结核感染T淋巴细胞IFN-γ释放实验不确定结果原因探讨.pdf

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 收稿日期：2023 年 12 月 21 日 作者简介：冯善丽（1984），女，汉族，山东临沂人，硕士研究生。-5-结核感染T淋巴细胞IFN-释放实验不确定结果原因探讨 冯善丽 申爱华 陈洪贞 张思佳 济宁医学院附属医院检验科，山东 济宁 272007 摘要：摘要：目的 探讨结核感染 T 细胞干扰素试验（IGRAs）中不确定结果的影响因素。方法 利用 IGRAs 法检测2021-2022 年门诊及住院结核筛查的患者，报告结果为不确定，对这一类患者的年龄分布，就诊科室，免疫状况，用药情况等统计分析。并对这一类患者的实际结核感染进行确认。结果 3749 例筛查患者中，阳性 1161 例，阳性率为 30.97%，阴性 2254 例，阴性率为 60.12%，不确定 334 例，占总筛查的 8.91%，不确定比例在厂家说明书规定的范围 5%-10%内，实验结果可信。结果为不确定患者中按年龄分组，66岁，各年龄段所占比例为 19.46%，19.16%，18.86%，21.56%，20.96%，按科室分，风湿免疫科，呼吸科，儿科，感染科，肿瘤科，皮肤科，血液科，卒中科，重症监护，神经内科，肾内科分别占 17.37%，1.20%，14.37%，2.40%，12.87%，1.50%，16.17%，2.10%，15.57%，3.00%，13.47%，按免疫状况分组，淋巴细胞比例低 243 例占 72.75%，淋巴细胞正常 91 例占 27.25%，白细胞总数比例低 221 例占 66.17%，白细胞总数比例正常 113 例占 33.83%，效应T 充足 139 例占 41.62%，效应 T 不足 195 例占 58.38%。根据患者用药情况分组，用激素或免疫抑制剂的患者占68.26%，未用药的患者占 31.74%。分析 2022 年 12 月 7 日到 2023 年 3 月 22 日的标本，不确定率为 12.07%，高于同期 2021 年数据，从 2022 年 12 月 7 日后全民普遍感染后，机体免疫状态暂时变化，不确定率稍有增高。结论 在 IGRAs 实验中，长期服用免疫抑制剂和严重感染患者的淋巴细胞数较低，使 M 管淋巴细胞反应弱，阳性对照低。关键词：关键词：结核；T 淋巴细胞；干扰素释放实验；实验技术和方法；不确定 中图分类号：中图分类号：R52 Discussion on the cause of inconclusive results of IFN-release experiment in T lymphocytes infected with tuberculosis FENG Shanli SHEN Aihua CHEN Hongzhen ZHANG Sijia Clinical Laboratory,Affiliated Hospital of Jining Medical College,Shandong Jining 272007 Abstract:Objective To investigate the factors influencing the uncertain results of T cell gamma interferon assay(IGRAs)for tuberculosis infection.Methods The IGRAs method was used to detect the outpatient and inpatient tuberculosis screening patients in 2021-2022,and the reported results were uncertain.The age distribution,medical departments,immune status and drug use of these patients were statistically analyzed.The actual TB infection in this group of patients was confirmed.Results Among the 3749 screened patients,1161 cases were positive,the positive rate was 30.97%,2254 cases were negative,the negative rate was 60.12%,and 334 cases were uncertain,accounting for 8.91%of the total screening.The uncertain proportion was within the range of 5%-10%stipulated in the manufacturers instructions,and the experimental results were credible.The results showed that the uncertain patients were grouped by age group,66 years old,and the proportion of each age group was 19.46%,19.16%,18.86%,21.56%,20.96%,divided by departments,including rheumatology,immunology,respiratory,中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-6-pediatrics,infection,oncology,dermatology.Hematology department,stroke department,intensive care department,neurology department,nephrology department accounted for 