植物乳杆菌Zhang-LL与马克斯克鲁维酵母菌M3共发酵葡萄汁酵素的工艺优化.pdf

北京农学院学报2 0 2 4，3 9（1）：7 7-8 3Journal of Beijing University of Agriculturehttp:/doi:10.13473/ki.issn.1002-3186.2024.0115植物乳杆菌Zhang-LL与马克斯克鲁维酵母菌M3共发酵葡萄汁酵素的工艺优化董双佳，刘慧1，金君华1，张红星，杨竹娘，谢远红1*（1.食品质量与安全北京实验室，农产品有害微生物与农残安全检测与控制北京市重点实验室，北京农学院食品科学与工程学院，北京10 2 2 0 6；2.怀来葡缇泉葡萄籽科技开发有限公司，河北怀来0 7 5 4 0 0)摘要：【目的】以葡萄汁为原料，植物乳杆菌Zhang-LL及马克斯克鲁维酵母M3为发酵菌株，优化葡萄汁酵素的发酵工艺条件。【方法】比较植物乳杆菌Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母M3在葡萄汁中的不同接种方式对益生菌活菌数和DPPH清除率的影响，筛选葡萄汁酵素最优接种发酵方式。进一步通过单因素试验及响应面试验，优化葡萄汁酵素最佳发酵工艺条件。【结果】植物乳杆菌Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母M3共发酵可以显著提高葡萄汁酵素中益生菌活菌数和DPPH清除率；植物乳杆菌Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母M3共发酵的最佳工艺条件为：按照1：1比例接种，初始接种量5.0 0 1gCFU/mL、大豆蛋白陈添加量0.4 6%、3 4 发酵18h，植物乳杆菌Zhang-LL活菌数达6.6 0 10 8 CFU/mL，马克斯克鲁维酵母M3活菌数达8.2 0 10 7 CFU/mL，酵素DPPH清除率8 5.2 5%。【结论】乳酸菌与酵母菌协同发酵，在缩短发酵时间的同时还能达到较高的活菌数和DPPH清除率，可为葡萄汁酵素的工业化制备及后续多功能产品研发提供理论依据。关键词：葡萄酵素；植物乳杆菌Zhang-LL；马克斯克鲁维酵母M3；共培养中图分类号：TQ920.6文章编号：10 0 2-3 18 6（2 0 2 4)0 1-0 0 7 7-0 7 文献标志码：AOptimization of grape juice co-fermentation with Lactobacillusplantarum Zhang-LL and Kluyveromyces marxianus M3DONG Shuangjia,LIU Hui,JIN Junhua,ZHANG Hongxing,YANG Zhuniang,XIE Yuanhong(1.Beijing Laboratory of Food Quality and Safety,Beijing Key Laboratory of Detection and Control of Harmful Microorgaismsand Pesticide Safety of Agricultural Products,College of Food Science and Engineering,Beijing University of Agriculture,Beijing 102206,China;2.Huailai Putiquan Grape Seed Technology Development Co,Ltd,Huailai,Hebei 075400,China)Abstract:Objective Using grape juice as raw material,Lactobacillus plantarum Zhang-LL and Kluyveromyces marrianus M3as fermentation strains,this study investigates the effect of different fermentation methods on the number of viable bacteria ingrape juice fermentation broth,and optimizes the fermentation process conditions of grape enzymes.MethodsJ Compare theeffects of different inoculation