实用pcr流程表.doc
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1、临床PCR检验流程记录表 检验日期: 检验项目: HBVDNA 扩增仪中保存文件名使用说明:严格按单一流向进行实验,即试剂准备区标本制备区扩增区,严禁逆向移动。本记录表的流向亦遵循此流程;各项工作执行后在相应项目前的方框内打“”;本记录表最后归档保存在PCR实验室扩增区的专用文件夹中,以备查找。实验前准备试剂在有效期内 扩增仪、加样器、金属浴、温湿度计等仪器在校准有效期内(校准之日起1年)生物安全柜的滤膜在使用有效期内 离心管、带滤芯吸头已经过质检合格各区按消毒液配制SOP配制500mg/L含氯消毒液、2000mg/L含氯消毒液和70酒精,即用即配.打开通风设备操作者试剂准备区实验前:更换专用
2、工作服、戴口罩、帽子、鞋套 实验台面清洁(500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦拭) 冰箱温度:冷藏室(28); 冷冻室(-202)实验室温度(允许范围:1530);相对湿度:(允许范围:3070)PCR试剂来源: 试剂厂家:口 深圳匹基生物工程有限公司批号:检验项目:HBVDNA 本次实验用量: 人份; 剩余量: 人份其他有关试剂配制: 仪器设备使用:离心机:正常 不正常 ; 振荡器:正常 不正常;生物安全柜: 口 正常 口不正常实验后:按实验室清洁消毒SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机,并进行紫外线照射30分钟以上. 按实验室废弃物处理SOP处理实验废弃物。操作者检验日期:检验
3、项目:HBV-DNA样本处理区实验前:更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套 实验台面清洁(500mg/L含氯消毒液、70酒精或水擦拭) 冰箱温度:冷藏室(28); 冷冻室(-202)实验室温度(允许范围:1530);相对湿度:(允许范围:3070)HBV-DNA阳性室内质控物来源:浓度及批号:扩增位置:HBVDNA阴性室内质控物来源:批号:扩增位置:所处理的HBVDNA标本(对应标本接收的唯一编号)及拟扩增位置:191725334149576573818921018263442505866748290311192735435159677583914122028364452606876849251
4、321293745536169778593614223038465462707886947152331394755637179879581624324048566472808896核酸提取及加样过程:按乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR操作程序SOP进行。仪器设备使用: 生物安全柜: 正常 不正常; 恒温金属浴:;离心机: 正常 不正常; 振荡器: 正常 不正常; 低温离心机:制冷:正常 不正常; 离心:正常 不正常 实验后:按实验室清洁消毒SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机,并进行紫外线照射30分钟以上。 按实验室废弃物处理SOP处理实验废弃物。口 使用后标本冷冻保存3个月,以备复查。
5、操作者检验日期: 检验项目:HBVDNA 扩增及产物分析区实验前:更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套 实验台面清洁(500mg/L含氯消毒液、70酒精或水擦拭) 实验室温度(允许范围:1530);相对湿度:(允许范围:30%70%)LightCycler扩增仪操作:开机自检及运行正常; 按LightCycler操作使用SOP进行编程、参数设定HBVDNA 标准曲线计算值:Slope 值: Intercept值: r2值:室内质控结果:阴性质控物结果:;阳性质控物结果: 口填写室内质控记录、质控图; 是否失控:口否 口是室内质控结果:阴性质控物结果:;阳性质控物结果: 口填写室内质控记录、质控图
6、; 是否失控:口否 口是失控原因及分析:(失控判断标准及原因分析按室内质控SOP进行)实验结果:见所附扩增仪打印结果实验结果有效性判断:有效 无效(依据实验结果有效性判断SOP进行)实验后:按实验室清洁消毒SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机,并进行紫外线照射30分钟以上。 按实验室废弃物处理SOP处理实验废弃物.操作者1。 操作步骤:1.2.1 取n个1.5ml的灭菌离心管,作好标记。(n=样本数+1管HCV阴性对照+1管HCV强阳性对照+1管HCV临界阳性对照)1.2.2 向上述离心管中分别加入25ul蛋白酶溶液.1.2.3 分别加入待测样本、HCV阴性对照、HCV临界阳性对照和HC
7、V强阳性对照各200ul。1.2.4 加入200ul新鲜配制的裂解液工作液,盖上盖子,振荡15秒,充分混匀。(注意:不要把蛋白酶溶液直接加入裂解液工作液中)。1.2.5 56摄氏度温浴15分钟。瞬时离心,以去除管盖上的滴液。1.2.6 加入250ul无水乙醇,盖上盖子,彻底混匀(振荡15秒).在室温下静置5分钟(1525摄氏度)。注意:如果环境温度超过25摄氏度,无水乙醇需预冷。瞬时离心,以去除管盖上的滴液。1.2.7 将n个核酸提取柱放入收集管中,小心地将步骤1。2。6中的液体移入核酸提取柱中.盖上盖子,6000g离心1分钟.倒掉收集管中的废液,将提取柱重新放入收集管中.(如果离心后核酸提取
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