NDM基因的检测与确认.pptx
《NDM基因的检测与确认.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《NDM基因的检测与确认.pptx(14页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、ICDC,China CDCNDM-1NDM-1简介简介v一个新发现的耐药基因,全长一个新发现的耐药基因,全长826bpv编码编码1型新德里金属型新德里金属-内酰胺酶内酰胺酶 造细菌成对碳青酶烯类药物耐药造细菌成对碳青酶烯类药物耐药v位于质粒上位于质粒上 最初发现在肺炎克雷伯杆质粒最初发现在肺炎克雷伯杆质粒pKpANDM-1上上 Genbank FN396876(2009.11.24)v具有可移动性具有可移动性 可在不同种属细菌间转移可在不同种属细菌间转移 革兰阴性:肠杆菌科、不动杆菌、假单胞菌革兰阴性:肠杆菌科、不动杆菌、假单胞菌 革兰阳性:?革兰阳性:?E.coli Genbank AB5
2、71289(2010.07.10)ICDC,China CDCNDM-1NDM-1的基因检测的基因检测1.PCR检测检测2.序列测定序列测定最终确认最终确认v检测对象:检测对象:已经过表型筛检的菌株进行已经过表型筛检的菌株进行NDM-1基因确认基因确认对大批菌株直接进行筛检对大批菌株直接进行筛检对标本的检测对标本的检测v高通量、快速、准确高通量、快速、准确ICDC,China CDCPCRPCR检测方法检测方法模板制备模板制备v模板制备:菌株、标本模板制备:菌株、标本1.菌株菌株(1)G-细菌:细菌:a.水煮模板:新鲜培养物悬浊于水煮模板:新鲜培养物悬浊于100-200l纯水纯水 沸水浴沸水浴
3、10min以上以上 8000rpm以上离心以上离心5min 吸取上清,吸取上清,-20 保存保存 b.试剂盒提取基因组试剂盒提取基因组DNA(说明书)(说明书)ICDC,China CDCPCRPCR检测方法检测方法模板制备模板制备1.菌株菌株(2)G+细菌:细菌:a.试剂盒提取基因组试剂盒提取基因组DNA(说明书)(说明书)溶菌酶充分作用溶菌酶充分作用 b.水煮模板:新鲜培养物悬浊于水煮模板:新鲜培养物悬浊于100-200 l纯水纯水 低温反复冻融(低温反复冻融(-40 以下或液氮)以下或液氮)沸水浴沸水浴10min以上以上 8000rpm以上离心以上离心5min 吸取上清,吸取上清,-20
4、 保存保存2.标本:根据标本类型不同选择相应的试剂盒标本:根据标本类型不同选择相应的试剂盒ICDC,China CDCPCRPCR检测检测引物选择引物选择1.引物选择:引物选择:v扩增片段位于扩增片段位于CDS正向的正向的191-482位置(反向位置(反向345-636位置)位置)483-769位置(反向位置(反向58-344位置)位置)v引物特异性较好,理论上无非特异扩增片段引物特异性较好,理论上无非特异扩增片段引物引物引物序列(引物序列(5 3)产物大小(产物大小(bp)退火温度退火温度()引物引物117U-191CAGCACACTTCCTATCTC2925517L-465CCGCAACC
5、ATCCCCTCTT引物引物2F-58GGCGGAATGGCTCATCACGA28660R-344CGCAACACAGCCTGACTTTCICDC,China CDCPCRPCR检测检测PCRPCR体系体系v引物合成稀释引物合成稀释冻干粉末,开启前冻干粉末,开启前10000rpm离心离心5min小心开盖,防止粉末喷出小心开盖,防止粉末喷出1.0OD+268 l纯水,充分震荡混匀纯水,充分震荡混匀,浓,浓度度20 M(20 mol/L)v20 l体系(右图)体系(右图)若使用含有若使用含有Mg2+的的10buffer的加入的加入量同上表,量同上表,MgCl2体积用水补齐体积用水补齐 PCR Pr
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- NDM 基因 检测 确认
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【丰****】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【丰****】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。