methods of Lactobacillus plantarum Zhang-LL and Kluyveromyces marzianus M3 on the num-ber of viable bacteria and DPPH clearance rate in grape juice,and screen out the optimal inoculation and fermentation methodfor grape enzymes.Further optimize the optimal fermentation process conditions for grape enzymes through single factor exper-iments and response surface methodology.ResultsJ Co-fermentation of Lactobacillus plantarum Zhang-LL and Maxcrovyiyeast M3 can significantly increase the number of probiotic active bacteria and DPPH clearance rate in grape enzymes;The op-timal process conditions for co fermentation of Lactobacillus plantarum Zhang-LL and Maxcrovyi yeast M3 are as follows:thetwo strains are inoculated in a 1:1 ratio,with an initial inoculation amount of 5.oo Ig CFU/mL,soybean peptone addition a-mount of o.46%,and fermentation at 34 C for 18 hours.The number of viable Lactobacillus plantarum Zhang-LL reaches6.60 X 10 CFU/mL,Kluyveromyces marrianus M3 has a viable bacterial count of 8.20 X 107 CFU/mL,DPPH clearance收稿日期：2 0 2 3-11-0 6基金项目：河北省怀来县科技支撑计划项目（2 0 2 1C-12）第一作者：董双佳（19 9 9 一），女，硕士研究生，研究方向为农产品贮藏与加工通信作者：谢远红（19 7 8 一），博士，教授，研究方向为农产品贮藏与加工78rate 85.25%.ConclusionJThe co-fermentation of lactic acid bacteria and yeast can shorten the fermentation time and achieve ahigh number of live bacteria and DPPH clearance rate,which can provide theoretical basis for the industrial preparation of grapeenzyme and the subsequent research and development of multifunctional products.Keywords:grape enzyme;Lactobacillus plantarum Zhang-LL;Kluyveromyces marxianus M3;co-fermentation随着人民生活水平的不断提升，大家更聚焦于自身健康，因此消费者对酵素的需求也日益旺盛。发展酵素产业符合乡村振兴国家战略需求，可促进地方经济转型升级，推动经济社会高质量发展。对酵素产品的研发也成了推动农产品发展的新道路。葡萄是属于葡萄科的一种藤本植物,果期通常在秋季的八九月份。因其富含多种营养物质及具有清爽的口感被大众喜爱。食用葡萄可能对人类健康产生积极影响，现有研究表明，食用葡萄可以预防或延迟脂肪肝、延长寿命 1，并且具有调节人体内微生物菌群的潜力 2 。葡萄在中国种植面积广泛，酿酒的葡萄占10%，精深加工的葡萄占10%，而鲜食葡萄占将近8 0%3 ，由于新鲜的葡萄储存期较短且在运输中易出现机械损伤，制约了鲜食葡萄的发展。酵素是以水果、植物、中草药等为原料，经微生物发酵制得含有丰富营养成分的发酵产品，酵素富含多种生物活性物质，具有抗衰老、抗氧化及提高机体免疫力等功效 4。