平板菌落计数法操作步骤培训资料.doc
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1、学习资料平板菌落计数法 一、目的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法。二、基本原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可能来自样品中的23或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。现在常使用菌落形成单位。该计数法的缺点是操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素的影响,但是这种计
2、数方法最大的优点是可以获得活菌的信息,所以被广泛用于生物制品检验,以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测。三、器材大肠杆菌悬液,LB琼脂培养基,1mL、5mL无菌吸管,无菌平皿,无菌水,无菌试管,试管架和记号笔等。四、操作步骤1、编号取无菌平皿9套,分别标明为10-4、10-5、10-6各三套,另取6支无菌试管分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。2、稀释用1mL无菌吸管吸取1mL已充分混匀的大肠杆菌菌悬液,精确地放0.5mL至10-1的试管中,此即为10倍稀释,将多余的菌液放回原菌液中。将10-1试管充分振荡、混匀。另取一支1ml吸管插入10-1试管中来回
3、吹吸菌液三次,进一步将菌体分散、混匀。动作不要太猛太快,吸时插入,吹时提出,再用此吸管吸取10-1菌液1mL,精确地放0.5mL至10-2试管中,此即为100倍稀释,依次类推,3、取样用三支1ml无菌吸定分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌悬液各1mL,对号放入编好号的无菌平皿中,每个平皿放0.2mL4、倒平板尽快向上述盛有不同稀释菌液的平皿中倒入融化后冷却至45度的LB培养基约15-20ml,置水平位置迅速旋动平皿,使培养基与菌液混合均匀。5、培养倒置于37度培养箱中培养48小时,6、计数算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行计算;每毫升中菌落形成单位(cfu)= 同一稀释度三次重复的平均菌落数稀释倍数5五、实验报告1、结果将培养后菌落计数结果填入下表:稀释度10-410-510-6123平均123平均123平均Cfu数/平板每毫升的cfu数2、思考题(1)为什么溶化后的培养基要冷却至45左右才能倒平板?(2)要使平板菌落计数准确,需要掌握哪几个关键?为什么?(3)同一种菌液用血球计数板和平板菌落计数法同时计数,所得结果是否一样?为什么?(4)试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点。仅供学习与参考
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