动物的克隆浙科版省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx
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1、第1页1.1.动物细胞全能性特点?动物细胞全能性特点?伴随细胞分化程度提升而全能性逐步受到限制,伴随细胞分化程度提升而全能性逐步受到限制,分化潜能变窄。分化潜能变窄。细胞核仍含有全能性细胞核仍含有全能性。2.2.离体植物细胞和组织能够经过组织培养技术克隆成离体植物细胞和组织能够经过组织培养技术克隆成离体植物细胞和组织能够经过组织培养技术克隆成离体植物细胞和组织能够经过组织培养技术克隆成完整植株,那么动物细胞和组织能否也进行一样克完整植株,那么动物细胞和组织能否也进行一样克完整植株,那么动物细胞和组织能否也进行一样克完整植株,那么动物细胞和组织能否也进行一样克隆?隆?隆?隆?不能,动物细胞全能性
2、受到限制,到现在为止将不能,动物细胞全能性受到限制,到现在为止将离体动物细胞直接克隆成个体还很困难,所以离体动物细胞直接克隆成个体还很困难,所以动物动物细胞和组织不能进行细胞和组织不能进行与植物一样与植物一样个体克隆个体克隆。第2页第3页机械消化或者胰酶消化机械消化或者胰酶消化一、动物细胞、组织培养一、动物细胞、组织培养1.什么方法取得离体单个动物细胞?什么方法取得离体单个动物细胞?2.离体动物细胞能否正常生活、表现出正常生命离体动物细胞能否正常生活、表现出正常生命活动?活动?能能,在人工控制培养条件下,生长、分裂乃至接,在人工控制培养条件下,生长、分裂乃至接触抑制和衰老、死亡等,并展现一定组
3、织特征。触抑制和衰老、死亡等,并展现一定组织特征。3.是不是全部动物细胞都能在离体情况下表现出生是不是全部动物细胞都能在离体情况下表现出生命活动?命活动?(1)幼嫩细胞(如:幼嫩细胞(如:动物胚胎或幼龄动物组织、器官动物胚胎或幼龄动物组织、器官)(2)含全部营养物质液体培养基和适宜环境条件。含全部营养物质液体培养基和适宜环境条件。(胰蛋白酶)(胰蛋白酶)第4页动物细胞培养:动物细胞培养:体外培养分散后体外培养分散后体外培养分散后体外培养分散后单个细胞,单个细胞,单个细胞,单个细胞,使使使使其得以生存,并保持生命活动现象。其得以生存,并保持生命活动现象。其得以生存,并保持生命活动现象。其得以生存
4、,并保持生命活动现象。像体内一样像体内一样像体内一样像体内一样展现一定组织特征。展现一定组织特征。展现一定组织特征。展现一定组织特征。动物组织培养:动物组织培养:体外培养体外培养体外培养体外培养动物组织,动物组织,动物组织,动物组织,使其维持使其维持使其维持使其维持生活状态或生长特征。生活状态或生长特征。生活状态或生长特征。生活状态或生长特征。能够伴随能够伴随能够伴随能够伴随组织分化组织分化组织分化组织分化,但最,但最,但最,但最终成为细胞培养。终成为细胞培养。终成为细胞培养。终成为细胞培养。动物器官培养:动物器官培养:体外培养体外培养体外培养体外培养动物器官原基、部分动物器官原基、部分动物器
5、官原基、部分动物器官原基、部分或整个器官,或整个器官,或整个器官,或整个器官,使之得以保留、生长。使之得以保留、生长。使之得以保留、生长。使之得以保留、生长。保持器官结保持器官结保持器官结保持器官结构、功效及分化能力。构、功效及分化能力。构、功效及分化能力。构、功效及分化能力。组织培养组织培养第5页7.19517.1951年,海拉细胞系建成。年,海拉细胞系建成。6.19506.1950年,人工培养液年,人工培养液“199199”研制成功研制成功1.18851.1885年,鸡神经板在生理盐水中培养成活。年,鸡神经板在生理盐水中培养成活。2.19,皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月,且观察到细胞