目前，在植物酵素产品发酵菌种选择方面，植物乳杆菌、酵母菌和醋酸菌用到的较多。其中,酵母菌是传统的发酵菌种,用酵母菌生产的酵素产品更符合大众口感，发酵方法也比较稳定可靠；植物乳杆菌发酵的酵素产品一般具有更好的风味，并且具有菌株相应的益生功能 5 。而酵母菌与乳酸菌在不同的植物原料中的相互作用共生与促进关系需深人研究，并建立联合发酵植物酵素的工艺。植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum)Zhang-LL作为一种益生菌，能够在肠道中存活,有降血糖的功效 6 ,还能够缓解溃疡性结肠炎 7,并且该菌产生的植物乳杆菌素对革兰氏阳性菌有较强抑制作用 8 。克鲁维酵母属中存在嗜杀酵母，能够抑制腐败酵母的污染，保证良好的发酵体系，从而提高发酵产品的质量 。马克斯克鲁维酵母（Kluyveromycesmarrianus）在产酶、产乙醇及产香方面性能优越 10,1，前期研究还证明藏灵菇克鲁维酵母菌具有降胆固醇的功效和调节肠道菌群平衡的功效 12.13 。植物乳杆菌和酵母菌两者互利共生，植物乳杆菌代谢的乳糖作为酵母生长的碳源，酵母菌生长产生甘露糖，给植物乳杆菌的生长提供营养物质 14 。通过植物乳杆菌和酵母菌的共北京农学院学报同发酵，探究葡萄发酵的工艺条件，为葡萄汁酵素的工业化生产及开发益生功能的酵素产品提供技术参考和理论依据。1材料与方法1.1试剂及材料夏黑葡萄由云南红河产品，植物乳杆菌Zhang-LL保藏菌种CGMCC.693、马克斯克鲁维酵母M3菌种CGMCC.1811由食品质量与安全北京实验室保藏，胰蛋白陈、大豆蛋白陈来自北京奥博星生物技术有限责任公司，酪蛋白陈、明胶蛋白陈青岛高科园海博生物技术有限公司产品，蛋白陈、孟加拉红琼脂培养基、MRS培养基北京奥博星生物技术有限责任公司产品，山梨酸钾河南万邦实业有限公司产品，氢氧化钠由国药集团化学试剂有限公司产品。1.2试验方法1.2.1菌种活化植物乳杆菌Zhang-LL接种于MRS(De Man,Rogosa and Sharpe)培养基,3 7 、180r/min摇床培养12 hl15，马克斯克鲁维酵母菌M3接种于YPD培养基，2 8、15 0 r/min摇床培养2 4 h。分别连续传代2 次得到活化菌种，并采用平板计数后用于葡萄酵素发酵。1.2.2葡萄汁酵素制备选取新鲜夏黑葡萄，清洗晾干后,按照料水比为1：1（g：g）的比例打浆，4000r/min条件下离心10 min，上清液经滤纸除杂质，得到澄清葡萄汁。在过滤好的葡萄汁中添加氮源，调节pH到6.5,利用0.2 2 m滤膜过滤除菌。将活化好的乳酸菌和酵母菌分别按所需接种量，以1：1的比例接种于葡萄汁中发酵。1.2.3菌落计数方法采用倾注平板计数法对植物乳杆菌Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母菌M3进行活菌数测定。将发酵后样品采用生理盐水进行10倍梯度稀释，选择3 个适当稀释梯度，以倾注平板法分别倒人MRS和孟加拉红琼脂培养基平板中，分别于3 7 和2 8 倒置培养2 4 h和4 8 h后进行菌落计数。1.2.4筛选葡萄汁发酵方式分别采用植物乳杆菌Zhang-LL(Z）、马克斯克鲁维酵母菌M3（M）、先接植物乳杆菌Zhang-LL后接马克斯克鲁维酵母菌第3 9 卷2024年第1期董双佳等：植物乳杆菌Zhang-LL与马克斯克鲁维酵母菌M3共发酵葡萄汁酵素的工艺优化M3(Z十M）、先接马克斯克鲁维酵母菌M3后接植物乳杆菌Zhang-LL（M 十Z）、两菌同时接种（G)五种方式进行发酵。发酵条件为：初始接种量2.0 0 X106CFU/mL、发酵温度3 4、发酵时间12 h、添加1%的胰蛋白陈作为氮源，发酵结束后采用平板计数法分别测定乳酸菌及酵母菌活菌数，采用DPPH自由基清除能力检测试剂盒测定发酵液的DPPH活性，由此选出最佳的发酵方式。1.2.5葡萄汁发酵最佳条件筛选1)设定初始接菌量的浓度为2.0 0、3.0 0、4.0 0、5.00、6.0 0 lg C FU/m L，添加1%的胰蛋白陈作为氮源，发酵时间12 h，发酵温度3 4，评价发酵液指标为乳酸菌及酵母菌活菌数，确定两菌最佳接种量。2)氮源分别设胰蛋白陈、大豆蛋白陈、酪蛋白陈、蛋白陈、明胶蛋白陈，添加量为1%，初始接菌量的浓度为5.0 0 lgCFU/mL,发酵时间为12 h,发酵温度为3 4，评价发酵液指标为乳酸菌及酵母菌活菌数，确定最佳氮源添加种类。