免疫组化抗原修复简介.pptx
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1、l为何要进行抗原修复l抗原修复的种类l抗原修复的原理l抗原修复的操作l抗原操作的应用为何要进行抗原修复为何要进行抗原修复l常规的石蜡切片的组织要经过福尔马林固定和石蜡包埋,虽然上述过程能良好的保存标本在光镜下的形态,但是会不同程度地破坏组织的抗原,降低组织的抗原与抗体的免疫反应率。抗原修复的种类抗原修复的种类l热修复(HIER)l蛋白酶修复(PIER)l双修复(特殊抗原和双染)l不修复抗原修复的原理抗原修复的原理l抗原修复目前常用的有热修复(HIER),蛋白酶修复(PIER)和不修复。不同的修复的原理不同。l热修复的原理l蛋白酶修复原理热修复热修复(HIER)的原理的原理l“石说”:固定通过改
2、变蛋白结构降低免疫反应性,AR逆转大部分福尔马林导致的蛋白修饰,冷却后,会重建“近天然”的结构,免疫反应的恢复是通过蛋白表位的复性。热修复的特点热修复的特点l易于施行l易于标准化蛋白酶修复蛋白酶修复(PIER)原理原理l蛋白酶的消化通过破坏福尔马林造成的蛋白交联,实现抗原的修复。l该方法的缺点是:破坏组织的完整性,会破坏抗原,而且酶的浓度,反应时间,反应温度造成很大的差异,标准化难度较大。抗原修复的操作抗原修复的操作l热修复(HIER)l蛋白酶修复(PIER)l双重修复热修复(热修复(HIER)l高压修复l煮沸法修复l微波修复l水浴加热高压修复高压修复l切片先脱蜡水化l将修复液注入高压锅,将液
3、体煮沸l放入切片(甩开水分)l盖上盖子,等喷气,计时1.52分钟(800W1000W)l冷却,冲洗玻片上的修复液 1.5-2min 10min高压锅直接修复高压锅隔水间接修复煮沸法修复煮沸法修复l将修复液注入不锈钢锅中l煮沸后,加入切片(甩干水分)l用保温档,处理20分钟左右l冷却,冲洗玻片上的修复液蛋白酶修复(蛋白酶修复(PIER)l切片脱蜡水化l切片上滴加酶,放入孵育盒,处理一定时间l时间到,取出切片,冲洗。双重修复双重修复l脱蜡水化后,对切片进行胰酶消化l然后,对切片进行热修复抗原操作的应用抗原操作的应用l时间l温度l冷却l细节MOC31(上皮糖蛋白-2,EGP-2)EGFR(CLONE:EGFR.113)HBcAg(兔多抗兔多抗)C/HNO结论结论l正确的修复对抗体的表达十分重要l抗原修复是一个个性化的方法,由抗体的克隆号,病理标本的类型等决定。l合适的修复方法才能获得最佳的修复效果。谢谢!谢谢!
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