脱毒马铃薯组培室的基本情况.pptx
《脱毒马铃薯组培室的基本情况.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《脱毒马铃薯组培室的基本情况.pptx(96页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、组织培养:又叫离体培养组织培养:又叫离体培养,利用利用细胞全能性,从植物体内分离细胞全能性,从植物体内分离出符合需要的组织,经过培养出符合需要的组织,经过培养以获得再生的完整植株。以获得再生的完整植株。为什么马铃薯要脱毒:为什么马铃薯要脱毒:马铃薯块茎容易积累病毒,用马铃薯块茎容易积累病毒,用带病毒的块茎当种薯,产量逐带病毒的块茎当种薯,产量逐年下降,品质降低。容易染病年下降,品质降低。容易染病。一一.基本情况基本情况1 1 实验室设置及仪器设备实验室设置及仪器设备2 2 实验基本操作实验基本操作3 3 培养基的成分及其配制培养基的成分及其配制1 1 实验室设置及仪器设备实验室设置及仪器设备
2、实验室是进行组培研究的主要场所,须实验室是进行组培研究的主要场所,须满足洗涤、培养基制备、无菌操作、培满足洗涤、培养基制备、无菌操作、培养、鉴定等工作。养、鉴定等工作。1 1基本实验室基本实验室1.1 1.1 洗涤间洗涤间 根据生产量的大小决定其大小,一般面积控根据生产量的大小决定其大小,一般面积控制在制在30-50m30-50m2 2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽,用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置槽,用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2 2个水槽,用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大,个水槽,用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大,可以购置一台洗瓶机。可以
3、购置一台洗瓶机。地面应耐湿并排水良好。地面应耐湿并排水良好。面积面积60平方米左右,配备的主要仪器设备有平方米左右,配备的主要仪器设备有:冰:冰箱、天平、微波炉、箱、天平、微波炉、pH计、培养基灌装器、药品计、培养基灌装器、药品柜、器械柜、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、柜、器械柜、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积以体积200-250L为宜,用于储存培养基母液、激为宜,用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。料。1.2培养基配制间培养基
4、配制间配备高压灭菌锅、灭菌锅的选择应根据不同的配备高压灭菌锅、灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅,较大的实验室可选用型的医用手提式高压灭菌锅,较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。室可选用大型的卧式灭菌锅。小的小的10万,大的万,大的45万。万。1.3灭菌室灭菌室无菌操作室又叫接种室。通常由里外两间组成,外间无菌操作室又叫接种室。通常由里外两间组成,外间是缓冲间,用于准备工作,防止污染的作用。缓冲间是
5、缓冲间,用于准备工作,防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有洗手池、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌内应该设有洗手池、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修,工作人员进操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修,工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。室内应配有超净工作台,紫外灯、解剖镜、各种室内应配有超净工作台,紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。接种器械等。
6、1.4无菌操作室无菌操作室培养室应配有培养架、光照培养箱、自动控时器、臭氧培养室应配有培养架、光照培养箱、自动控时器、臭氧机等。日光灯一般用机等。日光灯一般用40W,固定在培养架的侧面或搁板,固定在培养架的侧面或搁板的下面,每层有两支日光灯,距离在的下面,每层有两支日光灯,距离在20cm,光照强度,光照强度为为2000-3000lx。配备中央无菌过滤空调控温,消毒。配备中央无菌过滤空调控温,消毒。1.5培养室培养室(一)、灭菌工作是极其重要的。(一)、灭菌工作是极其重要的。首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴:首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴:有菌:有菌:凡是暴露在空气中的物体,至少其表面