3）大豆蛋白陈的添加量为0.2 5%、0.5%、0.75%、1%、1.2 5%，初始接菌量终浓度为5.0 0 1gCFU/mL,发酵时间为12 h，发酵温度为3 4，评价发酵液指标为乳酸菌及酵母菌活菌数，确定最佳氮源添加量。4)发酵温度分别设2 8、3 1、3 4、3 7、40，初始接菌量的浓度为5.0 0 lgCFU/mL，添加0.5%的大豆蛋白陈，发酵时间为12 h，评价发酵液指标为乳酸菌及酵母菌活菌数，确定最佳发酵温度。1.2.6Box-Behnken中心组合试验确定初始接种量（A）、氮源添加量(B）、发酵温度（C)3个影响因素，采用Box-Behnken原理设计3 因素3 水平响应面试验,A的低、中、高三个水平分别为4、5、6,B为31、3 4、3 7 C 为0.2 5、0.5、0.7 5，以两菌活菌数为响应值，通过数据分析得出最佳发酵工艺条件，3 次平行试验进行验证。使用Microsoft Excel 2o19对数据进行处理及绘制图表，使用Design-Expert10软件设计Box-Behnken中心组合试验，对结果进行分析并作图。2结果与分析2.1葡萄汁中两菌生长曲线测定结果因葡萄汁中的营养物质与培养基中的大不相同，为更好的了解菌体在葡萄汁体系中的生长状态，以便后续筛选发酵方式选择适宜的发酵时间，将两株菌分别接种在相同体系的葡萄汁中。由图179可知,植物乳杆菌Zhang-LL在葡萄汁中的生长趋势，培养到12 h时到达平稳期，活菌数达到8.7 6 1gCFU/mL;马克斯克鲁维酵母 M3在葡萄汁中2 4 h处于平稳期，活菌数达到8.6 6 lgCFU/mL。若作为工业菌株使用，迅速生长的特性是必要的 16 ，所以植物乳杆菌Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母M3可作为发酵的优良菌株。生长曲线的测定结果为后期筛选发酵方式提供合理的发酵时间。10rZhang-LL M39(Tu/ndO)1/翼8654图1植物乳杆菌Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母M3在葡萄汁中的生长曲线Fig.1 Growth curves of Lactobacillus plantarum Zhang-LL and Kluyveromyces marxianus M3 in grapejuice2.2筛选葡萄汁发酵方式对比先接乳酸菌后接酵母菌（Z十M）、先接酵母菌再接乳酸菌（M十Z、两菌同时接种（G)三种发酵方式，根据2.1测得的生长曲线，固定乳酸菌发酵时间为12 h，酵母菌发酵时间为2 4 h，保证总发酵时间一致，所以共培发酵时间为3 6 h。以乳酸菌及酵母菌活菌数为评价指标，由图2 可见，酵母菌活菌数最多的是G组，活菌数达到8.2 2 lgCFU/mL;乳酸菌活菌数最多的是Z+M组，活菌数达到8.5 6 lgCFU/mL。通过两菌活菌数综合判断,植物乳杆菌Zhang-LL DM310(Tu/nd)a/巢86420图2 不同发酵方式乳酸菌及酵母菌活菌数Fig.2Lactic acid bacteria and yeast viable count underdifferent fermentation methods0Z+M12时间/hM+Z发酵方式2436G4880北京农学院学报第3 9 卷Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母菌M3共培发酵(G)是效果最好的。分析对比单菌发酵和共培发酵液的抗氧化活性，其羟自由基清除率结果如图3，植物乳杆菌(Z)和马克斯克鲁维酵母菌（M)单独发酵液的DPPH(联苯基-1-苦基基自由基)清除率分别为5 3.4 2%和3 1.4 4%。先接乳酸菌后接酵母菌（Z十M）和先接酵母菌再接乳酸菌(M+Z)发酵液的DPPH清除率分别为4 2.18%和5 0.3 6%，均显著低于共发酵组(G)发酵液DPPH清除率7 8.9 5%。本结果表明植物乳杆菌Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母菌M3共90r8070%/率塑Hdda6050403020100Z+MM+Z发酵方式图3 不同发酵方式葡萄酵素的DPPH清除率Fig,3 DPPH clearance rate of grape enzymes under dif-ferent fermentation methods10 Zhang-LL 口 M386420Fig,4The effect of initial inoculation amount and different nitrogen sources on the viable count of lactic acid bacteria and yeast2.3.22氮源添加量及发酵温度对葡萄汁发酵液活菌数的影响氮源添加量的高低会影响乳酸菌及酵母菌活菌数的多少，氮源添加过低不能够满足菌体生长所需的营养，而氮源过量会引起菌体生长过于旺盛，早早的进入衰亡期。