糖的组织化学省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx
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1、组织化学组织化学 histochemistry特殊染色特殊染色,经过应用一些能与组织经过应用一些能与组织细胞化学成份特异性结合显色试细胞化学成份特异性结合显色试剂剂,定位地显示病变组织细胞特殊定位地显示病变组织细胞特殊化学成份化学成份,同时又能保留原有形态同时又能保留原有形态改变改变,到达形态与代谢结合到达形态与代谢结合.可用于检测细胞内酶类、糖类、可用于检测细胞内酶类、糖类、脂类、核酸、一些金属元素等。脂类、核酸、一些金属元素等。第1页糖糖 组组 织织 化化 学学第2页糖分类糖分类1.单糖和双糖单糖和双糖2.多糖:淀粉、纤维素、糖原多糖:淀粉、纤维素、糖原3.粘液物质(粘多糖)粘液物质(粘多
2、糖)中性粘多糖中性粘多糖 酸性粘多糖酸性粘多糖4.糖蛋白糖蛋白 粘蛋白粘蛋白 氨基己糖氨基己糖4%糖蛋白糖蛋白 氨基己糖氨基己糖4%5.糖脂糖脂 含有半乳糖含有半乳糖,脂肪酸脂肪酸,神经氨基醇神经氨基醇第3页糖糖 原原第4页一一.糖原概念糖原概念l 由多糖衍化而来,是天然存在于动物组由多糖衍化而来,是天然存在于动物组织内多糖织内多糖l 分布:胞浆内分布:胞浆内 肝、心肌、骨骼肌肝、心肌、骨骼肌l 同种葡萄糖聚合物同种葡萄糖聚合物l 作为糖原染色切片,必须冰冻或经特殊作为糖原染色切片,必须冰冻或经特殊固定液固定后进行切片固定液固定后进行切片第5页二二.固定剂选取固定剂选取1.Carnoy(冷冷4
3、)无水乙醇无水乙醇 60ml 预防糖原溶于水预防糖原溶于水 氯氯 仿仿 30ml 增加渗透力增加渗透力 冰冰 醋醋 酸酸 10ml 抵消乙醇对组织抵消乙醇对组织 收缩、硬脆作用收缩、硬脆作用 *优点:固定快速,保留肝糖原优点:固定快速,保留肝糖原 第6页2.Gendre(冷冷4)苦味酸无水乙醇饱和液苦味酸无水乙醇饱和液 80ml 甲醛甲醛 15ml 冰醋酸冰醋酸 5ml临用前混合配制临用前混合配制第7页3.Lillie固定液(固定液(AAF)无水乙醇无水乙醇 85ml 冰醋酸冰醋酸 5ml 甲醛甲醛 10ml 固定液预冷固定液预冷4,固定,固定24h后,后,95%乙乙醇脱水,包埋醇脱水,包埋第
4、8页三三.固定中注意事项固定中注意事项1.尽可能取小块新鲜组织及时固定,不用尽可能取小块新鲜组织及时固定,不用水溶性固定液水溶性固定液2.应用含酒精溶液作为固定液,但最好不应用含酒精溶液作为固定液,但最好不单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂混合单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂混合固定液固定为佳固定液固定为佳3.固定原理:使糖原与固定液之间相结合固定原理:使糖原与固定液之间相结合蛋白质凝固,糖原被周围凝固蛋白质膜蛋白质凝固,糖原被周围凝固蛋白质膜保护起来,保护起来,第9页四四.显示糖原方法显示糖原方法 1.碘染色碘染色 2.胭脂红染色胭脂红染色*3.过碘酸过碘酸-Schiff 反应反应 4.银浸染法银
