)(immunocytochemistry)(im
4、munocytochemistry)。免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高、定位准确和简便快速等免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高、定位准确和简便快速等免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高、定位准确和简便快速等免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高、定位准确和简便快速等优点,又能够同形态、功能及代谢等研究结合起来,用以研究其它技优点,又能够同形态、功能及代谢等研究结合起来,用以研究其它技优点,又能够同形态、功能及代谢等研究结合起来,用以研究其它技优点,又能够同形态、功能及代谢等研究结合起来,用以研究其它技术(如化学、生化、免疫及生理等)难以深入的领域。术(如化学、生化、免疫及生理等)难
5、以深入的领域。术(如化学、生化、免疫及生理等)难以深入的领域。术(如化学、生化、免疫及生理等)难以深入的领域。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室免疫组织化学的过程免疫组织化学的过程(1 1 1 1)抗原的提取与纯化;)抗原的提取与纯化;)抗原的提取与纯化;)抗原的提取与纯化;(2 2 2 2)免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体以及抗体)免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体以及抗体)免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体以及抗体)免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体以及抗体 的纯化;的纯化;的纯化;的纯化;(3 3 3 3)将显色剂与抗体结合形成标记抗体;)
6、将显色剂与抗体结合形成标记抗体;)将显色剂与抗体结合形成标记抗体;)将显色剂与抗体结合形成标记抗体;(4 4 4 4)标本的制备;)标本的制备;)标本的制备;)标本的制备;(5 5 5 5)免疫细胞化学反应以及呈色反应;)免疫细胞化学反应以及呈色反应;)免疫细胞化学反应以及呈色反应;)免疫细胞化学反应以及呈色反应;(6 6 6 6)观察结果。)观察结果。)观察结果。)观察结果。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室免疫荧光法免疫荧光法 免疫荧光法分为直接法和间接法。免疫荧光法分为直接法和间接法。免疫荧光法分为直接法和间接法。免疫荧光法分为直接法和间接法
7、。直接法:直接法:直接法:直接法:将荧光素(最常用异硫氰酸荧光素、将荧光素(最常用异硫氰酸荧光素、将荧光素(最常用异硫氰酸荧光素、将荧光素(最常用异硫氰酸荧光素、FITCFITCFITCFITC)标记)标记)标记)标记在特异性抗体上,使其直接与细胞上相应抗原结合,在荧在特异性抗体上,使其直接与细胞上相应抗原结合,在荧在特异性抗体上,使其直接与细胞上相应抗原结合,在荧在特异性抗体上,使其直接与细胞上相应抗原结合,在荧光显微镜下观察即可鉴定未知抗原。光显微镜下观察即可鉴定未知抗原。光显微镜下观察即可鉴定未知抗原。光显微镜下观察即可鉴定未知抗原。间接法:间接法:间接法:间接法:将荧光素标记在第二抗体
8、上,待一抗与细胞抗原将荧光素标记在第二抗体上,待一抗与细胞抗原将荧光素标记在第二抗体上,待一抗与细胞抗原将荧光素标记在第二抗体上,待一抗与细胞抗原结合后,再用标记了的二抗与一抗相接,从而显示未知抗结合后,再用标记了的二抗与一抗相接,从而显示未知抗结合后,再用标记了的二抗与一抗相接,从而显示未知抗结合后,再用标记了的二抗与一抗相接,从而显示未知抗原。间接免疫荧光法中具有原。间接免疫荧光法中具有原。间接免疫荧光法中具有原。间接免疫荧光法中具有2 2 2 2对抗原、抗体系统。对抗原、抗体系统。对抗原、抗体系统。对抗原、抗体系统。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教
9、学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室2.2 2.2 细胞骨架的观察细胞骨架的观察 细胞骨架细胞骨架细胞骨架细胞骨架(cytoskeleton)(cytoskeleton)(cytoskeleton)(cytoskeleton)是真核细胞细胞质中错综复杂的是真核细胞细胞质中错综复杂的是真核细胞细胞质中错综复杂的是真核细胞细胞质中错综复杂的蛋白质纤维网络,按纤维直径、组成成分和组装结构的不蛋白质纤维网络,按纤维直径、组成成分和组装结构的不蛋白质纤维网络,按纤维直径、组成成分和组装结构的不蛋白质纤维网络,按纤维直径、组成成分和组装结构的不同分为同分
10、为同分为同分为微丝微丝微丝微丝(microfilaments(microfilaments(microfilaments(microfilaments,MFMFMFMF,5 5 5 57nm)7nm)7nm)7nm)、微管、微管、微管、微管(microtubule(microtubule(microtubule(microtubule,MFMFMFMF,2020202025nm)25nm)25nm)25nm)和中等纤维和中等纤维和中等纤维和中等纤维(intermediate(intermediate(intermediate(intermediate filamentsfilamentsfil
11、amentsfilaments,IFIFIFIF,8 8 8 811nm)11nm)11nm)11nm)。目前观察细胞骨架的手段主要有电镜、间接免疫荧光技术、目前观察细胞骨架的手段主要有电镜、间接免疫荧光技术、目前观察细胞骨架的手段主要有电镜、间接免疫荧光技术、目前观察细胞骨架的手段主要有电镜、间接免疫荧光技术、酶标、组织化学等。酶标、组织化学等。酶标、组织化学等。酶标、组织化学等。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室微丝的观察微丝的观察考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法 考马斯亮蓝考马斯亮蓝考马斯亮蓝考马斯亮蓝R250R250R250R250是一种普通的蛋白