由图5 可知，在大豆蛋白陈的添加量为0.5%时，植物乳杆菌Zhang-LL的活菌数达到最高的2.5 7 10 CFU/mL，马克斯克鲁维酵母M3活菌数达到3.6 0 10 7 CFU/mL。发酵温度过低菌体生长代谢缓慢，温度过高也会影响发酵可以显著提高酵素产品的抗氧化性。综上，本研究表明，相对于单独采用植物乳杆菌Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母菌M3发酵葡萄汁，两株菌同时混合共发酵可以显著提高酵母菌活菌数、酵素DPPH清除率。2.3葡萄汁发酵工艺优化2.3.1初始接菌量及不同氮源对葡萄汁发酵液活菌数的影响试验结果如图4 所示，当发酵体系中营养物质在接种量过低时不能被完全利用，反之营养物质会在接种量过大时迅速消耗，不仅会降低发酵速率还会造成资源浪费。工业化生产为前提，以节约成本来看，当接种量为5.0 0 lgCFU/mL时，葡工萄汁发酵液中植物乳杆菌Zhang-LL活菌数达到最高为2.6 7 X10CFU/mL，马克斯克鲁维M3酵母菌活菌数达次之为3.4 7 10 CFU/mL。葡萄汁中含有糖类、氨基酸和维生素等营养物质，但只有微量的蛋白质，对于乳酸菌和酵母菌生长，氮源是必不可少的，为了使菌能够更好的生长繁殖，在葡萄汁的发酵体系中添加不同氮源，以探究不同氮源对MG23接种量/Ig(CFU/mL)右图1.胰蛋白陈；2.大豆蛋白陈；3.酪蛋白陈；4.蛋白陈；5.明胶蛋白陈图4 初始接种量及不同氮源对乳酸菌和酵母菌活菌数的影响活菌数的影响，发现添加大豆蛋白陈作为氮源，可以使两菌活菌数达到较高水平，植物乳杆菌Zhang-LL的活菌数达到2.3 3 X10CFU/mL，马克斯克鲁维酵母M3活菌数达到5.4 0 X107CFU/mL。10rZhang-LL M3(Tu/n)a/深翼864204561菌体生长，还会影响酶的活性甚至使酶失活 19 ，共培发酵中的植物乳杆菌Zhang-LL在2 8 3 4 的活菌数保持在较高水平，在3 7 时开始小幅下降，40迅速降低。共培发酵中的马克斯克鲁维酵母M3在2 8 4 0 随温度上升活菌数也随之增多，温度升高会增加企业生产成本，综合考虑选择3 4 为最佳发酵温度，此时植物乳杆菌Zhang-LL测得活菌数为3.18 X10CFU/mL，马克斯克鲁维酵母M3测得活菌数为2.6 0 X10CFU/mL。23氮源种类452024年第1期董双佳等：植物乳杆菌Zhang-LL与马克斯克鲁维酵母菌M3共发酵葡萄汁酵素的工艺优化8110(Tu/nd0)a/x鼻864200.25Fig.5 The effect of addition amount and fermentation temperature on the viable count of lactic acid bacteria and yeast2.4Box-Behnken中心组合试验结果2.4.1试验设计结果及分析用Design-Expert10软件进行Box-Behnken中心组合试验设计及结果处理，对17 组BB试验的数据进行回归分析，Tab.1 Analysis of variance of the regression model for the number of live strains of Lactobacillus plantarum Zhang-LL方差来源模型A-接种量B-发酵温度C-氮源添加量ABACBCA2B2C2残差失拟项误差总计Tab.2Analysis of variance of the regression model for the number of live strains of Kluyveromyces marxianus M3方差来源显著性模型45.98A-接种量2.20B-发酵温度1.62C-氮源添加量2.20AB7.84AC1.69BC2.56A28.08B29.92C26.95残差0.76失拟项0.55误差0.21总计46.74Zhang-LL M30.5氮源添加量/%图5 氮源添加量及发酵温度对乳酸菌和酵母菌活菌数的影响表1植物乳杆菌 Zhang-LL活菌数回归模型的方差分析平方和自由度67.0593.08113.6010.08210.6310.1110.22110.48123.55110.3811.0170.8230.19468.0616表2 马克斯克鲁维酵母M3活菌数回归模型的方差分析平方和自由度91111111117341610(Tu/nd0)a/原翼864200.751Zhang-LL OM31.2528Zhang-LL活菌数回归模型的方差分析如表1所示，M3活菌数回归模型的方差分析如表2 所示，模型具有良好的可靠性和可行性，可用此模型对发酵条件进行分析及预测。