6、分裂。3.19,蛙胚神经管在蛙淋巴液中悬浮培养,成功看到神经末端阿米巴运动。4.19,鸡胚浸出液对鸡胚心脏组织块进行原代培养和传代培养。5.19435.1943年,取得长久培养细胞系(可连续传代)和细胞年,取得长久培养细胞系(可连续传代)和细胞克隆。克隆。“组织培养组织培养”一词产生一词产生真正组织培养开始;真正组织培养开始;创建了悬浮培养法创建了悬浮培养法成功进行了传代培养;成功进行了传代培养;创造了卡氏瓶;创造了卡氏瓶;标志着组织培养工作进入标志着组织培养工作进入全新阶段全新阶段二、动物组织培养技术发展二、动物组织培养技术发展第6页2.2.适宜环境条件适宜环境条件无菌、无毒环境:无菌、无毒
7、环境:加抗生素,定时更换培养液加抗生素,定时更换培养液适宜温度和适宜温度和pHpH值:值:温度:温度:36.50.5 36.50.5 pHpH值:值:7.2-7.47.2-7.4适宜气体环境:适宜气体环境:O O2 2和和COCO2 2(95%95%空气和空气和5%CO5%CO2 2)适宜渗透压等适宜渗透压等(一)培养条件(一)培养条件 三、动物细胞培养过程三、动物细胞培养过程成份:水、成份:水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等1.含全部营养物质培养液含全部营养物质培养液第7页(二)培养过程(二)培养过程 卡氏瓶第8页原代培养原代培养传传代代
8、培培养养原代培养物原代培养物细胞系:细胞系:可连续传代细胞可连续传代细胞 原代培养物在首次传代时就原代培养物在首次传代时就成为细胞系。成为细胞系。能连续能连续培养培养 连续细胞系连续细胞系不能连续不能连续培养培养 有限细胞系有限细胞系四、细胞系、细胞株四、细胞系、细胞株 (二倍体细胞)(二倍体细胞)(异倍体核型细胞)(异倍体核型细胞)(1 1)恶性细胞系,异体致瘤性)恶性细胞系,异体致瘤性)恶性细胞系,异体致瘤性)恶性细胞系,异体致瘤性 (2 2)保留接触抑制,不致癌)保留接触抑制,不致癌)保留接触抑制,不致癌)保留接触抑制,不致癌(遗传物质改变,不死性)(遗传物质改变,不死性)第12页2.细
9、胞株:细胞株:经过一定经过一定经过一定经过一定选择或纯化选择或纯化选择或纯化选择或纯化方法,从方法,从方法,从方法,从原代培养物或细原代培养物或细原代培养物或细原代培养物或细胞系胞系胞系胞系中取得中取得中取得中取得含有特殊性质含有特殊性质含有特殊性质含有特殊性质细胞系。细胞系。细胞系。细胞系。如:单抗细胞株如:单抗细胞株如:单抗细胞株如:单抗细胞株 细胞株普通含有恒定染色体组型、同工酶类型、细胞株普通含有恒定染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特征等。病毒敏感性和生化特征等。遗传物质未改变。遗传物质未改变。连续细胞株:可连续连续细胞株:可连续屡次传代屡次传代细胞株。细胞株。有限细胞株:传代
10、有限细胞株:传代次数有限次数有限细胞株细胞株细胞系:细胞系:泛指可传代细胞。泛指可传代细胞。细胞株细胞株:含有特殊性质细胞系。含有特殊性质细胞系。第13页五、克隆培养法(细胞克隆)五、克隆培养法(细胞克隆)1.概念:概念:把一个把一个单细胞单细胞从群体中分离出来单独培养,从群体中分离出来单独培养,使之繁衍成一个使之繁衍成一个新细胞群体新细胞群体技术。技术。2.特点:特点:遗传性状均一、表现性状相同,便于研究遗传性状均一、表现性状相同,便于研究异质性异质性细胞系细胞系克隆培养克隆培养纯系(克隆)纯系(克隆)3.最基本要求最基本要求:确保所建成克隆确保所建成克隆起源于单个细胞起源于单个细胞第14页