17.37%,1.20%,14.37%,2.40%,12.87%,1.50%,16.17%,2.10%,15.57%,3.00%,13.47%respectively.243 cases with low lymphocyte ratio accounted for 72.75%,91 cases with normal lymphocyte ratio accounted for 27.25%,221 cases with low leukocyte total ratio accounted for 66.17%,113 cases with normal leukocyte total ratio accounted for 33.83%,139 cases with sufficient effective T accounted for 41.62%,and 195 cases with insufficient effective T accounted for 58.38%.According to drug use,68.26%of patients took hormone or immunosuppressive drugs,31.74%of patients did not take drugs.In the analysis of samples from December 7,2022 to March 22,2023,the uncertainty rate was 12.07%,which was higher than the data of 2021 during the same period.After December 7,2022,the immune status of the body changed temporarily,and the uncertainty rate increased slightly.Conclusion In the IGRAs assay,the number of lymphocytes in patients with long-term immunosuppressive drugs and severe infection was lower,resulting in weak M-tube lymphocyte response and low positive control.Key words:tuberculosis;T lymphocytes;Gamma interferon release experiment;Experimental techniques and methods;uncertainty 0 引言 结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病，可能侵入人体全身各种器官，由于其早期临床表现不显著，诊断难度较大，易出现漏诊误诊等情况1。临床上诊断依据有患者的症状体征，实验室诊断，影像学资料，流行病学等，实验室诊断主要有细菌学，包括涂片检菌，培养，药敏等，免疫学方法有结核抗体，结核蛋白芯片，体外-干扰素试验和结核杆菌分泌抗原2。分子生物学，由于细菌学敏感性低，检测周期长，免疫学方法称为临床诊断的主要参考手段3。体外-干扰素试验（IGRA）可以检测曾感染过抗结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）抗 原 刺 激 后 致 敏T淋 巴 细 胞 中干 扰 素（interferon-,IFN-）的释放，来判定人体是否存在 MTB 感染，由于 IGRA 选择卡介苗和（非结核分枝杆菌引起的肺病，NTM）缺失的特异性抗原（差别 1 区，ESAT-6 和 CFP-10 等），其结果不受卡介苗接种的影响，被广泛应用于潜伏结核感染（Iatent tuberculosis infection,LTBI）的检测4。IGRA 常用方法有两种，第一种是酶联免疫法吸附试验（ELISA），当机体受到结核杆菌感染后会产生记忆 T 细胞，再次受到结核分枝杆菌特异性抗原的刺激时会大量增殖并且释放出-干扰素，通过酶联免疫方法检测释放的干扰素，可以判断机体的感染情况，常用试剂盒为 Quantiferon-TB Gold In-Tube（简称QFT-GIT）。第 二 种 是 T 细 胞 酶 联 免 疫 斑 点 法（enzyme-linked immunospot,ELISPOT）,在特异性抗原刺激下，测定外周血单个核细胞中释放效应 T 淋巴的数量，常用试剂盒为结核感染 T 细胞斑点试验（T-SPOT.TB）。IGRA 主要应用于结核感染的诊断、结核潜伏感染的流行病调查以及儿童中的无症状结核感染5。与传统的方法相比，创伤性小，灵敏度与特异度比较高；所选用的结核特异性抗原 ESAT-6 和CFP-10 在所有卡介苗菌株以及大部分非结核分枝杆菌中缺失，与大多数肺结核分枝杆菌无交叉反应。所需时间短，获得结果较快。操作简便，可重复性好6。解读 IGRA 结果需要结合流行病学资料，病史，医疗诊断手段综合考虑，阴性不支持 MTB 诊断，阳性表明机体曾经患过结核病，不能代表目前为活动性结核病，也不能根据阳性检测数值的高低判断结核病病情，不确定代表提示患者免疫力受损，有其他炎症反应干扰；病人 T 细胞对阳性对照管 PHA 无淋转反应，无法产生-干扰素；本文重点探讨结核感染 T 细胞 干扰素试验（IGRAs）中不确定结果的影响因素。1 材料与方法 1.1 研究对象 对本院 2021-2022 年 3749 例门诊及住院结核筛查患者进行-干扰素释放试验检测，男性 171 例，女性163 例，年龄 1-90 岁。1.2 仪器及试剂 酶标仪 37培养箱，试剂采用凯杰结核感染 T 细中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-7-胞检测试剂盒（体外释放酶联免疫法）。1.3 实验方法 空腹抽取受试者 4ml 肝素锂抗凝全血，接种前上下颠倒充分混匀血液标本，分配每等份 1ml 到对应的Nil、TB 抗原和 Mitogen 管，颠倒混匀，立即放入 37培养箱中，直立培养 18-24 小时，培养箱不需要 CO2，也没有湿度要求。