均方和F7.4551.663.0821.3213.6094.280.0820.570.634.380.110.730.221.5310.4872.6523.55163.2910.3871.960.140.270.048均方和5.112.201.622.207.841.692.568.089.926.950.110.180.05231发酵温度/P0.00010.00240.00010.47540.07460.42040.255 80.00010.00010.00015.680.0633FP47.180.000120.360.002814.960.006120.360.002872.400.000115.610.005523.640.001874.590.000191.620.000164.21接种量（A)氮源添加量(C)。因素变量的一次项和二次项均对葡萄汁发酵液中M3活菌数有极显著的影响。3 个因素对酵母菌活菌数的影响为：接种量（A）=氮源添加量(C)发酵温度(B)。2.4.2响应曲面图分析根据响应值与各因素构成的三维曲面图(图6)的坡度可知两因素的交互程北京农学院学报度，因变量对响应值影响越大，曲面越陡，反之曲面越平缓。a组为Zhang-LL曲面图,b组为M3曲线图，两组图均为开口向下的响应面图，说明随着变量因素的增加，响应值也随之增加，到达最大值后，响应值随着变量因素的增加而减少。虽结合表2 分析出a组两两交互作用不显著，但结合表3 分析出b组两两交互极显著，可对活菌数产生影响，综合分析后，两因素间交互作用对葡萄汁发酵液的影响大小依次为ABBCAC。第3 9 卷7654327654321176543244.55.5A:接种量(CFU/mL5.354.55A:接种量(CFU/mL)9876154323132333435B:发酵温度()Fig.6 Response surface of the interaction between various factors on the number of viable bacteria in grape juice fermentation broth将数据拟合分析，以葡萄汁发酵液中活菌数为指标,用Design-Expert10软件，分析预测得到葡萄汁发酵液最佳参数为：接种量5.2 5 lgCFU/mL，发酵温度3 3.7 4，氮源添加量0.4 5 7%，预测以该工艺参数发酵后植物乳杆菌Zhang-LL活菌数达到6.80X108CFU/mL，马克斯克鲁维M3活菌数达到8.4 1X10?CFU/mL。考虑操作的可行性，发酵条件修改为：接种量5.0 0 1gCFU/mL、发酵温度为34、氮源添加量0.4 6%。进行3 次平行试验来验证响应面分析的可行性和可靠性，依照调整后的最佳工艺参数进行，最终测定植物乳杆菌 Zhang-LL活菌数为6.5 0 X108CFU/mL，马克斯克鲁维酵母菌M3活菌数为8.2 0 X10CFU/mL，此时葡萄酵37B:发酵温度()3 3,32元6 0.25.0.350.45 0.55.0.650.75,C:氮源添加量(%)a987654244.5363765.5A:接种量(CFU/mL)图6 各因素间交互作用对葡萄汁发酵液活菌数影响的响应面0.25310.750.65 0.55 0.450.35C：氨源添加量（%)98765424.55C:氮源添加量(%)b素的DPPH清除率为8 5.2 5%。3 结 论该试验以葡萄为原料，根据植物乳杆菌Zhang-LL及马克斯克鲁维酵母M3在葡萄汁中的生长趋势，选择适宜的发酵时间进行后续发酵方式的筛选，以发酵后两菌活菌数和DPPH清除率作为指标,确定植物乳杆菌Zhang-LL和马克斯克鲁维酵母M3共培养为最佳发酵方式。