细菌室工作流程.doc
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1、细菌室工作流程简介一、标本接种与涂片染色(一)标本的接种:培养基选择及接种方式:标本类型 培养基组合 接种方式痰、咽拭子 血平皿+中国蓝平皿+流感嗜血杆菌平皿 三区划线法尿 血平皿+中国蓝平皿 血:直、曲线法,中:三区划线法分泌物 血平皿+中国蓝平皿 三区划线法大便 SS平皿+TCBS平皿 三区划线法输液液体、腹水、 普通肉汤管 直接倾倒胆汁、胃液、脓液等血、脑脊液、骨髓、 血培养瓶 用注射器注入胸水、关节液培养类别 选择性培养基 接种方式真菌 沙氏培养基 直接划线淋球菌 巧克力淋球菌培养基 直接划线结核杆菌 罗氏结核菌培养管 直接划线L型细菌 高渗肉汤培养管 直接接种霍乱弧菌 碱性蛋白胨培养
2、管 直接接种血培养瓶选择如下:培养瓶瓶的颜色抽血量(ml)标准需氧培养瓶蓝色510标准厌氧培养瓶紫红色510中和抗生素需氧培养瓶绿色510中和抗生素厌氧培养瓶橙黄色5-10小儿血培养瓶浅黄色12结核杆菌血培养瓶黑色510(二)标本涂片和染色1、看湿片(未染色片):正常人体的下呼吸道是无菌的,上呼吸道有正常菌群栖居。下呼吸道标本来源有多种:痰、支气管肺灌洗吸出液、气管抽出液或刷子、肺穿刺或活组织等。痰标本在接种前需涂片镜检,以确认留取的标本是否有临床意义。在低倍镜下计数每低倍视野白细胞和上皮细胞的平均数目,按照以下标准判定标本是否适合做培养:白细胞 上皮细胞 是否适合A: 25 10 是B: 2
3、5 25 是C: 10 25 否不合格的标本应电话告诉临床科室重留标本。霍乱弧菌(投标样动力,运动似流星)2、革兰氏染色:涂片革兰氏染色找细菌:革兰氏阳性菌:球菌(G+C)、杆菌少(G+b)革兰氏阴性菌:杆菌(Gb)、球菌少(GC)涂片革兰氏染色找真菌:找菌丝、孢子菌群分析:大便标本球、杆菌比例.备注:加德纳尔氏菌是细菌性阴道症的主要致病菌之一,此症有如下特点:1)阴道排出物过多;2)阴道PH4。5;3)阴道上皮细胞被G-小b覆盖形成为线索或线球细胞;4)KOH试验阳性:阴道分泌物滴加10%KOH后,立即出现鱼腥味和氨味;3、抗酸染色:查找抗酸杆菌.如结核杆菌、麻风杆菌。4、墨汁染色:查找新型
4、隐球菌。特点:有荚膜,夹膜折光性强。5、看菌落形态:1。肉眼看: 血平皿上:有脐窝状的可能是草绿色链球菌,微黄色可能是奈瑟氏菌,干燥的可能是真菌,乳白色的可能是葡萄球菌,湿润的可能是肠球菌。 中国蓝上:微黄色可能是奈瑟氏菌,有选择性地促进革兰氏阴性菌生长,发酵型革兰氏阴性杆菌因分解乳糖能力不同,在此平皿上的菌落颜色不同。流感嗜血杆菌平皿上:微黄色可能是奈瑟氏菌,(三)转种:1。阳性血培养瓶:1)涂片革兰氏染色:找到细菌向临床科室报告;未找到细菌暂不报告,待转种生长后再报;2)转种:血平皿、中国蓝平皿。2。肉汤管:1)培养3天后仍然透明清亮:转种血平皿一个;2)浑浊:转种血平皿、中国蓝平皿各一个
5、。二、细菌鉴定(视标本、科室而定)(一)标本培养的菌落计数及有意义菌落的筛选1、痰:(1)菌落计数1)只有第一区生长,计103/ml;2)第一、二区生长,第三区不长,计105/ml;3)三个区均生长,计107/ml;(2)菌落筛选1)103/ml :视科别而定,除ICU、CCU、急诊科、老年科和呼吸科危重病号外,一般报告为:无致病菌生长;2)103/ml :除非细菌生长较纯或可能为葡萄球菌需进一步处理外一般报告为:无致病菌生长;3)103/ml :根据菌落形态将其中意义不大的标本报告单发出,一般报告为:无致病菌生长;微黄色报告奈瑟氏菌;血平皿上有脐窝状可能为草绿色链球菌,需做如下鉴定:4)血平
6、皿:草绿色链球菌做OPTOCHIN; 中国蓝:真菌(YBC)转沙氏、种芽管。2、尿:1)菌落计数:定量接种环涂抹法:用10l定量接种环取一环尿液在血平皿上做均匀划线接种,置于3524h培养,计数生长的菌落数,再乘以100,即为每毫升菌落数。菌落生长过多不可计数时,报告105cfu/ml。2)一般情况下细菌数不会超过103cfu/ml,诊断泌尿系感染的细菌学标准是:菌落计数105cfu/ml.3、前列腺液:1)密集生长分纯(选乳白色的菌落)鉴定2)偶有生长报告为:无致病菌生长3)无菌生长报告为:无细菌生长4、大便:中国蓝及SS平板:找细小、无色、透明的菌落KIA试验:血清学鉴定:报告无致病菌生长
7、TCBS平板:黄色菌落氧化酶:+:O/F试验:上机药敏 :报告无致病菌生长 :很少,可能为梅氏弧菌,报告无致病菌生长5、其他标本(血、脑脊液、静脉管等)的细菌鉴定:一般不需计数,只要有细菌生长(污染菌除外),就需进行鉴定处理.三、鉴别试验:1、血平板(链球菌属) 细小、圆形、表面光滑、灰白色、半透明(1)选血平皿上有脐窝状的菌落(可能是草绿色链球菌):在血平皿上做OPTOCHIN(奥卜托欣)试验:1):报告肺炎链球菌 2):报告草绿色链球菌(2)牛奶美蓝试验:1):粪肠球菌 2):手工生化反应组鉴别菌类(3)卫星现象(用金黄色葡萄球菌做):1)血平皿:流感或付流感MH平皿::付流感:无致病菌生
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