7、都是有菌的。凡是暴露在空气中的物体,至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面,未处理的工具和手等。如植物的表面、超净工作台的台面,未处理的工具和手等。无菌无菌:高压高温处理(工具、器皿、培养基等):高压高温处理(工具、器皿、培养基等)物理或化学处理;物理或化学处理;火烤后的物体;火烤后的物体;2 2 实验基本操作实验基本操作1 1、物理方法物理方法:干热、湿热、过滤(:干热、湿热、过滤(0.250.25微微米)紫外灯、超声波等。米)紫外灯、超声波等。2 2、化学方法化学方法:使用灭菌剂或抗菌素,如酒:使用灭菌剂或抗菌素,如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、精、次氯酸钠、升汞、
8、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等双氧水、福尔马林等 (二)、灭菌的方法(二)、灭菌的方法干热灭菌干热灭菌 玻璃器皿、器械玻璃器皿、器械 湿热灭菌湿热灭菌 培养基、蒸馏水、器械、棉塞等培养基、蒸馏水、器械、棉塞等熏蒸灭菌熏蒸灭菌 接种室、培养室接种室、培养室过滤灭菌过滤灭菌 液体培养基、蒸馏水液体培养基、蒸馏水药剂灭菌药剂灭菌 培养材料培养材料烧灼灭菌烧灼灭菌 器械、瓶口、棉塞、包头纸器械、瓶口、棉塞、包头纸辐射灭菌辐射灭菌 接种室。培养间接种室。培养间各种灭菌方法及其使用范围各种灭菌方法及其使用范围适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法:法:150
9、150、40min40min或或120 120、120min120min,如,如果发现芽孢杆菌,果发现芽孢杆菌,160 160、9090120min120min(1 1)干热灭菌)干热灭菌适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。棉塞、纸等。121 121 维持维持202030min30min注意点:加足水、排尽气、气压降到注意点:加足水、排尽气、气压降到0 0时,时,才能开盖才能开盖(2 2)湿热灭菌)湿热灭菌 培养基的灭菌一般用高压高温处理,但如果培培养基的灭菌一般用高压高温处理,但如果培养基中某些成分遇到高温分解(如某些生长调节剂养基中某些成
10、分遇到高温分解(如某些生长调节剂GA3GA3、玉米素等),就需要过滤灭菌。另外酶、血、玉米素等),就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌清等也需要过滤灭菌 灭菌方法:将生长调节剂或酶配成一定浓度,灭菌方法:将生长调节剂或酶配成一定浓度,用注射器注入微孔滤膜虑,滤膜孔径用注射器注入微孔滤膜虑,滤膜孔径0.220.220.450.45微微米。制培养基时,现将培养基高压灭菌,待降至米。制培养基时,现将培养基高压灭菌,待降至5050左右时,加入适量的激素,然后分装。左右时,加入适量的激素,然后分装。(3 3)过滤灭菌)过滤灭菌主要是利用紫外灯进行照射,适合实验室主要是利用紫外灯进行照射,适合实验
11、室空气、操作台等,灭菌时间空气、操作台等,灭菌时间202030min30min。注意:关灯后注意:关灯后5min5min后再进入。超净工作台后再进入。超净工作台关灯后要打开风机。关灯后要打开风机。(4 4)射线灭菌)射线灭菌用火焰灼烧达到灭菌目的,适用于用火焰灼烧达到灭菌目的,适用于接种器皿的灭菌。接种器皿的灭菌。(5 5)火焰灼烧灭菌)火焰灼烧灭菌适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。几种常用消毒剂的效果比较几种常用消毒剂的效果比较消消 毒毒 剂剂使用浓度使用浓度(%)(%)消毒时间消毒时间(min.)(min.)效效 果果残液去除残液去除难易难易乙
12、醇乙醇75750.1-30.1-3好好易易新洁尔灭新洁尔灭101020205 53030好好易易氯化汞氯化汞0.10.11 12 21515最好最好最难最难过氧化氢过氧化氢101012125 51515较好较好最易最易抗菌素抗菌素4 450mgl50mgl-1-130306060较好较好较难较难次氯酸钙次氯酸钙/纳纳9 9 10105 53030好好易易(6 6)消毒剂)消毒剂长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。方法:长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。方法:甲甲醛、高锰酸钾熏蒸醛、高锰酸钾熏蒸。甲醛的用量通常按每立方米空间甲醛的用量通常按每立方米空间2-62-6毫升计算,毫升计算,高锰酸钾的