通过单因素试验和响应面试验优化葡萄汁发酵工艺，得出最佳工艺条件为：初始接种量5.0 0 lgCFU/mL、大豆蛋白陈添加量0.5%、3 4 发酵18 h，此时葡萄汁发酵液中植物乳杆菌Zhang-LL活菌数达6.6 0 10 8 CFU/334353637C：氮源添加量（%）2024年第1期董双佳等：植物乳杆菌Zhang-LL与马克斯克鲁维酵母菌M3共发酵葡萄汁酵素的工艺优化mL,马克斯克鲁维酵母M3活菌数达8.2 0 X107结肠炎预防效果评价 D.北京：北京农学院，2 0 19.CFU/mL,酵素DPPH清除率达到8 5.2 5%。该研81郝艳芳.植物乳杆菌素的鉴定及其对食品中单增李斯特菌的抑制作用研究 D.北京：北京农学院，2 0 18.究建立的植物乳杆菌Zhang-LL及马克斯克鲁维酵9 贾仁洁.季也蒙毕赤酵母GZ1菌株嗜杀因子的初步研究 D.母M3共发酵生产葡萄汁酵素的发酵工艺技术简青岛：中国海洋大学，2 0 13.单，酵素产品抗氧化效果显著提升，对于葡萄汁酵10高教琪，韩锡铜，孔亮，等.马克斯克鲁维酵母在工业生物技素的工业化生产及开发具有益生功能的酵素产品术中的应用 J.中国生物工程杂志，2 0 14，3 4（2）：10 9-117.提供技术参考和理论依据，具有一定的市场应用11LI P S,TAN X W,FU F,et al.Metabolomic analysis reveals前景。Kluyveromyces maraianuss stress responses during high-temperature ethanol fermentationJJ.Process Biochemistry,2021,102:386-392.参考文献：12刘慧,陈湘宁,李晨，等.藏灵菇酵母菌M3耐胃肠道逆环境特1 PARANDE F,DAVE A,PARK E J,et al.Effect of dietary性及降胆固醇的实验研究 J.中国农学通报，2 0 0 9,2 5（15）：grapes on female C57BL6 mice consuming a high-fat diet:Be-60-63.havioral and genetic changes J.Antioxidants（Ba s e l),13 董牧群，熊利霞，谢远红，等.藏灵菇源克鲁维酵母菌M3调节2022,11(2):414.大鼠肠道菌群平衡的研究J.食品科学，2 0 16，3 7（0 5）：2J DAVE A,BEYOGLU D,PARK E J,et al.Influence of grape197-201.consumption on the human microbiomeJJ.Sci Rep,2023,1314王迪，王颖，张艳莉，等.芸豆酵素复合发酵工艺优化 门.食品(1):7706.与机械，2 0 19，3 5（10：2 0 6-2 0 9+2 3 6.3李小红，李运景，马晓青，等.我国葡萄产业发展现状与展望J.中国南方果树，2 0 2 1,5 0（5）：16 1-16 6.4（GUAN Q Q,XIONG T,XIE M Y.lnfluence of probiotic fer-mented fruit and vegetables on human health and the relatedindustrial development trendJl.Engineering,2021,7(2):174-188.5俞曼玲，黄晶晶，韩金志，等.植物乳杆菌发酵豆薯的营养及挥发性成分变化.食品研究与开发，2 0 2 3，4 4（17）：6 1-6 7.6王姬宇，刘慧，张红星，等.植物乳杆菌Zhang-LL抑制-葡萄糖苷酶活性研究 J.北京农学院学报，2 0 18 3 3（4）：10 8-112.7 吴思琪.植物乳杆菌Zhang-LL对DSS诱导大鼠慢性溃疡性8315白永强，于立娟，周慧敏，等.植物乳杆菌Zhang-LL高密度发酵的研究 门.中国农学通报，2 0 15，3 1（3 1）：2 8 5-2 9 0.16王帅静，李啸，刘玲彦，等.西藏托牛类和乳源中益生菌的筛选与鉴定J.中国酿造，2 0 2 1，4 0（7）：4 3-4 8.17闫彬.一组乳酸菌与酵母菌共生关系和风味代谢产物的研究D.呼和浩特：内蒙古农业大学，2 0 12:2 0-2 1.18 PABLO A,ANA B,ANA H.Interaction between dairy yeastsand lactic acid bacteria strains during milk fermentationJ.Food Control,2018,19(1):62-70.19 袁丽环.固体发酵玉米秸秆产纤维素酶条件的优化 J.陕西农业科学，2 0 11,5 7(2)：13-14 十4 7.