双向电泳试剂配制以及protocol.doc
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水化液 8mM Urea 12g 4.8 2%CHAPS 0.5g 0.2 0.5%IPG Buffer 125ul 50 0.002%Bromophend Blue 50ul (1%BB) 2.0 DD H2O To25ml To 10ml 分装成500ul每管，冻于—20℃，用前融化。 SDS平衡液 1× 2× 3× Tris-HCL PH8.8(F液) 0.54ml 1.08 1.8 Urea（Fw60.06） 5.41g 10.82 18.2 Glycerol (87%V/V) 4.53g 9.06 15.1 SDS 0.3g 0.6 1.0 Bromophenol Blue 30ul 60 100 DDH2O To15ml To30 To50 第一天配制2管，摇晃过夜 第二天用前，一管加入DTT（100mg/10ml） 另一管加入碘乙酰胺（250mg/10ml）碘乙酰胺较难溶，多摇晃几下 II向SDS胶 1× 2× 3× Monomer Solution(E液) 50.04ml 83.4 125.1 4×Vesoling gel buffer(F液) 30ml 50 75 10%SDS(G液) 1.2ml 2 3 DDH2O 38.16ml 63.6 95.4 10%Ammonium Peosulfate (0.486---25G) 600ul 1ml 1.5 TEMED (10%AP:0.15→1.5ml) 39.6ul 66 99 E液 Acrylumicle 30% 150g Bis- Acylumicle 0.8% 4g DDH2O To 500ml 4℃贮藏 F液 Tris-base 1.5m 181.7g DDH2O To 750ml HCL To PH8.8 DDH2O To 1L 4℃贮藏 G液 SDS 10% (W/V) 5g DDH2O To 50ml 室温 二向下槽液 25mM Tris—HCL PH 8.3 12.12g 192mM gly 57.6g 0.1% SDS 4.5g 定容至500ml（DDH2O），搅拌，移至4L试剂瓶，再加入3.5L DDH2O，需前一天加入电泳槽，以消泡。 琼脂葡糖液 二向下槽液 100ml Agarose(NA or M) 0.5% 0.5g Bromophenol 0.002% 200ul 87℃溶解，室温保存 1%溴酚蓝液 Bromophend Blue 1% 100mg Tris-base 60mg DDH2O To 10ml 室温保存 固定液 （无水）乙醇 150ml 乙酸 37.5ml DDH2O 188ml 敏化液 1× 2× 3× (无水)乙醇 112.5ml 225 337.5 Sodium thiosulfate 0.75g 1.5 2.25 Sodium acetate (17%) 25.5g 51 76.5 DDH2O To 350ml To700 To1050 银染液 1× 2× 3× AgNO3 (2.5%) 0.9375g 1.875 2.8125 DDH2O To 375 ml To750 To1125 显色液 1× 2× 3× Sodiun carbonate(6.26g) 9.375g 18.75 28.125 甲醛（37%）用前加 150ul 300 450 DDH2O To 375 ml To750 To1125 终止液 1× 2× 3× EDTA—2Na（365g） 5.475g 10.95 16.425 DDH2O To 375ml To750 To1125展开阅读全文
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