13、用量是甲醛的一半。室内准备妥当后,高锰酸钾的用量是甲醛的一半。室内准备妥当后,把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内(最好在碗或最好在碗或杯下面铺一张报纸,以利清洗杯下面铺一张报纸,以利清洗),然后将甲醛也倒,然后将甲醛也倒入碗或杯内,立即出屋关门。几秒钟后,甲醛溶液入碗或杯内,立即出屋关门。几秒钟后,甲醛溶液即沸腾挥发。高锰酸钾是一种氧化剂,当它与一部即沸腾挥发。高锰酸钾是一种氧化剂,当它与一部分甲醛作用时,由氧化反应产生的热可使其余的甲分甲醛作用时,由氧化反应产生的热可使其余的甲醛挥发为气体。醛挥发为气体。熏蒸灭菌熏蒸灭菌甲醛熏蒸接种室应至少在使用前甲醛熏蒸接种室
14、应至少在使用前2424小时进行,熏蒸后小时进行,熏蒸后密闭保持密闭保持4 4小时以上再进入室内工作。甲醛对人的眼、小时以上再进入室内工作。甲醛对人的眼、鼻有强烈刺激作用。因此,可在使用前用氨进行中和。鼻有强烈刺激作用。因此,可在使用前用氨进行中和。取与甲醛等量的氨水,倒在另一个烧杯里,迅速放入取与甲醛等量的氨水,倒在另一个烧杯里,迅速放入熏蒸室内,使甲醛和氨水发生中和反应,以消除甲醛熏蒸室内,使甲醛和氨水发生中和反应,以消除甲醛味,减少对人体的刺激作用。使用氨水应在工作前味,减少对人体的刺激作用。使用氨水应在工作前2 2小时进行。小时进行。对有材料的培养室,也可以采用乙二醇加热熏蒸对有材料的培
15、养室,也可以采用乙二醇加热熏蒸按需消毒空间每立方米用于苍术片按需消毒空间每立方米用于苍术片(中药店中药店有售有售)1克计算,将苍术浸泡于克计算,将苍术浸泡于95酒精内,酒精内,酒精用量以淹没苍术为准,密封浸泡酒精用量以淹没苍术为准,密封浸泡24小小时待用。消毒时将浸泡好的苍术置于时待用。消毒时将浸泡好的苍术置于1个或个或2个耐高温容器内,点燃熏蒸个耐高温容器内,点燃熏蒸2小时,每周小时,每周1次。需要注意的是,开始点燃时有次。需要注意的是,开始点燃时有5厘米厘米左右高的火焰,约持续左右高的火焰,约持续2分钟。因此,需待分钟。因此,需待火焰灭后,观有淡淡的烟雾上升后室内方火焰灭后,观有淡淡的烟雾
16、上升后室内方可离人可离人人为因素(工作人员本身):工作服、帽、口罩、酒精擦手。人为因素(工作人员本身):工作服、帽、口罩、酒精擦手。物品因素物品因素器器皿皿和和用用具具培养皿:洗培养皿:洗热压热压 玻璃器皿:洗玻璃器皿:洗干热(干热箱)或晾干干热(干热箱)或晾干 接种用具:用接种用具:用CCLCCL4 4布擦布擦湿布擦湿布擦 泡泡75%95%75%95%酒精酒精烧烧培养基:湿热培养基:湿热培培养养材材料料外部细菌:用水冲洗外部细菌:用水冲洗化学药剂处理化学药剂处理 内部细菌内部细菌 茎尖培养茎尖培养 加抗生素:青霉素、利福平加抗生素:青霉素、利福平操作的空气:洗刷地板操作的空气:洗刷地板95%
17、酒精擦超净工作台酒精擦超净工作台 用化学试剂薰蒸用化学试剂薰蒸污染来源污染来源三、无菌操作技术三、无菌操作技术1 1、实验器具和材料的准备、实验器具和材料的准备2 2、用、用75%75%的酒精擦拭超净工作台,然后室内及超的酒精擦拭超净工作台,然后室内及超净工作台用紫外灯杀菌净工作台用紫外灯杀菌20min-30min20min-30min。注意:台面。注意:台面上的用品不要放置太多或重叠放置,以免降低灭上的用品不要放置太多或重叠放置,以免降低灭菌效果。菌效果。3 3、关紫外灯、打开风机,过、关紫外灯、打开风机,过5-10min5-10min进入缓冲间,进入缓冲间,以以75%75%洗手和手臂,更换
18、无菌服、帽子和口罩。进洗手和手臂,更换无菌服、帽子和口罩。进入接种室。(注:没有特别情况,尽量不要下工入接种室。(注:没有特别情况,尽量不要下工作台)作台)4 4、用、用70707575的酒精拭擦台面并消毒双手。试验的酒精拭擦台面并消毒双手。试验用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯,将金属器械用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯,将金属器械在其火焰上灼烧,冷却待用。在其火焰上灼烧,冷却待用。注意:所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。金注意:所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。金属器械不能过度灼烧,以防退火。移液管不能灼烧,属器械不能过度灼烧,以防退火。移液管不能灼烧,培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰
19、不能时间太培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰不能时间太长。长。5 5、打开培养瓶,瓶口在灯焰处旋转灼烧,用镊、打开培养瓶,瓶口在灯焰处旋转灼烧,用镊子将培养材料置于培养基上,灼烧镊子放回,子将培养材料置于培养基上,灼烧镊子放回,灼烧瓶口,盖上瓶塞。灼烧瓶口,盖上瓶塞。注意(注意(1 1)进行培养时,动作要准确敏捷,但又不必)进行培养时,动作要准确敏捷,但又不必太快,以防空气流动,增加污染机会。(太快,以防空气流动,增加污染机会。(2 2)不能用)不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒或手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒或取备品更换。取备品更换。(3 3)为拿取方便,工作台