培养后的培养管以 2000-3000RCF（g）离心 15 分钟收集血浆，进行 ELISA 检测，测定反应孔在 450nm 和 630nm 处的吸光度，根据试剂盒中 校准品所做标准曲线，得出所检测-干扰素含量（IU/ml）。1.4 判断标准 当 Nil8IU/ml 时：TB 抗原管-Nil 管数值0.35IU/ml 或 TB 抗原管-Nil 管数值25%Nil 管数值,QFT 为阴性；TB 抗原管-Nil 管数值0.35IU/ml 且TB 抗原管-Nil 管数值8IU/ml 时,TB 抗原管和 Nil 管数任何值，QFT为不确定。1.5 统计分析 采用SPSS22.0软件对实验数据进行统计分析处理，计数资料比较采用2检验，P0.5 有统计学意义 2 结果 2.1 IGRAs 检测 IFN-结果见下表 1。在全部 3749 例结核筛查患者中，IFN-阳性 1161 例，占 30.97%，阴性 2254 例，占60.12%，不确定 334 例，占检测总数的 8.91%。2020-2022 年检测不确定率分别为 8.18%，6.78%，12.07%，2=21.992，P0.05,差异有统计学意义。2.2 各科室分布情况 对 2020-2022 年 334 例不确定结果进行科室分布统计，具体情况见表 2。其中风湿免疫科，血液科，儿科，重症监护，肿瘤科，肾内科比例较高，此类人群长时间用激素或免疫抑制剂导致淋巴细胞活性减弱，使机体处于免疫抑制状态，这样一来，结核感染的概率增加，IGRAs 实验的不确定率也会增加。表 1 2020-2022 年 TB 分布情况例（%）年份 例数 阳性 阴性 不确定 2020 1344 395 839 110 2021 1253 450 718 85 2022 1152 316 697 139 表 2 TB-IGRA 不确定结果科室分布情况例（%）科室 不确定（n=334）风湿免疫科 58（17.37）呼吸科 4（1.20）儿科 48（14.37）感染科 8（2.40）肿瘤科 43（12.87）皮肤科 5（1.50）血液科 54（16.17）卒中科 7（2.10）重症监护 52（15.57）神经内科 10（3.00）肾内科 45（13.47）表 3 TB-IGRA 不确定结果年龄和性别分布情况例（%）年龄和性别 不确定（n=334）x2 P 男 171（51.20）0.383 0.536 女 163（48.80）66 岁 70（20.96）中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-8-表 4 淋巴细胞数目分布情况例（%）细胞分布 不确定（n=334）淋巴细胞 正常 91（27.25）低 243（72.75）白细胞总数 正常 113（33.83）低 221（66.17）效应 T 充足 139（41.62）不足 195（58.38）2.3 年龄和性别分布情况 见表 3。在 334 例不确定患者中，男性 171 例，占所有不确定患者的 51.20%，女性 163 例，占 48.80%，无统计学差异。对 334 例不确定结果的患者进行年龄统计，按年龄递进分组如下，66 岁。不确定率最高的为 46-65 岁，各年龄段无差异。2.4 淋巴细胞数目分布情况 见表 4。不确定患者白细胞总数和淋巴细胞过低，效应 T 数量不足，使丝裂原管 Mitogen 管在 IGRA 实验中反应较低，IFN-释放量8IU/ml，另外，在临床试验中,有 8 IU/mL11。其二是患者服用免疫抑制性药物，免疫力受损，淋巴细胞总数降低（CD4 细胞数100/mL），无法产生足量 IFN-；还有部分患者淋转反应降低：常见于恶性肿瘤、淋巴肉芽肿、重症结核、重症真菌感染、慢性淋巴细胞白血病、应用放疗等。对于处于免疫抑制状态的患者，从潜伏性结核发展到活动性肺结核的危险性要高于普通人群。潜伏性结核及肺外结核易漏诊、误诊12。在风湿科、血液科、肿瘤科等其他肺外科室对结核高危人群预测结核发病风险和对拟用 TNF 抑制剂患者进行结核排除检查是非常必要的，以便做到结核病被早发现，及时治疗，结核病病情能得到及时控制13。本文分析风湿免疫科，血液科，儿科，重症监护，肿瘤科，肾内科比例较高，原因为临床上多采用糖皮质激素及其他免疫抑制剂治疗，且剂量较大，疗程较中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-9-长，常导致机体免疫功能下降，易并大结核感染，导致人群筛查往往会出现不确定结果。男性阳性率高于女性，考虑主要由于男性社交场合比较广，一些不良饮食习惯，饮酒、吸烟史较长致呼吸道防御功能较差，免疫力降低等，基于结核的传播方式，比女性较易感染。比较各年龄段人群发现相对其他年龄段的人群，儿童、青少年阳性率较低，中老年阳性率较高。其原因可能是儿童免疫功能未成熟或相对较低，刺激浓度太低不易监测。综上所述，在 IGRAs 实验中，长期服用免疫抑制剂和严重感染患者的淋巴细胞数较低，使 M 管淋巴细胞反应弱，阳性对照低。参考文献 1WorldHealthOrganization.GlobaltuberculosisreportJ.worldHealthOrganization,2021,2(4):1-3.2WorldHealthOrganization.tuberculosispreventivetreatmentJ.WorldHealthOrganization,2020,6(13):23-25.3EdwardsA,GaoY,AlanRN,etal.Corticosteroidsandinfliximabimpairtheperformanceofinterferon-yreleaseasaysusedfordiagnosisoflatenttuberculosisJ.Thorax,2017,72(10):946-949.4耿利琴,周翠红,李擎宇,等.结核感染 T 细胞斑点试验诊断结核感染的价值及结果假阴性的相关影响因素J.实用医技杂志,2022,29(3):267-270.5孟娟,石鹏辉,范伟光,等.外周血样本不同存放温度和时间对结核感染 T 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