5、浸染法第10页过碘酸过碘酸-Schiff 反应反应Periodicacid-Schiff,PAS第11页(一)染色原理一)染色原理过碘酸是一个强氧化剂,能氧化糖分子,过碘酸是一个强氧化剂,能氧化糖分子,使相邻二个碳原子上羟基(使相邻二个碳原子上羟基(-OH)变为变为醛基(醛基(-COOH)第12页Schiff氏试剂是付品红(碱性品红)经氏试剂是付品红(碱性品红)经SO2作用后,形成无色溶液作用后,形成无色溶液付品红付品红Schiff试剂试剂第13页当当Schiff氏试剂与醛基作用后,形成含有氏试剂与醛基作用后,形成含有发色基团化合物,展现紫红色沉淀发色基团化合物,展现紫红色沉淀第14页*PAS
6、反应基本原理反应基本原理 1.经过过碘酸氧化作用,将糖分子经过过碘酸氧化作用,将糖分子中碳键打断,游离出醛基中碳键打断,游离出醛基 2.醛基与醛基与Schiff试剂反应显出红色试剂反应显出红色沉淀沉淀第15页(二二)染色步骤染色步骤1.切片脱蜡至水切片脱蜡至水2.1%过碘酸溶液内氧化过碘酸溶液内氧化5-10min3.流水洗流水洗5min,再用蒸馏水洗再用蒸馏水洗4.用用Schiff试剂处理试剂处理10-20min5.流水洗流水洗10min6.复染复染(可用可用Mayer明矾苏木素或甲基绿衬染细明矾苏木素或甲基绿衬染细胞核胞核)7.脱水、透明、封片脱水、透明、封片第16页切片经二甲苯和各级酒精复
7、水后,入0.5%过碘酸溶液中作用15分钟,取出后水洗。第17页切片充分洗净后入Schiffs试剂中进行显色。作用15分钟左右,将切片取出水洗,为洗去非特异性着色,将切处理品入三级新配制亚硫酸中进行冲洗,取出后水洗,镜检。第18页 肝糖原肝糖原-PAS染色染色 X200第19页 肝糖原肝糖原-PAS+苏木素复染苏木素复染 X200第20页【结果】【结果】胞浆内胞浆内PAS阳性物质呈紫红色,颗粒状阳性物质呈紫红色,颗粒状或均质团块状,胞核呈蓝色或绿色或均质团块状,胞核呈蓝色或绿色 红色深浅反应含糖原量多少红色深浅反应含糖原量多少【对照】【对照】采取淀粉酶或唾液酶消化切片采取淀粉酶或唾液酶消化切片
8、对照片对照片PAS(-),),未处理片(未处理片(+)第21页PAS反应阳性物质反应阳性物质物质类别物质类别举例举例染色强度染色强度多糖多糖糖原糖原强强中性粘液物质中性粘液物质结肠杯状细胞结肠杯状细胞强强一些酸性粘液物质酸性非硫酸性含酸性非硫酸性含唾液粘多糖唾液粘多糖中中基底膜基底膜肾小球基底膜肾小球基底膜中中色素色素脂褐素脂褐素中中脂质脂质脑苷脂脑苷脂中中淀粉样物淀粉样物淀粉样物淀粉样物弱弱软骨软骨软骨软骨弱弱真菌真菌曲菌曲菌强强脑垂体脑垂体粘液样细胞粘液样细胞强强第22页This normal glomerulus is stained with PAS to highlight base
9、ment membranes.The capillary loops of the glomerulus are well-defined and thin.第23页A888 kidney 11-PAS第24页A888 kidney 14-PAS第25页(三)(三)PAS反应应用反应应用证实与判别细胞内空泡样变性证实与判别细胞内空泡样变性 (水变性、脂肪变性、糖原)(水变性、脂肪变性、糖原)心肌病变及其它心血管疾病诊疗和研究心肌病变及其它心血管疾病诊疗和研究糖原累积病诊疗及研究糖原累积病诊疗及研究糖尿病诊疗及研究糖尿病诊疗及研究一些肿瘤诊疗与判别一些肿瘤诊疗与判别第26页肝细胞水变性肝细胞水变
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