11、4.适合于克隆细胞:适合于克隆细胞:对环境有较大适应范围对环境有较大适应范围和含有和含有较强独立生存能力较强独立生存能力细胞细胞5.提升细胞克隆形成率办法:提升细胞克隆形成率办法:选择适宜培养基选择适宜培养基添加血清添加血清 (胎牛血清胎牛血清)(能促进细胞生长、增殖和贴附能促进细胞生长、增殖和贴附)以滋养细胞支持生长(以滋养细胞支持生长(经射线照射小鼠成纤维细胞经射线照射小鼠成纤维细胞)激素刺激(激素刺激(胰岛素胰岛素等等)使用使用COCO2 2培养箱,调整培养箱,调整PHPH 群体细胞群体细胞 单细胞单细胞无限细胞系、转化或肿瘤细胞无限细胞系、转化或肿瘤细胞 原代细胞、有限细胞系原代细胞、
12、有限细胞系6.细胞克隆主要用途:细胞克隆主要用途:从普通细胞系中从普通细胞系中分离分离出缺乏特殊基因出缺乏特殊基因突变细胞系突变细胞系。用于研究细胞遗传规律和生理特征。用于研究细胞遗传规律和生理特征。第15页三、动物细胞融合技术及其应用三、动物细胞融合技术及其应用 什么是细胞融合技术?什么是细胞融合技术?为何要进行细胞融合?为何要进行细胞融合?怎样实现细胞融合?怎样实现细胞融合?第17页 定义 指用自然或人工方法指用自然或人工方法,使两个或多个不一样细胞融使两个或多个不一样细胞融合成一个细胞过程。合成一个细胞过程。不一样基因型细胞之间融合不一样基因型细胞之间融合就是就是细胞杂交细胞杂交。1.动
13、物细胞融合受精作用受精作用两个细胞正在融合两个细胞正在融合第18页 诱导融合原因生物法:生物法:灭活仙台病毒灭活仙台病毒诱导融合(诱导融合(特有特有)这是因为病毒磷脂外衣与动物细胞膜十分相同缘故。病毒外壳上一些糖蛋白可能还有促进细胞融合功效。化学法:聚乙二醇诱导融合(化学法:聚乙二醇诱导融合(应用最广泛应用最广泛)物理法:电刺激诱导融合物理法:电刺激诱导融合病毒颗粒黏病毒颗粒黏 附细胞表面附细胞表面细胞膜连接细胞膜连接细胞膜被细胞膜被 病毒颗粒穿通病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞细胞融合、形成杂种细胞第19页5.应用3.利用杂交瘤技术,制备单克隆抗体。2.克服远缘杂交不亲和障碍鼠鸡、鼠兔、鼠
14、猴、人鼠、人兔、人鸡、人蛙、酵母菌鸡、人胡萝卜等此技术有什么缺点和优点?1.因为细胞杂交中染色体轻易丢失,所以利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物降低对应关系,能够进行基因定位。第20页读下面一段文字资料,思索以下问题:读下面一段文字资料,思索以下问题:长久以来,为了取得抗体,采取是把某种抗原重复长久以来,为了取得抗体,采取是把某种抗原重复注射到动物体内,然后从动物血清中分离出所需抗体注射到动物体内,然后从动物血清中分离出所需抗体方法。用这种方法取得抗体,不但产量低,而且抗体方法。用这种方法取得抗体,不但产量低,而且抗体特异性差,纯度低,反应不够灵敏。人们发觉,在动特异性差,纯度低,反
15、应不够灵敏。人们发觉,在动物发生免疫反应过程中,体内物发生免疫反应过程中,体内B细胞能够产生多达百细胞能够产生多达百万种以上特异性抗体,不过每个万种以上特异性抗体,不过每个B细胞只分泌一个化细胞只分泌一个化学性质单一、特异性强抗体。要想取得大量单一抗体,学性质单一、特异性强抗体。要想取得大量单一抗体,必须用单个必须用单个B细胞进行无性繁殖,即克隆。细胞进行无性繁殖,即克隆。1.利用已学知识,构想怎样取得单一类型抗体?2.能否用单个B淋巴细胞经过克隆形成细胞群来产生单一类型抗体呢?第21页设计方案:设计方案:一个B淋巴细胞只分泌一个特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖-化学性质单一、特异性强抗体。
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