20、面上的用品)为拿取方便,工作台面上的用品要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西放置在要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西放置在右侧,左手用品在左侧,酒精灯置于中央。(右侧,左手用品在左侧,酒精灯置于中央。(4 4)工)工作由始至终要保持一定顺序性,组织或细胞在未做处作由始至终要保持一定顺序性,组织或细胞在未做处理之前,勿过早暴露在空气中。同样,培养液在未用理之前,勿过早暴露在空气中。同样,培养液在未用前,不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用,应立前,不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用,应立即封闭瓶口直立可增加落菌机会。即封闭瓶口直立可增加落菌机会。接种时在近火焰处打开瓶口,使瓶倾斜,接
21、种时在近火焰处打开瓶口,使瓶倾斜,以免空气中微生物落入瓶中以免空气中微生物落入瓶中正正确确错错误误整个接种操作应在近火焰处进行,且动作要整个接种操作应在近火焰处进行,且动作要迅速迅速正正确确错错误误接种过程中尽可能达到悬空要求防止操作带来的污染防止操作带来的污染正正确确错错误误接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口正正确确错错误误瓶盖朝上放,接种完毕后立即盖好瓶口正正确确错错误误接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生种子和分生组织:培养时通常将其贴放在培养基表种子和分生组织:培养时通常将其贴放在培养基表面,而不是插到培养基内部,以免供氧不足面,而不是插到培养基内
22、部,以免供氧不足正正确确错错误误接种茎段:注意形态学下端插入培养基内,而形接种茎段:注意形态学下端插入培养基内,而形态学上端露于空气中态学上端露于空气中正正确确错错误误3.3.培养基的成分及其配制培养基的成分及其配制一、培养基的成分及其作用一、培养基的成分及其作用(一)(一)无机营养物质无机营养物质 培养的植物组织、器官、细胞或者原生质体需培养的植物组织、器官、细胞或者原生质体需要连续的供给某些无机化学物质,除了要连续的供给某些无机化学物质,除了C C、H H、O O之外,之外,需要量比较多的元素叫大量元素,需要量比较少的需要量比较多的元素叫大量元素,需要量比较少的元素叫微量营养元素。元素叫微
23、量营养元素。培养基的大量元素使用量一般在每升几十至几千培养基的大量元素使用量一般在每升几十至几千毫克。大量元素包括毫克。大量元素包括N,P,K,Ca,Mg,SN,P,K,Ca,Mg,S。培养基中加入量最多的是培养基中加入量最多的是N N,N N一般以硝酸盐或氨一般以硝酸盐或氨盐,或者两者结合的盐提供盐,或者两者结合的盐提供大量元素大量元素微量元素的用量一般每升不高于几十毫克。植物所微量元素的用量一般每升不高于几十毫克。植物所需的微量元素有需的微量元素有FeFe、CuCu、ZnZn、B B、MoMo、MnMn、CoCo,ClCl其他一些化学药品常带有微量元素杂质,因此要注其他一些化学药品常带有微
24、量元素杂质,因此要注意微量元素的用量不能过多,多会引起生长抑制等意微量元素的用量不能过多,多会引起生长抑制等毒害现象。毒害现象。微量元素微量元素(二)(二).有机化合物有机化合物有机物质包括维生素类物质、氨基酸类物质、糖类物有机物质包括维生素类物质、氨基酸类物质、糖类物质和一些其它的有机添加物质和一些其它的有机添加物1、维生素类物质、维生素类物质 维生素类物质在酶系统中有催化功能。维生素类物质在酶系统中有催化功能。硫胺素(硫胺素(VB1)与愈伤组织的产生和生活力有关,可)与愈伤组织的产生和生活力有关,可能是所有植物组织培养初期需要的维生素,而盐酸能是所有植物组织培养初期需要的维生素,而盐酸吡哆
25、醇(吡哆醇(VB6)促进根的生长,烟酸()促进根的生长,烟酸(VB3,又称,又称维生素维生素PP)促进胚的发育。有的配方中还使用了泛)促进胚的发育。有的配方中还使用了泛酸钙(酸钙(VB5)、生物素()、生物素(VH)、钴胺素()、钴胺素(VB12)、)、叶酸(叶酸(VBc),),Vc等。等。2、AA类物质类物质绝大多数绝大多数AA适量时对培养效果都有正象效应。常用适量时对培养效果都有正象效应。常用的有的有Gly、Asn、Gln。在植物组织培养中,有时也。在植物组织培养中,有时也用水解乳蛋白和水解酪蛋白。用水解乳蛋白和水解酪蛋白。3 3、糖类、糖类糖在培养基的作用:糖在培养基的作用:1 1)、为
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 脱毒 马铃薯 组培室 基本情况
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【人****来】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【人****来】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。