生物化学经典实验酵母RNA的提取与鉴定省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx
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1、酵母RNA提取与判定 第1页实验目实验目 v掌握稀碱法分离酵母掌握稀碱法分离酵母RNA原理与操作过原理与操作过程。程。v了解了解RNA组分并掌握定性判定详细方法。组分并掌握定性判定详细方法。第2页试验原理试验原理 v因为因为因为因为RNARNA起源和种类很多,因而提取制备方法也起源和种类很多,因而提取制备方法也起源和种类很多,因而提取制备方法也起源和种类很多,因而提取制备方法也各异,普通有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。各异,普通有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。各异,普通有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。各异,普通有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。苯酚法是试验室最惯用。组织匀浆用苯酚处理并苯酚法是试验室最惯
2、用。组织匀浆用苯酚处理并苯酚法是试验室最惯用。组织匀浆用苯酚处理并苯酚法是试验室最惯用。组织匀浆用苯酚处理并离心后,离心后,离心后,离心后,RNARNA即溶于上层被苯酚饱和水相中,即溶于上层被苯酚饱和水相中,即溶于上层被苯酚饱和水相中,即溶于上层被苯酚饱和水相中,DNADNA和蛋白质则留在苯酚层中,向水层加入乙醇和蛋白质则留在苯酚层中,向水层加入乙醇和蛋白质则留在苯酚层中,向水层加入乙醇和蛋白质则留在苯酚层中,向水层加入乙醇后,后,后,后,RNARNA即以白色絮状沉淀析出。即以白色絮状沉淀析出。即以白色絮状沉淀析出。即以白色絮状沉淀析出。此法能很好地除去此法能很好地除去此法能很好地除去此法能很
3、好地除去DNADNA和蛋白质,提取和蛋白质,提取和蛋白质,提取和蛋白质,提取RNARNA含有含有含有含有生物活性。生物活性。生物活性。生物活性。第3页试验原理试验原理 v酵母细胞富含核酸,且核酸主要是酵母细胞富含核酸,且核酸主要是酵母细胞富含核酸,且核酸主要是酵母细胞富含核酸,且核酸主要是RNARNA,含量为,含量为,含量为,含量为干菌体干菌体干菌体干菌体2.67%10.0%2.67%10.0%,而,而,而,而DNADNA含量较少,仅为含量较少,仅为含量较少,仅为含量较少,仅为0.03%0.516%,0.03%0.516%,为此提取为此提取为此提取为此提取RNARNA多以酵母为原料。多以酵母为
4、原料。多以酵母为原料。多以酵母为原料。v工业上制备工业上制备工业上制备工业上制备RNARNA多项选择取低成本、适于大规模多项选择取低成本、适于大规模多项选择取低成本、适于大规模多项选择取低成本、适于大规模操作稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取核酸均操作稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取核酸均操作稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取核酸均操作稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取核酸均为变性为变性为变性为变性RNARNA,主要用作制备单核苷酸原料,其工,主要用作制备单核苷酸原料,其工,主要用作制备单核苷酸原料,其工,主要用作制备单核苷酸原料,其工艺比较简单。艺比较简单。艺比较简单。艺比较简单。第4页稀碱法是用
5、氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解,稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解,稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解,稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后上清液用乙然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后上清液用乙然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后上清液用乙然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后上清液用乙醇沉淀醇沉淀醇沉淀醇沉淀RNARNA或调或调或调或调pH2.5pH2.5利用等电点沉淀。提取利用等电点沉淀。提取利用等电点沉淀。提取利用等电点沉淀。提取RNARNA有不一样程度降解。有不一样程度降解。有不一样程度降解。有不一样程度降解。浓盐法是用高浓度盐溶液处理,同时加热,
6、以改浓盐法是用高浓度盐溶液处理,同时加热,以改浓盐法是用高浓度盐溶液处理,同时加热,以改浓盐法是用高浓度盐溶液处理,同时加热,以改变细胞壁通透性,使核酸从细胞内释放出来。变细胞壁通透性,使核酸从细胞内释放出来。变细胞壁通透性,使核酸从细胞内释放出来。变细胞壁通透性,使核酸从细胞内释放出来。试验原理试验原理 第5页vRNARNA含有核糖、嘌呤碱含有核糖、嘌呤碱含有核糖、嘌呤碱含有核糖、嘌呤碱/嘧啶碱和磷酸各组分。嘧啶碱和磷酸各组分。嘧啶碱和磷酸各组分。嘧啶碱和磷酸各组分。RNARNA在酸性条件下,即发生降解,形成核糖继而在酸性条件下,即发生降解,形成核糖继而在酸性条件下,即发生降解,形成核糖继而
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