12、质染料,它可以使各种是一种普通的蛋白质染料,它可以使各种是一种普通的蛋白质染料,它可以使各种是一种普通的蛋白质染料,它可以使各种细胞骨架蛋白质着色,并非特异地显示微丝,但是由于有细胞骨架蛋白质着色,并非特异地显示微丝,但是由于有细胞骨架蛋白质着色,并非特异地显示微丝,但是由于有细胞骨架蛋白质着色,并非特异地显示微丝,但是由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定,例如微管;还些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定,例如微管;还些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定,例如微管;还些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定,例如微管;还有些类型的纤维太细,在光学显微镜下无法分辨,因此我有些类型的纤维太细,在
13、光学显微镜下无法分辨,因此我有些类型的纤维太细,在光学显微镜下无法分辨,因此我有些类型的纤维太细,在光学显微镜下无法分辨,因此我们看到的主要是微丝组成的张力纤维,直径约们看到的主要是微丝组成的张力纤维,直径约们看到的主要是微丝组成的张力纤维,直径约们看到的主要是微丝组成的张力纤维,直径约40nm40nm40nm40nm左右。左右。左右。左右。实验中用实验中用实验中用实验中用1 1 1 1Triton XTriton XTriton XTriton X100100100100可抽提掉胞质中除骨架蛋白可抽提掉胞质中除骨架蛋白可抽提掉胞质中除骨架蛋白可抽提掉胞质中除骨架蛋白以外的其他蛋白,能清晰地显
14、示微丝束。以外的其他蛋白,能清晰地显示微丝束。以外的其他蛋白,能清晰地显示微丝束。以外的其他蛋白,能清晰地显示微丝束。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室微丝的观察微丝的观察荧光法荧光法用荧光染料甲基罗丹明标记的鬼笔环用荧光染料甲基罗丹明标记的鬼笔环肽处理后,可在荧光显微镜下看到微肽处理后,可在荧光显微镜下看到微丝动态变化的图象。丝动态变化的图象。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室微管的观察微管的观察免疫组织化学法免疫组织化学法 用抗管蛋白的免疫血清用抗管蛋白的免疫血清用抗管蛋白的免疫血清用抗管蛋白的免疫
15、血清(一级抗体,例如兔抗管蛋白抗体一级抗体,例如兔抗管蛋白抗体一级抗体,例如兔抗管蛋白抗体一级抗体,例如兔抗管蛋白抗体)与体外培养细胞一起温育,该抗体将与胞质中的微管与体外培养细胞一起温育,该抗体将与胞质中的微管与体外培养细胞一起温育,该抗体将与胞质中的微管与体外培养细胞一起温育,该抗体将与胞质中的微管(抗抗抗抗原原原原)特异结合,然后再加荧光素标记的抗球蛋白抗体(二特异结合,然后再加荧光素标记的抗球蛋白抗体(二特异结合,然后再加荧光素标记的抗球蛋白抗体(二特异结合,然后再加荧光素标记的抗球蛋白抗体(二级抗体),例如异硫氰酸荧光素级抗体),例如异硫氰酸荧光素级抗体),例如异硫氰酸荧光素级抗体)
16、,例如异硫氰酸荧光素(FITC)(FITC)(FITC)(FITC)标记的羊抗兔抗体标记的羊抗兔抗体标记的羊抗兔抗体标记的羊抗兔抗体共同温育,该二级抗体与一级抗体结合,从而使微管间接共同温育,该二级抗体与一级抗体结合,从而使微管间接共同温育,该二级抗体与一级抗体结合,从而使微管间接共同温育,该二级抗体与一级抗体结合,从而使微管间接地标上荧光素。置荧光显微镜下用一定波长激发光照射即地标上荧光素。置荧光显微镜下用一定波长激发光照射即地标上荧光素。置荧光显微镜下用一定波长激发光照射即地标上荧光素。置荧光显微镜下用一定波长激发光照射即由荧光所在显示出微管的形态和分布。由荧光所在显示出微管的形态和分布。
17、由荧光所在显示出微管的形态和分布。由荧光所在显示出微管的形态和分布。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室2.2.实验材料实验材料 、用品、用品 实验材料:实验材料:实验材料:实验材料:培养的培养的培养的培养的HelaHelaHelaHela细胞细胞细胞细胞 实验用品:实验用品:实验用品:实验用品:实实实实验验验验器器器器材材材材:光光光光学学学学显显显显微微微微镜镜镜镜,荧荧荧荧光光光光显显显显微微微微镜镜镜镜,冰冰冰冰箱箱箱箱(20202020及及及及4)4)4)4),小小小小型型型型振振振振荡荡荡荡器器器器,温温温温箱箱箱箱,细细细细胞胞胞胞培培
18、培培养养养养设设设设备备备备;平平平平皿皿皿皿,直直直直径径径径30mm30mm30mm30mm小小小小染染染染缸缸缸缸,载载载载玻玻玻玻片片片片,盖玻片,铝盒等。盖玻片,铝盒等。盖玻片,铝盒等。盖玻片,铝盒等。主要试剂主要试剂主要试剂主要试剂 M M M M缓冲液,缓冲液,缓冲液,缓冲液,1%Triton X1%Triton X1%Triton X1%Triton X100100100100(用(用(用(用M M M M缓冲液配制),缓冲液配制),缓冲液配制),缓冲液配制),0.2%0.2%0.2%0.2%考马考马考马考马斯亮蓝斯亮蓝斯亮蓝斯亮蓝R250R250R250R250,3.0%3.
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 细胞骨架 观察
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【丰****】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【丰****】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。